1、EDTA2Na（乙二胺四乙酸二钠）检验方法的探讨摘要：下文主要结合笔者多年的工作实践经验，利用水提取食品中EDTA-2Na，加入还原剂使 EDTA与铜形成络合物，利用液相色谱仪检测其络合物峰。加入三价铁，使 EDTA-Cu络合物分解形成 EDTA-Fe络合物，来确证 EDTA的存在。该方法定性定量准确，测定过程快速。 关键词：材料与方法 EDTA-2Na 结果 引言 EDTA-2Na GB 2760-2011食品添加剂使用标准定义其功能类别为鳌合剂、防腐剂、抗氧化剂、加工助剂，易溶于水，不溶于乙醚。其主要原理是食品中金属离子的存在会促使某些食品变质，EDTA-2Na 能螯合溶液中的金属离子，防
2、止金属引起的变色、变质、变浊和 VC的氧化损失，还能提高油脂的抗氧化性（油脂中的微量金属如铁铜等能促进油脂氧化的作用） ，用于罐头类食品可保持色、香、味，还可用于酱菜、罐头的稳定和凝固剂。 但是 EDTA对人体有害，其 ADI值为 0.205mg/kg，国外对 EDTA在食品中的残留量有严格的限量规定。日本规定罐头食品中 EDTA的残留（以EDTA-2Na计）不得超过 250mg/kg，饮料中不得超过 35mg/kg。我国GB2760-2011在酱菜和罐头中规定不得超过 0.25g/kg。测定不同介质中EDTA的方法有比色法、滴定法和高效液相色谱法、离子色谱法等。滴定法和比色法很难将 EDTA
3、络合物和其他络合物区分，测定结果不能令人满意。高效液相色谱法是通过检测 EDTA的金属络合物 EDTA-Fe或 EDTA-Cu对 EDTA进行测定，本文通过对 EDTA-Cu进行测定，又利用 EDTA-Fe络合物的稳定系数高于 EDTA-Cu络合物而加入三价铁，使 EDTA-Cu络合物分解形成 EDTA-Fe络合物，来确证 EDTA的存在。 1、材料与方法 1.1 仪器： Agilent1200 高效液相色谱仪（配有二极管阵列检测器） ；超声波清洗仪 FS-1012FPM（常州市富怡达超声波设备有限公司） 1.2 试剂： 四丁基溴化铵、抗坏血酸、甲醇（色谱级） ；除另有规定外，试剂均为分析纯，
4、水为去离子水。 CuSO4 溶液：称 1.6g（精确至 0.0001g）硫酸铜放入 100mL的容量瓶，加去离子水定容，充分摇匀； FeCl3 溶液：将 1.62g（精确至 0.0001g）三氯化铁用去离子水定容至 100mL，充分摇匀。标准液的制备 Na2EDTA标准储备液（1000g/mLEDTA）：精确称取称 0.1g（精确至 0.0001g）Na2EDTA，放入 100mL容量瓶，用去离子水定容。标准工作液：配制0.5、10、25、50、100g/mL 浓度的 EDTA标准溶液混匀后于室温环境下放置 2024h 使用。 1.3 样品处理方法 精确称取 5g（精确至 0.0001g）试样
5、于 50mL具塞试管中，加入 20mL水，超声提取 10min，充分提取后加抗坏血酸 20mg和 3mLCuSO4溶液，用水定容。在室温下放置 2024h，用 0.45m 滤膜过滤，滤液供液相色谱测定。 做确证试验时在上述滤液中加入 5mLFeCl3溶液，放置 20min，液相色谱测定观察特征峰的位置变化。 1.4 仪器条件 色谱柱：AgilentTC-C18，5m，150mm4.6mm；流动相：A0.03mol/L 乙酸钠溶液和 0.02mol/L四丁基溴化铵水混合液，用磷酸调节 pH=4；B甲醇；A：B=75：25。 流速：1.0mL/min；进样量：20L；柱温：25，检测波长：254n
6、m。 2、结果与分析 2.1 线性关系 在本方法所确定的条件下，EDTA 在 0.5100g/mL 范围内进行色谱测定，并绘制标准曲线，得色谱峰面积（y）与质量浓度（x，g/mL）得线性方程为 y=10.113x-0.0034，相关系数 r=0.99964。试验结果表明，本方法所选添加均在方法的线性范围内。 2.2 精密度及回收率实验 采用样品添加法测定回收率及精密度。在榨菜中分别添加7g/mL、20g/mL、40g/mL 三个水平的 EDTA，平均回收率分别为：91.6%、95.5%、98.8%（n=6） ，RSD 分别为：2.5%、2.4%、1.6%；在水果罐头中分别同样三个水平的 EDT
7、A，平均回收率分别为：93.3%、95.9%、98.7%（n=6）RSD 分别为：2.2%、2.8%、2.2%；在饮料中分别添加同样三个水平的 EDTA，平均回收率分别为：96.3%、97.1%、97.6%（n=6）RSD 分别为：1.3%、1.9%、1.6%，在酱菜中分别添加同样三个水平的 EDTA，平均回收率分别为：93.8%、95.5%、97.8%（n=6）RSD 分别为：2.5%、2.2%、2.4%。 2.3 样品处理方法的选择 处理条件的确定因为 EDTA络合物系水溶性，因此可以用水来提取，这样即节约成本又能够减少有机溶剂的使用量从而保护环境，提取液中加入还原剂使 EDTA与铜形成络
8、合物，经过这样的处理后样品的测定能够达到非常满意的回收率。 另外在样品处理过程中我们选择了 1、2、3、4、5mLCuSO4 溶液，1、2mLCuSO4 溶液与标准溶液反应测得的 Cu-EDTA络合物峰面积远远小于3、4、5mLCuSO4 溶液测得的 Cu-EDTA络合物峰面积，3、4、5mLCuSO4 溶液测得 Cu-EDTA络合物峰面积差不多，故而选择加入 3mLCuSO4溶液。 2.4 仪器条件的选择 文献报道的色谱条件有的需要在较低的 pH环境下测定，有的则要求较高的柱温，本实验摸索了流动相条件，利用 TC-C18柱在室温条件分离后进行检测，试验表明，EDTA-Cu 络合物在 254n
9、m时有较大的吸收，故确定 254nm为检测波长。其色谱图和光谱图见图 1和图 2。 图 1 乙二胺四乙酸标准品色谱图 图 2 乙二胺四乙酸标准品光谱图 2.5 确证实验 根据 EDTA-Cu和 EDTA-Fe稳定系数的差异，可以确证是否存在EDTA，若存在 EDTA，按照测定方法可以检测到 EDTA-Cu络合物的色谱峰（见图 3） ，但是若在供 HPLC分析的试液中加入 Fe2（SO4）3 溶液，EDTA-Cu络合物将分解，形成更加稳定的 EDTA-Fe络合物（见图 4） 。用此方法可以确证 EDTA的存在。 图 3 样品中形成 EDTA- Cu络合物的色谱图 图 4 确证实验形成更稳定的 E
10、DTA- Fe络合物色谱图 2.6 方法检测限 本方法对花生酱、罐头、饮料、榨菜样品进行了定量测定，测定低限均为 5mg/kg. 3、结论 本实验采用高效液相色谱检测食品中添加剂 EDTA的残留量，以保留时间定性与外标法定量。EDTA-2Na 在 0.5100g/mL 的浓度范围内，线性相关系数 R为 0.9996，加标回收率在 91.6%98.8%之间，相对标准偏差为 1.32.8%。该方法准确度、精密度均较高。 参考文献： 1 吕晓华，文红，许红琴等. 高效液相色谱法测定板栗罐头中乙二胺四乙酸二钠的含量J.中国卫生检验杂志，2009（03）4546. 2 郑睿行，张旭，方芳等. 高效液相色谱法测定酱腌菜制品中 EDTA 残留量J.中国食品添加剂，2011（02）6061.
