1、法医病理学组织切片制作 HE染色切片一、目的要求 掌握取材、固定、水洗、脱水、透明、浸蜡与包埋，切片制作。（一）取材1.取材快，新 鲜 ，防止 组织 腐 败 。2.取材刀 锋 利，垂直地切取， 严 禁 挤压 或用 钳镊钳夹 ，以免使 组织 或 细 胞 变 形造成人 为 的破坏。3.取材大小， lcm 3cm 1cm 2cm 0.3cm0.5cm。 材料 过 大在短 时间 内不易固定透，影响效果。 （二）方法：1. 实质器官心脏： 心房、瓣膜、心室。可分别取病变部位带正常组织。可单独取心室肌，乳头肌， 3 5块。肺脏： 左右两肺（五个肺叶）；可根据病变需要决定取材块数，特殊情况下为区别在不同肺叶
2、上取材，可用形状做标志在记录时记清楚， 5 7块。肾脏： 取材包括被膜、皮质、髓质和肾盂，应区别左右肾， 2 4块。胰腺： 取胰体部，必要时加取胰头、胰尾， 2块。肝脏： 取长方形或三角形， 2 3块。脾脏： 取材带被膜， 2 3块。 脑： 全脑（桥脑、延脑、小脑）、脊髓颈段及脉络丛，十一块，或根据具体情况决定： 额极； 前后中央回； 海马； 内囊； 丘脑； 枕叶； 脉络丛； 桥脑； 延髓； 中脑； 小脑。取材时要带上软脑膜、脑室膜或软脊膜因此刀要锋利。需要时取脊髓。垂体： 前、中、后叶和垂体柄，从前向后横切。 2管腔脏器：取材时注意方向，取管腔脏器的全层构造。大肠、小肠： 应考虑环行皱襞，沿
3、肠管的长轴取（纵切）。食管、气管： 横切面为宜。胃： 常规取胃底。取材后应将被膜面铺在滤纸上，然后入固定液内，防止或减少组织受压变形与收缩。 有病变的部位，应附带周围正常组织取材。二、固定 （一）意义： 是做好切片的重要步骤之一，如果首次组织固定不良，再重新固定效果不佳。检材固定的关键：取材后尽可能地及时地将所取的材料进行固定，以防止其 “ 死后 ” 变化的进展，尽力使组织接近于生前状态。为了防止组织结构及成份的破坏和溶解消失，需要使其转变为不溶性物质，有利于组织结构保存 -固定的基本意义。 固定的目的：1. 阻止死后变化，防止组织的自溶与腐败。2保存组织的结构及成份。3媒染作用，使不同的组织
4、成份对染料有不同亲和力，使细胞各部易于受色。4能使组织硬化，为制作薄切片奠定基础。注意： 材料块不能过大，固定器皿不易过小，固定液量不易过少，应是固定材料体积的 20一30倍。（二）固定液：根据检验目的不同选择不同种类固定液，如糖原检查：不含水的固定液；电镜检查：锇酸固定液等； HE染色：甲醛。固定液： 用以固定组织的药剂。固定液分类 ：单纯固定液，由一种药剂组成；混合固定液（或复合），由二种以上的药剂组成。1选择固定液的标准： 具有强的穿透力，固定均匀，能迅速渗透到组织内部使组织细胞结构保持生活状态。 不使组织过度收缩与膨胀而变形。 能迅速使组织中的蛋白质、糖、脂肪等物质凝固成为不溶性物质。
5、 使组织达到一定的硬度便于切片制作。 价格便宜，易 购 买 ，配制方便。 2单纯固定液乙醇（酒精 ）、 甲醛（福尔马林 ）、 重铬酸钾 、 苦味酸 、 锇酸 、 丙酮、 冰醋酸（ 1）乙醇（酒精）（ alcohol）优点： 价格低，易购买，易溶于水，使用方便， 95浓度，无水乙醇 100； 市售有两种： 100%； 95%； 能硬化组织起固定作用； 也是一种最常用的脱水剂。固定用浓度在 70 80，酒精浓度愈大组织收缩愈严重，浓度过低起不到固定作用。缺点： 穿透力小，由于被固定的组织表面硬化，固定液不容易渗透到组织中去，所以用乙醇固定的组织材料要小。 使组织严重收缩。 由于酒精能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，核蛋白的沉淀物易溶于水，使细胞核核色不佳。 溶解脂肪、血红蛋白和多种色素，脂肪染色必须制作冰冻切片。
