1、第一部分：微生物的应用一、实验原理尿素 NH3中性 碱性如何判断尿素被分解了呢？用酚红指示剂(变色范围 PH6.4-8.2)酚红颜色 ： (酸性 )黄色 （碱性） 红色二、实验目的二、实验目的1、使用以尿素为、使用以尿素为 唯一唯一 氮源的培养基分离细菌氮源的培养基分离细菌 (有有脲酶脲酶 )2、通过指示剂、通过指示剂 （酚红）颜色的变化（酚红）颜色的变化 检知培养基检知培养基 pH的变化的变化 (脲酶催化的化学反应脲酶催化的化学反应 )问：有脲酶的细菌在生态稳态上起什么作用？土壤中的尿素在较高温度下会被水解成氨，氨使土壤碱化，氨还与 SO42-等离子形成化合物，使土壤板结。而脲酶的细菌不仅使
2、动植物尸体降解，而且利用了所形成的氨， 有利于自然界中氮的循环。实验步骤 (1) 灭菌 ：将配制好的 150mlLB用 法灭菌的固体培养基和用 法灭菌的 培养基分别装入两个 250ml的三角瓶中，加上封口膜。 (2) 制平板 ：在 旁将固体培养基分别倒12个平板，待凝，使之形成平面。 (3)制备一定浓度梯度的细菌悬液 (4) 涂布分离法分离细菌 ：将 0.1ml的不同浓度稀释液分别加到两种培养基上，再将保存在 酒精中的 在酒精灯上引燃、冷却后涂布，培养皿 ，放在 恒温培养箱中进行培养 h。观察 。三 .实验步骤 .倒平板倒平板 .制备一定浓度梯度的细菌悬液制备一定浓度梯度的细菌悬液 g土壤土壤
3、 ml无菌水，振荡，为无菌水，振荡，为 -2稀释液，依次制备稀释液，依次制备 -3、 -4、 -5的土壤稀释液。的土壤稀释液。 .稀释涂布分离法分离细菌稀释涂布分离法分离细菌 .制备无菌的固体培养基和尿素固体培养基制备无菌的固体培养基和尿素固体培养基 P26 .培养观察培养观察 （倒置，（倒置， 37 24-48h ）（无菌，（无菌， 0.1ml，玻璃刮刀），玻璃刮刀）（一）配制培养基 尿素培养基葡萄糖 0.025gNaCl 0.12gK2HPO4 0.12g 琼脂糖 0.5g酚红 0.25g尿素 10ml LB培养基蛋白胨： 0.25g酵母提取液： 0.12gNaCl： 0.25g琼脂糖 ： 0.5g 对照组选择培养基选择培养基实验组为什么用琼脂糖代替琼脂？怎么获得无菌的尿素溶液？因为琼脂是未被纯化的混合物，内含一定量的含氮化合物。琼脂糖是琼脂纯化的产物。（固化作用）（作为氮源）（二）倒平板 需要倒 3个 LB平板， 9个尿素平板LB(对 照)尿素10-210-310-4每个稀释度 1个 LB对照平板 3个尿素平板 (平行重复组 )（三）制备细菌悬液（三）制备细菌悬液接种 取 0.1ml菌悬液
