1、实验五 血凝及血凝抑制 实验 实验目的血凝试验:滴定病毒的血凝效价 (病毒的凝集价 ),采用一定的病毒量,通常采用 4个血凝单位。血凝抑制试验:应用标准病毒液测定血清中的相应抗体或应用特异性抗体鉴定新分离的血凝性病毒检测实验用鸡群有无病毒感染和监测鸡的免疫状态。 掌握基本操作技术 ,了解其实用价值 实验原理血凝素( HA)柱状流感病毒结构模式图刺突:亚型特异性抗原,易变异血凝素( HA,从 H1H15): 呈柱状功能: 吸附细胞:与细胞上受体结合 ,使病毒 侵入细胞 凝集多种动物的红细胞(血凝试验) 具抗原性:其抗体能中和病毒 -中和抗体抑制血凝(血凝抑制试验)血凝试验原理o 血凝素( hem
2、agglutinin HA): 由病毒基因编码的糖蛋白刺突。o 与病毒吸附和传入宿主细胞有关。o HA能与人或其它动物多种红细胞表面 N 乙酰神经氨酸酶受体结合引起红细胞凝集。o 为病毒的 红细胞凝集反应或血凝反应。血凝原理 血凝抑制原理血凝抑制试验原理病毒引起的血凝现象能被相应的抗血凝素抗体所抑制, 即抗体与病毒结合后,血凝素无法吸附于红细胞表面的受体上,用免疫血清阻止红细胞凝集的现象,称为 血凝抑制 实验材料器材: U型或 V型微量反应板、微量移液器、枪头试剂: 1%鸡红细胞、 NDIV血凝素、 NDIV抗血清、生理盐水实验步骤1.取 96孔 V型反应板 1块置于水平实验台上,在第 1排 1-10孔内加入 25ul生理盐水,第 11孔不加。第 12孔加25ul生理盐水2.在第 1孔内加入血凝素 25ul,混匀后吸出 25ul加入第2孔内,再混匀后吸出 25ul加入第 3孔内,依次类推至第 10孔时弃掉 25ul。第 12孔不加作阴性对照孔。