1、病理诊断技术南京农业大学 动物医学院动物病理学科l 一、病理切片制作技术l 二、病理组织诊断技术病理切片制作技术l 第一章 组织的取材和固定方法 l 第二章 组织切片技术 l 第三章 苏木精 -伊红染色方法第一章 组织的取材和固定方法l 病理标本的检查应包括 大体和显微镜 下观察二个方面，而正确的诊断往往取决于准确的显微镜下观察，因此，制片质量的好坏将直接影响诊断结果的准确性，甚至会带来错误的结果。l 近年来，免疫组织化学方法在病理学上应用越来越广泛，对取材的要求也越来越高，不仅要求组织细胞的形态保存完整，而且要求最大程度的保存组织或细胞成分的抗原性。抗原性不受损伤是一方面，还要求不能弥散，否
2、则，对于抗原含量较少的标本，抗原性完全丧失，产生假阳性结果，影响病理诊断的准确性，甚至抗原的定位也无从谈起。第一节 取材 从大体标本上按照病理检查的目的和要求切取适当大小的组织块，供制片进行显微镜检查。l 一、取材时对送检组织的要求l 二、取材l 三、取材时的注意事项l 四、冰冻切片取材一、取材时对送检组织的要求l 送检组织切取后应立即放入 10%福尔马林溶液内固定；l 尸检标本应争取在死亡后尽可能短的时间内取材；l 有特殊要求（如细菌培养、结石的化学成分分析等）须事先联系，在标本未固定前进行处理。二、取材对送检组织应进行详细检查，根据诊断的需要，确定取材的部位和块数；切取的组织要按不同部位分
3、别给予不同的编号或标记，以便镜检时查对。三、取材时的注意事项l 1注意防止人为损伤 切取组织的刀具应锋利、薄；切取组织块时，避免前后拉动或用力挤压组织，避免使用有齿镊，引起组织结构的变形和损伤。l 2标本大小 经修整后的组织大小以 1.5 cm 1.5 cm 0.2-0.3 cm 为宜。l 3取材时间 原则上应尽快取材。l 4注意包埋方向 需指定包埋面的应作记号表明。如皮肤组织的包埋面应与表面垂直，才能保证皮肤的各层结构都能被观察到。l 5小标本的处理方法 较小的标本（如穿刺材料等）常常用易透水的薄纸包好，在取材时将标本染上伊红液，以免包埋过程中丢失。l 6注意特殊情况 取材应避免过多的坏死组
4、织或凝血块，组织块上如有血液、粘液、粪便等污物，应先用水冲洗干净再取材。l 7取材数量 不同的标本取材的组织块多少不同，原则上是凡是可疑处均应取材。一般来讲，除了病变的主体部分外，应注意切取病变组织和正常组织交界处。l 8清除多余部分 取材时应注意清除组织周围的多余脂肪组织，否则会对以后的切片和观察带来一定的影响。l 9核对 取材完毕，应核对无误，并签署有关信息和记录日期。l 10组织存放 取材完毕，标本应按序存放，并加足固定液以备复查。 四、冰冻切片取材（一）取材l 在详细检查的基础上选取最有代表性的组织，必要时应取 2块或更多组织块。取材后应立即用液氮速冻，然后在 -70 或 -40 低温冰箱保存。l （二）注意事项l 1液氮速冻时，标本盒不能直接浸入液氮，以免组织膨胀破碎。l 2新鲜组织不能放入 -10 冰箱内缓慢冷却，否则组织内水分可逐渐析出形成冰晶，造成组织结构破坏。l 3冷冻后的组织块应密封保存，防止脱水。l 4在组织块复温时，应在 37 加温速融，自然复温将造成组织结构破坏。第二节 固定方法 l 将组织浸入某些化学试剂，使细胞内的物质尽量接近其生活状态时的形态结构和位置，这一过程称为固定。凡需病理检验的各种组织都需经过固定。l 一、固定的意义l 二、固定方法的选择 l 三、固定液
