1、第五章 核酸类药物第一节 概述核酸 是以核苷酸为基本组成单位的生物大分子，携带和传递遗传信息。98%分布于细胞核，其余分布于核外如线粒体，叶绿体。主要 分布于 细胞质（ 90%），剩余 10%位于细胞核 。(deoxyribonucleic acid, DNA)(ribonucleic acid, RNA)脱氧核糖核酸核糖核酸携带遗传信息，决定细胞和个体的基因型 (genotype)。参与细胞内 DNA遗传信息的表达。某些病毒 RNA也可作为遗传信息的载体。核酸碱基戊糖核苷磷酸核苷酸核酸类药物 是具有药用价值的核酸、核苷酸、核苷以及碱基的统称。除了天然存在的碱基、核苷、核苷酸外，它们的类似物、
2、衍生物或这些类似物、衍生物的聚合物也属于核酸药物。一、 RNA的制备（一）材料的选择与预处理制备 RNA的材料要选择含核酸量丰富的组织。RNA的含量和细胞的活跃程度有关，在蛋白质合成旺盛的细胞中，其 RNA的含量也相应地较高。第二节 核酸类药物的一般制备方法组织匀浆沉淀物（ DNA、蛋白质等）上清液（ RNA等）残留物（ DNA等）酸提取液（ RNA）碱处理酸处理残留物脂溶性物质有机溶剂处理残留物酸溶性小分子冷酸处理1. 酸处理法将经酸和有机溶剂处理后的残留物用 1mol/L的过氯酸液于 4 下处理 18 h，从中抽提出 RNA，沉淀部分再用0.5mol/L的过氯酸液 70 下处理 20 mi
3、n提取 DNA。此法的 缺点 是有些材料的 DNA在冷过氯酸抽提时被少量提取，从而使 RNA部分中混有少量的 DNA。2. 碱处理法将残留物用 1mol/L的 NaOH溶液于 37 处理过夜，则 RNA被碱解为碱溶性核苷酸， DNA不溶解。加入过氯酸或三氯乙酸使溶液酸化，至酸浓度为 5%-10%,此时， RNA的分解产物溶解在上清液中， DNA等则被沉淀下来。此法的 优点是 RNA和 DNA分开得较为彻底， 缺点 是 RNA中还含有其他含磷化合物，如磷肽，磷酸肌醇等。（二）提取与纯化1. 提取（ 1）乙醇沉淀法（ 2）去污剂处理法（ 3）酚法2. 纯化（ 1）密度梯度离心法（ 2）柱色谱法（ 3）凝胶电泳法（三）含量测定1.定磷法（ 1）核酸样品用硫酸消化，将有机磷转化成无机磷；）核酸样品用硫酸消化，将有机磷转化成无机磷；（ 2）制定定磷标准曲线；）制定定磷标准曲线；（ 3）测定回收率和样品总磷量。）测定回收率和样品总磷量。H3PO4+12H2MoO4 H3P(Mo3O10) 4+12H2OH3P(Mo3O10) 4 Mo2O3 MoO3（钼蓝（钼蓝 ）钼蓝的最大吸光值在钼蓝的最大吸光值在 660nm处。处。Vit C2. 定糖法RNA中的戊核糖可在盐酸的水解作用下游离出来，进一步形成糠醛，然后与地衣酚反应，反应物程鲜绿色，在670nm有最大吸收峰。
