1、第二章 基因工程制药主讲人：吴晓敏第三讲 基因工程制药n 第一节 概述n 第二节 基因药物生产的基本过程n 第三节 目的基因的获得n 第四节 基因表达n 第五节 基因工程菌的稳定性n 第六节 基因工程菌生长代谢的特点n 第七节 基因工程菌发酵n 第八节 基因工程药物的分离纯化n 第九节 基因工程药物的质量控制n 第十节 基因工程药物制造实例第一节 概述n 基因工程即重组 DNA技术，是指对不同生物的遗传基因，根据人们的意愿，进行基因的切割、拼接和重新组合，再转入生物体内，产生出人们所期望的产物，或创造出具有新的遗传特征的生物类型。世界上第一批重组 DNA分子诞生于 1972年，次年几种不同来源
2、的 DNA分子装入载体后被转入到大肠杆菌中表达，标志着基因工程正式登上历史舞台。基因工程彻底改变了传统生物科技的被动状态，使得人们可以克服物种间的遗传障碍，定向培养或创造出自然界所没有的新的生命形态，以满足人类社会的需要。n 传统生物药物由于来源及制备上的困难、价格等因素的影响，此外在制备过程可能受到的感染等问题，促使人们寻求安全、实用、疗效可靠的新方法来制备生物药物。基因工程正在逐渐显示其在生物技术药物制备上的优势。n 应用基因工程技术可十分方便且有效地解决上述提到的问题，从量、质上都可以得到改进，且可以创造全新物质。利用基因工程技术生产药品的优点：n （ 1）可以大量生产过去难以获得的生理
3、活性蛋白和多肽（如胰岛素、干扰素、细胞因子等），为临床使用提供有效的保障；n （ 2）可以提供足够数量的生理活性物质，以便对其生理、生化和结构进行深入的研究，从而扩大这些物质的应用范围；n （ 3）利用基因工程技术可以发现、挖掘更多的内源性生理活性物质；利用基因工程技术生产药品的优点：n （ 4）内源性生理活性物质在作为药物使用时存在的不足之处可通过基因工程和蛋白质工程进行改造和去除。n （ 5）利用基因工程技术可获得新型化合物，扩大药物筛选来源。基因工程技术可将不同种类和用途的基因，在原核细胞中表达的特性使其不仅在医药，而且在很多行业中都会有重要的应用。第二节 基因工程药物生产的基本过程n
4、基因工程技术就是将重组对象的目的基因插入载体，拼接后转入新的宿主细胞，构建工程菌（或细胞），实现遗传物质的重新组合，并使目的基因在工程菌内进行复制和表达的技术。n 基因工程药物制造的 主要程序 是：目的基因的克隆，构建 DNA重组体，将 DNA重组体转入宿主菌构建工程菌，工程菌的发酵，外源基因表达产物的分离纯化，产品的检验等。以上程序中的每个阶段都包含若干细致的步骤，这些程序和步骤将会随研究和生产条件的不同而改变。获得目的基因 组建重组质粒培养工程菌构建基因工程菌或细胞产物分离纯化除菌过滤半成品检定包装成品检定基因工程药物制备的一般过程基因工程药物生产的上游和下游n 上游 ：主要指的是 目的基因分离、工程菌（或细胞）构建 。上游阶段的工作主要在实验室内完成；n 下游 ：主要指的是从工程菌（或细胞）的大规模培养一直到产品的 分离纯化、质量控制 等。工程菌（或细胞）构建中重要的工具n 该过程中重要的工具便是酶： 限制性内切酶和连接酶。n 目的基因进行限制性内切酶和核苷酸序列分析 。n 基因表达系统有原核生物和真核生物两类表达系统；选择基因表达的系统主要考虑的是保证表达蛋白质的功能，其次要考虑的是表达量的多少和分离纯化的难易。
