1、 第四章 放射自显影技术 第一节 放射自显影的基本概念 一、放射自显影的定义 利用放射性物质发出的射线能使照相乳胶感光的这一特性，来检测样品中的放射性的技术，称为 放射自显影技术 。 将放射性样品在黑暗中与照相乳胶接触在一起，即使照相乳胶暴露于射线中，射线使乳胶中的溴化银感光，产生潜影，经定影，定影后在乳胶上形成与样品中放射性物质所在的部位和活度相对应的有银粒组成的图象 。 放射自显影技术 是利用放射性样品能在照相乳胶上产生图像的特性来检测样品中放射性及其分布的一种同位素示踪技术。 二、制作放射自显影的基本过程 生物材料的标记 自显影样品的制备 自显影的制作 曝光 显影 定影 观察与分析（定位
2、及放射性测量）。 三、放射自显影的基本类型 依样品和观察部位的大小，分宏观和微观自显影；后者又有光学自显影（ IMARG） 和电镜自显影（ EMARG）。 1、 宏观自显影 将宏观的标记样品与固体照相乳胶接触曝光，显影，定影后，形成黑白图象，用肉眼观察或光密度计测量黑度来分析放射性物质在器官组织中的分布情况。 2、光学显微自显影 通常在常规的组织学切片或涂片上涂上一层液体乳胶膜，经曝光，显影，定影后，在显微镜下观察银颗粒的分布，来了解放射性标记物在细胞间或细胞显微结构中的分布情况。观察的范围很小，要求分辨力高，在材料标记，切片制作，乳胶膜的制作及观察分析上要求更高的技术。 3、电镜自显影 在超
3、薄切片上涂上单层乳胶膜，经曝光、显影、定影后，在电子显微镜下观察银颗粒的分布，来了解放射性物质在细胞超微结构中的分布情况。甚至可观察到生物大分子的标记部位。观察的结构部位很小，要求分辨力高，在材料标记，切片制作，乳胶膜的制作及观察分析上要求更高的技术。 放射自显影技术Northern 杂交ratbrain Radish leaf 四、放射自显影的特点 ARG既是一种辐射探测方法，又是一项完整的同位素示踪技术。它与一般用制备的放射性样品，通过电离或闪烁探测器检测放射性的示踪技术相比，有下列主要 优点 ： 1、能够准确定位 依自显影的类型不同能检测放射性物质在器官、组织、亚细胞结构、甚至在生物大分
4、子中的分布。至于用自显影获得的细胞，亚细胞和分子水平上放射性物质的分布是用一般的生物化学分离法难以获得或不能获得的。 2、具有很高的灵敏性 因为照相乳胶对射线的反应具有累积作用，所以通过延长曝光时间可以检测到样品中微弱放射性。 3、资料形象，易于保存 获得的自显影图像能清晰反映放射性物质在器官、组织、和各结构部位的分布情况，形象、客观并能长期保存。 虽然放射自显影技术有着其他方法无法比拟的优点，但同样存在一些 不足之处 ： 1、自显影的制备时间过长 手续较复杂，尤其显微自显影要求较薄的技术； 2、不能直接定量 一般情况下只能相对定量。因此，除了在细胞学、分子生物学和遗传学研究中的特殊目的外，在
5、一般的示踪实验中，放射自显影作为放射性检测的一种手段，补充提供放射性物质的吸收，运转和分布的资料。 第二节 宏观放射自显影（ Macro-autoradiography） 的制作 以宏观材料制作的自显影，肉眼或光密度计观察组织、器官中放射性物质的分布。 一、样品的制备 1、植物材料 整株或部分器官（枝条、叶片、花蕾等），压制成标本要求干而不脆，平整。若植株过大可折转或剪断。若观察放射性物质在茎杆中的分布，可制成茎杆的纵横切片。 2、动物材料 整体切片：纵剖面或横剖面，或组织的宏观切片。 3、层析谱 纸层或薄层板展开后，充分干燥，可喷射聚氯乙烯或硝化纤维（ polyvinyl chloride or nituocellalose）， 以防止自显影时薄层板上吸附剂粉的移动。 4、凝胶电泳块 为防止水分对乳胶的影响可采取：（ 1）干燥；（ 2）包蔽；（ 3）冰冻：在低温条件下曝光。 5、其他 如土壤剖面，可将土壤切成平整的剖面，用薄的聚氯乙烯膜包蔽。
