1、奶粉中三聚氰的气相色谱检测摘要：本文分析了用气相色谱质谱仪测定奶粉中三聚氰胺的方法。用三氯乙酸溶液提取奶粉中的三聚氰胺，提取液经离心、浓缩、净化、定容后直接进样。该方法简单快速，能有效消除干扰，并且不用经过衍生化，适用于奶粉中三聚氰胺的日常检测。 关键词：三聚氰胺 检测 气相色谱质谱 三聚氰胺是一种禁止用于宠物食品及动物饲料的化学物质，动物食用含有大量三聚氰胺的饲料后可发生肾衰竭而导致死亡。目前检测三聚氰胺的方法主要有液相色谱法，气相色谱质谱法，液相色谱串联质谱法。我国农业部发布的行业标准中即是以液相色谱法和气质联用法作为饲料中三聚氰胺的测定方法。其中液相色谱法由于应用广泛，因此目前最为常用。
2、而气相色谱质谱法由于抗干扰能力强，定性准确，因此在实验室常常作为确证的方法，但是由于现在的气相色谱质谱法，由于需要对三聚氰胺进行衍生化，因此也造成了处理过程的繁琐。 1、材料与方法 1.1 仪器与试剂 Agilent 6890N - 5975B 气相色谱- 质谱联用仪（带 7683B 自动进样器） ；台式离心机： LG 10 - 214A，北京医用离心机厂；三聚氰胺标准：纯度98.5%；奶粉：某超市购买，经检测不含三聚氰胺；阳离子交换固相萃取柱， 60 mg、3 ml，Agilent 公司。甲醇，三氯乙酸，氨水等为市售分析纯。 1.2 样品提取 称取 5 g 样品，加入 10%的三氯乙酸溶液
3、30 ml，混匀后超声提取 15 min，静置 5 min，取上层提取液 20 ml 转入离心管，在 5000 r/min 的转速下离心 10 min。 1.3 样品净化 分别用 3 ml 甲醇， 3 ml 水活化阳离子交换固相萃取柱，准确移取10 ml 离心液分次上柱，控制过柱速度在 1 ml/min 以内，再用 3 ml 甲醇， 3 ml 水冲洗混合型阳离子交换固相萃取柱，然后有 3 ml 氨水甲醇溶液（氨水：甲醇= 5： 95）洗脱，洗脱液用氮气吹干，再用 10%的甲醇溶液定容至 1 ml。 1.4 分析条件 1.4.1 GC 条件 色谱柱： DB - 1701 毛细管柱 30 m 0.
4、25 mm 0.25m；载气：高纯氦气；柱流量： 1.2 ml/min；进样口温度： 250； 柱温： 120 保持 2 min， 以 10/min 升至 180，保持 2 min，再以 10/min 升至 230，保持 5 min。 1.4.2 MS 条件 气质接口温度： 280； 离子源（ EI）温度：230；四极杆温度 150； EI 电子能量： 70 eV。采集方式：SIM；选择离子（m / z） ： 68， 85， 126，其中 126 为定量离子。 2、结果与讨论 2.1 提取和净化条件的选择和优化 三聚氰胺属于强极性碱性化合物，因此提取溶剂一般都选用极性较强的有机溶剂、缓冲溶液或
5、有机溶剂和水的混合溶液。试验中选择甲醇、甲醇- 水（体积比为 1： 1） 、1%三氯乙酸水溶液和 10%三氯乙酸水溶液作为提取溶剂，在奶粉中添加 10 mg/kg 水平的三聚氰胺标准品，用 GC - MS 法测定其回收率，并比较不同提取液的提取效果，结果见图 1。从图 1 的结果可以看出在用甲醇- 水（体积比为 1：1） 、1%三氯乙酸水溶液和 10%三氯乙酸水溶液作为提取溶剂时，提取效率相差不大。但是在奶粉样品的分析中发现，奶粉样品的成分比较复杂，如果简单的用有机溶剂和水的混合溶液提取，提取液较为浑浊和粘稠，不利于后续的净化处理。而用三氯乙酸溶液提取，则可以沉淀掉奶粉中的蛋白，离心后可以获得
6、相对纯净的提取液，并且三氯乙酸的含量越高，沉淀蛋白的效果更加明显。因此，在考察的条件中，选择 10%三氯乙酸水溶液作为提取溶剂。由于奶粉样品的成分过于复杂，用三氯乙酸提取后直接进样，会出现大量的干扰物质，影响三聚氰胺的确证，同时大量的杂质也容易污染气相色谱的进样口和质谱的离子源，因此需要对提取液进行净化。根据文献的报道 9 ，主要采用阳离子交换固相萃取柱对三聚氰胺进行吸附后洗脱，除去样品中水溶性的杂质、无机盐和非离子化的脂溶性杂质。实验中发现，采用混合型阳离子交换固相萃取柱对样品进行净化，样品的回收率较高，重现性好， 且除杂效果好， 净化后目标峰附近干扰少。2.2 色谱和质谱条件的优化 由于三
7、聚氰胺的分子量较小，在 HP - 5MS 柱中出峰较快，难以与溶剂分离，并且在干扰离子多的情况下，会对三聚氰胺的确证造成很大的困扰。因此用气相色谱质谱法检测三聚氰胺的文献中，都要先对三聚氰胺进行衍生化，再用质谱进行检测。不仅费时，而且对检测结果也增加了不确定性。通过实验发现，如果选用中极性的 DB - 1701 柱，再通过优化色谱和质谱条件，就可以对三聚氰胺进行较好的分离，从而可以直接进行检测。色谱和质谱条件如 114 所示。 2.3 三聚氰胺的选择离子流图和质谱图 三聚氰胺的选择离子流图和质谱图如图 1，图 2 所示。TIC 图的色谱峰给出的三聚氰胺保留时间为 51124 min。所对应的主
8、要离子碎片核质比（m / z）为 68， 85， 126。 2.4 工作曲线和最低检出限 配制浓度分别为 0120、0150、1100 和 2100 g/ml 三聚氰胺标准溶液。注入进样瓶中进行色谱测定，按上述色谱条件进行分离，以浓度和吸收峰面积标绘制标准曲线。以 126 作为定量离子进行定量，在01202100g/ml 质量浓度范围内三聚氰胺的峰面积（Y）与浓度（ x）具有良好的线性关系。如图 4 所示，线性回归方程为 Y = 916017X - 73619， 相关系数 r =019996。用信噪比 S/N = 10 来计算方法的检出限，将峰面积换算成三聚氰胺的浓度， 得出三聚氰胺的最低检出
9、限为 0110 mg/kg。 2.5 回收率和精密度 进行回收实验时，三聚氰胺的标准品应采用样品基质溶液进行溶解及配制。三聚氰胺的标准添加量为 1.00 mg/kg，方法回收率为 82.1%。 方法的精密度测定采用 1.0g/ml 三聚氰胺标准品重复测定 8 次，计算 RSD 值为 1.82%。 3、结论 建立了 GC - MS 检测奶粉中的三聚氰胺的方法，采用三氯乙酸溶液提取，阳离子固相萃取柱富集净化，通过优化色谱和质谱条件，在不用衍生的情况下对样品进行直接检测，取得了良好的实验结果。该方法简单，快速，适合于快速检测奶粉中三聚氰胺的要求。 参考文献： 1 赵永彪，李自春，等 1 高效液相色谱法测定宠物食品中的三聚氰胺J1 分析实验室， 2008， 27 （ supp l） ： 190 - 1921 2 宫小明，董静，等 1HPLC 法测定植物性原料中三聚氰胺J1 食品科学， 2008， 29 （4） ： 321 - 3231 3 王征 1GC - MS 法测定动物食品中的三聚氰胺 J 1 福建分析测，2008， 17 （2） ： 1 ? 41
