1、16.5.2酶免疫分析技术应化 1305宋宇 韡 332酶 免疫技术的分类克隆酶供体免疫测定酶免疫分析技术酶免疫组织化学技术酶免疫测定技术均相酶免疫测定异相酶免疫测定酶放大免疫测定技术液相酶免疫测定固相酶免疫测定：酶联免疫吸附试验 (ELISA)组织切片或其它标本中抗原的定位分析 液体标本中抗原或抗体的定性和定量一、均相酶免疫测定法酶蛋白与抗原或抗体结合形成 酶标记物 。未 与抗原（抗体）结合的标记抗体（抗原），称为 游离 标记物。与抗原（抗体）结合的标记抗体（抗原），称为 结合 标记物。Ag+ Ab-E AgAb-E+ Ab-E （以标记 Ab检测 Ag为例）一、均相酶免疫测定法基本原理 酶
2、标记物与相应的抗原或抗体结合后，其中的酶活性将发生改变。因此，不需对反应液中 结合和游离 的酶标记物进行分离， 直接测定 反应系统中 总酶活性的变化 即可推算出被测样品中抗原的含量。Ag+ Ab-E AgAb-E+ Ab-E （以标记 Ab检测 Ag为例）二 、非均相 酶免疫测定法基本原理 ：抗原抗体反应平衡后，需采用适当的方法分离 游离的 和 结合的酶标记物 ，然后对经酶催化的底物显色程度进行测定，再推算待测样品中抗原（或抗体）的含量。依据测定方法又可分为 液相 和 固相酶免疫测定 。目前临床上多用固相酶免疫测定法。Ag+ Ab-E AgAb-E+ Ab-E （以标记 Ab检测 Ag为例）酶
3、 联免疫吸附试验 （ ELISA）一、基本原理底物显色定性或定量的分析包被将已知抗原或抗体吸附在固相载体表面反应加入待测抗体或抗原和酶标抗原或抗体洗涤使结合在固相上的抗原抗体复合物与未结合的分离1 23 4方 法类型及反应原理（一）检测抗原的方法将 己知抗体 包被固相载体，待检标本中的相应 抗原 与固相表面的抗体结合，洗涤去除未结合成分。然后再与抗原特异的酶标抗体结合，形成固相抗体 -抗原 -酶标抗体复合物，根据加底物后的显色程度确定待检抗原的含量。 1.双抗体夹心法E固相抗体标本（含抗原） 酶标抗体 E E底物双抗体夹心法检测抗原 适用于检测含有至少两个抗原决定簇的多价抗原（ 1）将已知抗体包被于固相反应板上，洗涤。 （ 2）加待检标本 ,温育，洗涤。 （ 3）加酶标抗体，洗涤。（ 4）加底物，根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。 2技术要点E固相抗体标本（含抗原）酶标抗体E E底物（ +）（ -）EE EEE EEE E双抗体夹心法测抗原
