1、1地格达汤的药敏试验摘要：文章目的在于寻找治疗奶牛乳房炎的绿色天然药物，保障奶牛养殖业可持续发展，保证乳制品安全。其主要内容是采用微生物分离方法分离出乳房炎致病菌后，通过药敏纸片扩散方法，对地格达汤作药敏试验。本次研究的主要结论如下：地格达汤（蒙药方剂）对分离出的金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、无乳链球菌、双球菌、大肠杆菌高度敏感，对腐败梭菌中度敏感。敏感性从强到弱依次为金黄色葡萄球菌、双球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌、腐败梭菌。 关键词：奶牛；乳房炎；地格达汤；药敏试验 中图分类号：R29 文献标识码：A 文章编号：1674-0432（2013）-01-0064-2 1 试验材料 1
2、.1 试验材料 1.1.1 仪器与设备 烘干箱、恒温箱、生化培养箱、电子天平、酸度计、显微镜、载玻片、平皿、试管、试管架、安全柜、无菌室、酒精灯、接种环、石蜡油、75%酒精棉球、5%碘酒棉球、采样管、CMT 检验试剂、及试剂。打孔器（6.00mm） 、电子天平和其他实验室常规仪器与工具。 1.1.2 药品 蒙药方剂：地格达汤。 蒙药材：泡章-乌布斯（地丁） 、巴嘎巴盖-其其格（蒲公英） 、都日布勒吉-乌布斯（益母草） 、哈敦-斯日给勒格（败酱草） 、西茹音-温吉勒2嘎（地皮骨） 、吉茹戈巴（薄荷） 、西黑日-乌布斯（甘草） 、汗-铁木尔（防风） 、皂角刺。 1.1.3 培养剂及生化反应试剂 培
3、养剂：营养琼脂、麦康凯培养基、三糖铁培养基、尹红美兰培养基、营养肉汤、HugihLeisfon0/F 培养基、高盐甘露醇培养基、DNAes 培养基、55琼脂、VP 半固体琼脂、明胶培养基、硝酸盐蛋白脉水培养基、甲苯胺蓝核酸琼脂。 生化反应试剂：O 压发酵试管、甘露醇、葡萄糖发酵试管、胆汁溶菌试管、马尿酸钠水解试管、氧化酶试管、脉酶试管、DNA 酶试验、七叶营发酵试管、麦芽糖和蔗糖等。 1.1.4 供试奶样 从诊断出的临床性乳房炎奶牛中根据不同症状采集了 98 份奶样，非临床性乳房炎奶牛中随机采集了 68 份奶样，共采集了166 份奶样。 1.1.5 试验动物 荷斯坦奶牛。 2 试验方法 2.1
4、 奶牛乳房炎病原菌的分离步骤 准备工作初步培养分离培养初步鉴定进一步鉴定鉴别致病性生化鉴定。 2.2 地格达汤的药敏实验步骤 2.2.1 地格达汤提取物的制备 将地格达汤及其各成分各称取 5g，用水蒸馏浸泡 1h 后，加蒸馏水至中蒙药材及方剂完全浸没，置于电炉上武火煮沸，沸腾时开始计时，文火煎熬 30min，后倒出药汁，再加水同样煮沸 1 次，将两次的煎液混到一起，用纱布过滤后，制成含药量为 1g/ml3的煎剂，放入 4冰箱保存待用。 2.2.2 菌种的培养及稀释 先分离致病菌再接种肉汤培养基中 37 度24 小时培养，然后对培养好的细菌用无菌生理盐水 5*102 稀释备用。 2.2.3 营养
5、培养基制备 将营养培养基和鉴别培养基分别称取置入三角瓶内完全融化后，在高压锅内进行高压灭菌（121 20 min） ，然后在超净工作台内通过无菌操作方法倒入平皿中备用。 2.2.4 蒙药方剂药敏片的制备 先将滤纸用打孔机打成直径为 6mm 的小圆片，根据需要将 50 或 100 片滤纸包成一纸包后放入带绵塞的试管后置入烘干箱里（126 2h）烘干备用。 药液的配制：蒙药提取液稀释成 1：1 后烘干的滤纸片上滴加吸收恒温箱里干燥备用。 2.2.5 蒙药方剂药敏试验 根据药物纸片琼脂扩散法，将稀释好的各类菌液，分别均匀涂到对应培养基上培养。将制备好的蒙药方剂药敏片分别贴在涂各类菌液的培养基上，并做
6、好标记后置 37恒温培养18h24h。然后取出用卡尺测量抑菌圈的直径（包括药敏纸片直径） 。如有生长缓慢的细菌，在 37恒温箱中培养 36d。 结果判断标准：如抑菌圈直径 05mm，该细菌已产生耐药性或药敏片无作用；如抑菌圈直径 69mm 为低度敏感；1015mm 为中度敏感；16mm 以上为高度敏感。 3 试验结果 3.1 病原菌分离试验结果 3.2 蒙药方剂及抗生素试验结果 44 结果分析 地格达汤对分离出的金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、无乳链球菌、双球菌、大肠杆菌高度敏感，对腐败梭菌中度敏感。敏感性从强到弱依次为金黄色葡萄球菌、双球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌、腐败梭菌。 参考文献 1 唐淑珍等.利用体细胞计数监控乳房炎J.中国奶牛，1999，4：45-46. 2 李国江，邹风驰.奶牛隐性乳房炎的检测与评估J.中国奶业，1998，3：16-172007， （7）：69. 3 陈立志，金哲浩.吉林地区奶牛乳房炎常见病原菌的分离及药敏试验的应用. 4 王新，张秀英.9 种蒙药抗炎作用的实验观察J.中国兽医杂志，2005，41（1）：35-36. 5 宁红梅.吴刚.张丽萍蒙药地格达汤的微量元素分析.中国民族医药杂志，2004. 作者简介：迎春（1975-） ，女，内蒙古锡林郭勒职业学院讲师，从事兽医专业专任教师工作。
