1、IL1Ra 和 TGF 基因联合在骨关节炎治疗中的应用摘要：目的 骨关节炎治疗中 IL-1Ra 和 TGF- 基因联合治疗效果。方法 研究选取新西兰大白兔关节软骨，将软骨细胞分为转染 IL-1Ra+TGF-1 双基因组、转染 TGF-1 组、转染 IL-1Ra 组，对比组织学指标。结果 LI-1Ra+TGF-1 组 TNF-、IL-1 含量均显著低于 TGF-1 组、IL-1Ra 组，差异有显著统计学意义（P0.05） 。转 TGF-1 组阿尔新蓝染色尚呈均一表现，HE 染色细胞呈紊乱排列，数量有减少，中间层和表层细胞有簇集显示。为棕黄色型胶原免疫组化胞浆，观察基质染色，呈较深表现。转 IL-
2、Ra 组细胞在表层和中间层稍簇集，排列稍紊乱，阿尔新蓝染色呈均一表现，为棕黄色型胶原免疫组化浆，基质染色相对较深。结论 经脂质体对 TGF-1 和 IL-1Ra 基因向软骨细胞介导，与致炎软骨块共培养，得出转基因组对炎性因子具降低作用，相较单基因，双基因效果更为明显，可对关节软骨退变抑制，发挥理想治疗 OA 作用。 关键词：IL-Ra；TGF-；基因联合；骨关节炎 骨性关节炎（OA）是对中老年人健康构成严重威胁的一种进行性、无菌性、慢性侵犯关节的疾病类型，病理核心为关节面软骨退行性改变，目前尚无理想治疗手段1。基因转移技术对基质合成和骨软骨生长具有促进作用，可使靶细胞大量对骨软骨生长调控因子表
3、达。本次就 IL-Ra和 TGF- 基因联治成效展开研究，现总回顾如下。 1 资料与方法 1.1 一般材料 选取 2 只新西兰大白兔，体重约 6 kg 和 2 kg。取pEGFP-TGF-1 和 PEGFP?CIL-1Ra 表达质料，0.25%胰蛋白酶、0.2%型胶原酶。荧光显微镜。 1.2 方法 1.2.1 培养软骨细胞 无菌条件下，取正常膝、肩关节软骨，应用 D-Hanks 液实施漂洗操作后剪碎，使其呈糊状，取 0.25%胰蛋白酶（含0.02%EDFA）加入，在温心中行 30 min 孵化，离心，将上清弃去，在37温箱中，取 0.2%型胶原酶加入，消化 4 h，细胞每隔 2 h 收集一次，
4、过滤，将上清弃除，行 2 次漂洗，将细胞收集，取高糖 DMEM 培养基加入，残渣继续在胶原酶中消化，细胞收集完成后，均匀在培养瓶中接种，培养。 1.2.2 脂质体转染 以密度 1.5105 将软骨细胞在 6 孔培养板接种，按转染 IL-1Ra+TGF-1 双基因组、转染 TGF-1 组、转染 IL-1Ra 组划分，行细胞培养。对收集的培养基 TGF-1 与 IL-1Ra，行 ELISA 检测。 1.3 统计学分析 文中涉及数据均在 SPSS 13.0 中输入，组间计数资料采用（xs）表示，计量资料行 t 检验，计数资料行 2 检验，P0.05 差异有统计学意义。 2 结果 2.1 TNF-、I
5、L-1 含量比较 LI-1Ra+TGF-1 组 TNF-、IL-1含量均显著低于 TGF-1 组、IL-1Ra 组，差异有显著统计学意义（P0.05） ，见表 1。 2.2 组织学分析 转 TGF-1 组阿尔新蓝染色尚呈均一表现，HE 染色细胞呈紊乱排列，数量有减少，中间层和表层细胞有簇集显示。为棕黄色型胶原免疫组化胞浆，观察基质染色，呈较深表现。转 IL-Ra 组细胞在表层和中间层稍簇集，排列稍紊乱，阿尔新蓝染色呈均一表现，为棕黄色型胶原免疫组化浆，基质染色相对较深。 3 讨论 现阶段，应用病毒载体，可将基因成功向细胞中转染，关于 OA 采用病毒载体携带治疗基因处理的实验，临床已较多，但针对
6、 OA 此种非致病性、慢性的疾病而言，取病毒载体应用，有一定局限性，故对在慢性疾病治疗中的应用有所限 制2。非病毒载体无免疫原性和毒性，易合成，容量大、可生物降解、安全性好、稳定实用，可同时对多种治疗基因传输，但有待提高其转染效率。有研究应用转染的脂质体复合物 TGF-1基因入原代软骨细胞及软骨膜细胞，可达 70%效 率3，在骨软骨缺损模型中植入，缺损处在 1 w 后仍对 TGF-1 表达，提示对非病毒转染方法改进，效果较高，可使临床应用距离缩短。 针对 OA 动物模型展开实验，IL-1Ra 基因为研究热点，其对关节软骨的退变具延缓价值已被体外、体内实验证实4。除单基因外，联合多基因对 OA
7、的治疗近年报道渐趋增多，Nixon 等研究示，IL-Ra 与 IGF-1 基因联合，可减少基质丢失、加强软骨基质合成，对 OA 软骨基质损伤有逆转作用。有研究示5，采用 ELISA 对培养基 IL-1Ra 与 TGF-1 表达量测定，在单基因组和双基因组，IL-1Ra 或 TGF-1 均有高表达，提示转染软骨细胞基因对表达可获取。本次研究中，LI-1Ra+TGF-1 组 TNF-、IL-1 含量均显著低于 TGF-1 组、IL-1Ra 组，差异有显著统计学意义（P0.05） 。提示双基因组对 TNF-、IL-1 的降低能力显著优于单基因组，联合 LI-1Ra、TGF-1，对促炎性因子表达水平降
8、低具有一定可行性，临床可依据动物实验研究结果，指导临床治疗，以使患者预后得到最大程度改善。 对组织学特征展开观察，因炎性因子作用，在未转染组，软骨细胞破坏呈增多显示，细胞外基质及胶原纤维分泌合成减少，故染色有变淡表现，与 OA 特征符合。而染色在基因治疗组呈加重显示，提示软骨细胞在基因治疗组明显增多，合成的细胞外基质和胶原纤维也有增加6。观察染色变化，转基因组对致炎软骨块具修复效果。 综上，经脂质体对 TGF-1 和 IL-1Ra 基因向软骨细胞介导，与致炎软骨块共培养，得出转基因组对炎性因子具降低作用，相较单基因，双基因效果更为明显，可对关节软骨退变抑制，发挥理想治疗 OA 作用。 参考文献
9、： 1湛梅圣.独一味对兔骨关节炎模型关节软骨影响的实验研究D.湖北中医药大学，2012. 2金晓飞.兔膝骨关节炎膝关节韧带生物力学改变及针刀松解法干预的研究D.北京中医药大学，2012. 3赵绵松，夏蓉晖，王玉华，等.骨关节炎与类风湿关节炎患者膝关节滑膜中血管内皮生长因子及血管形态的特征J.北京大学学报（医学版） ，2012， （06）：927-931. 4宋杨英，程天军，黄淑珍，等.IL-18 对胶质瘤大鼠外周血 TGF-、CD8+T 水平的影响J.现代肿瘤医学，2014， （12）：2818-2820. 5吴惠春，李曼，周振华，等.PI3K/PKB 信号通路在 TGF-_诱导人肝星状细胞表达骨桥蛋白中的作用J.中国病理生理杂志，2015， （01）：93-97. 6刘毅，张承昊，范青洪，等.TGF-1 和 bFGF-1 对单层共培养BMSCs 和韧带成纤维细胞韧带特异性的影响J.中国修复重建外科杂志，2014， （11）. 编辑/罗茗柯
