1、断血流皂苷 A 分散片溶出度的方法学研究摘 要目的证明断血流皂苷 A 分散片溶出度的检测方法的可行性。方法通过高效液相色谱法色谱法，检测峰面积值，用外标法计算含量。结果本法阴性无干扰，浓度与峰面积值线性关系良好，r=0.9997，方法平均回收率为 98.82%，精密度良好。结论本方法能快速、准确地测定断血流皂苷 A 分散片的溶出度。 关键词断血流皂苷 A 分散片溶出度高效液相色谱法 中图分类号：TG333.7 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）08-0316-01 断血流皂苷 A 分散片是传统止血良药断血流中提取而制得的单体活性成分制剂，主要用于妇科止血。按照中国药典 2
2、010 年版1及文献的相关要求2，本文对断血流皂苷 A 分散片的溶出度方法进行了验证，以更好地控制产品质量。 1 仪器、试药、测定方法 仪器：RCZ8A 药物溶出度仪（天津大学无线电厂） 、AgilentTechnologies1260Infinity 高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司） 、CPA225D 电子天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司） 试药：醉鱼草皂苷 IVb（断血流皂苷 A）为中国食品药品生检定研究院提供，批号：110782-200602、甲醇均为色谱纯试剂（美国天地） ，其余试剂为分析纯。 测定方法：取本品，照溶出度测定法（中国药典 2010 年版二部附录XC 第二法）
3、，以水 500ml 为溶剂，转速为每分钟 100 转，依法操作，经10 分钟时，取溶液 15ml，用 0.8um 滤膜滤过，精密量取续滤液 6.3ml，蒸干，加 75%乙醇溶解并定容成 5ml，制成每 1ml 中含断血流皂苷 A 约25ug 的溶液，作为供试品溶液，照下述高效液相色谱条件，精密量取20ul 注入液相色谱仪，记录色谱图；另精密称取断血流皂苷 A 对照品2.5mg，置 10ml 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再取 1ml，置10ml 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得（每 1ml 中含断血流皂苷 A25ug）的溶液，作为对照品溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算溶出度，
4、即得。限度规定为标示量的 80%。 高效液相色谱条件：色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水（65：35）为流动相；检测波长为 250nm，理论板数按断血流皂苷 A 峰计算应不得低于 3000。 2 试验与结果 2.1 干扰试验 按照断血流皂苷 A 分散片的处方，取本品的辅料，按照上述供试品溶液的制备方法，制成阴性供试品溶液。精密量取 20ul 注入液相色谱仪，记录色谱图；阴性供试品在断血流皂苷 A 色谱峰位置处无相应峰出现，表明阴性无干扰。 2.2 线性范围的考察 精密称取断血流皂苷 A 对照品 2.5mg，置 10ml 容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，使成
5、 0.25mg/ml。精密吸取上述溶液0.25、0.5、1、2ml、4ml 分别置 10ml 量瓶中，加流动相稀释至刻度，分别成 6.25、12.5、25、50、100ug/ml。精密吸取上述各种溶液 20？l 注入液相色谱仪，按色谱条件测得峰面积，结果见表 1。并以峰面积（）对进样浓度（）进行回归，得标准曲线方程：Y=34538X+386，r=0.9997。结果表明断血流皂苷 A 在 6.25ug/ml100ug/ml 范围内，断血流皂苷 A峰面积值与样品浓度有良好线性关系。 2.3 回收率试验 取断血流皂苷 A6mg、8mg、10mg（断血流皂苷 A 的量相当于处方量的60%、80%、10
6、0%） ，加相应处方量的空白辅料，混合均匀，置 500ml 量瓶中，加水适量，超声约 10 分钟，冷至室温，用水稀释至刻度，摇匀，用0.8um 的滤膜过滤，取续滤液 6.3ml，蒸干，用 75%乙醇溶解并定容成5ml，作为供试品溶液，平行制备三份。另取断血流皂苷 A 对照品2.5mg，置 10ml 量瓶中，用甲醇溶解并稀释刻至度，摇匀，再取 1ml，置10ml 量瓶中，加流动相稀释刻至度，摇匀，即得（每 1ml 中含断血流皂苷 A25ug） ，作为对照品溶液。照高效液相色谱法（中国药典 2010 年版一部附录 VID） ，分别取 20ul 进样，计算回收率，结果见表 1。 以上 9 组平均回收
7、率为 98.82%，RSD=1.0%。结果显示，本方法回收率较好。 2.4 稳定性试验 取溶出测定项下溶液，放置 2、4、6、8、10 小时后，照高效液相色谱法，测定峰面积，结果各时间段的峰面积均值为 757484.5，相对标准偏差为 0.53%，说明该被测溶液放置 10 小时较为稳定。 2.5 精密度试验 取溶出度测定项下的断血流皂苷 A 对照品溶液，照高效液相色谱法，连续进样 5 针，记录峰面积，结果 5 针的峰面积均值为 851753.4，相对标准偏差为 0.48%，说明该方法精密度良好。 2.6 溶出曲线 取本品，照溶出度测定法，分别在 3、5、10、15、25、35、45、60分钟时
8、取样，制成供试品溶液。照高效液相法进行溶出度测定，绘制累计溶出曲线（见图 2） ，通过检测表明，溶出拐点出现在 5 分钟，且溶出度在 90%左右，说明本品溶出效果较好。 3 结论 3.1 通过方法学验证的实验数据表明，断血流皂苷 A 的溶出度检测方法可控、可行。 3.2 通过溶出曲线可以看出，本品溶出拐点出现在 5min，在其后时间段，溶出度不在增加，因此可将取样时间定在 10min。 参考文献 1国家药典委员会编.中华人民共和国药典 2010 年版（二部）S.北京.中国医药科技出版社.2010：附录 85-87. 2中国药品生物制品鉴定所，中国药品检验总所.中国药品检验标准操作规范.北京.中国医药科技出版社.2010.
