1、免疫组化联合抗体在胸腹水沉渣石蜡包埋病理诊断中的应用观察摘要：目的 探讨在胸腹水沉渣石蜡包埋中联合应用免疫组化进行检查的效果。方法 选取我院恶性及存在恶性倾向的体液标本共 56 例，对其进行沉渣石蜡包埋、切片，采用免疫组化法进行检查，观察检查结果。结果 沉渣石蜡包埋联合免疫组化检测法检出的阳性率为 82.1%，高于液基细胞学检测法，组间比较有差异（P0.05） 。结论 在胸腹水沉渣石蜡包埋中联合应用免疫组化进行检查，能够提升临床检出率，确定肿瘤细胞的来源及其发病部位，为临床治疗提供参考意见。 关键词：胸腹水沉渣石蜡包埋；免疫组化；诊断 胸腹水是临床上一种常见的并发症，临床上对其进行诊断时往往采
2、用体液细胞学检测法，但这种检测方法的诊断率相对较低。 1 资料与方法 1.1 一般资料 选取于 2013 年 9 月2015 年 9 月我院各个科室送检的胸腹水标本共 260 例。其中，患者的年龄 4179 岁，平均年龄（56.673.29）岁。依据患者的临床资料与标本的镜下形态选取恶性及存在恶性倾向的体液标本共 56 例。 1.2 方法 1.2.1 切片制作方法 将选取的 56 例标本进行离心，然后舍弃上清液，吸取沉淀物后，将其制作成 1 张液基细胞涂片，采用滤纸将剩余的沉淀物进行包埋，包埋完成后进行组织学标号，并将其与组织标本放置于脱水机中，按照组织标本的制作方法对其进行固定、脱水、透明以
3、及浸蜡，制成石蜡组织块后，再将其制成 34m 的切片。 1.2.2 免疫组化染色方法 检测方法使用 Elivision 法，抗体采用CEA、CK-H 以及 CKlow 等，试剂采用福州迈新生物技术有限公司生产。染色方法具体如下：首先，将切片进行常规脱蜡至水，洗液采用 PBS。然后，滴入 3%的过氧化氢，于常温下将其放置 10min，并依据相关要求进行抗原修复操作，再滴入一抗，将其放置于 4的冰箱中过夜。最后，向其滴入二抗，DAB 显色后，再采用苏木素进行复染，并用盐酸乙醇对其进行分化，并将切片脱水、封片。 1.3 评价指标 阳性的评判标准主要包括三种，分别是：CEA、D2-40 以及 Tg 等
4、部分肿瘤细胞的细胞质着色；CK-H、CKlow、Calretin 以及 CA125 肿瘤细胞的细胞膜着色；Ki-67、TTF-1 肿瘤细胞的细胞核着色。 1.4 统计学方法 采取统计学软件 SPSS19.0 对上述数据处理，计数采取率（%） ，组间率对比采取 2 检验，对比以 P0.05 有统计学意义。 2 结果 2.1 两种方法检测胸腹水的检出率比较分析 沉渣石蜡包埋联合免疫组化检测法检出的阳性率为 82.1%，高于液基细胞学检测法，组间比较有差异（P0.05） 。见表 1。 2.2 免疫组化检测法结果分析 沉渣石蜡包埋联合免疫组化检测法检出的 46 例患者中，其中，表现为肺腺癌的患者共 2
5、1 例，表现为鳞癌的患者共 10 例，表现为卵巢癌的患者共 4 例，表现为胃腺癌的患者共 9 例，表现为间皮瘤的患者共 2 例。见表 2。 3 讨论 胸腹水脱落细胞学检查是临床上一种常用的检测方法，该方法具有简便、准确性高等特点，是临床上诊断良恶性胸腹水的一种常用方法1。近几年，随着检测技术的不断发展，膜式超薄液基细胞学检测技术以及沉渣石蜡包埋法已经广泛应用于胸腹水细胞的涂片中，其中，采用沉渣石蜡包埋法制作切片，不仅可以提升切片的制作数量，保存细胞的完整性，提升临床检出率，同时还能够对其进行免疫组化染色，在此基础上还可以联合使用抗体检测，从而能够对肿瘤细胞进行有效分类2。 目前，临床上采用胸腹
6、水脱落细胞学检查时，诊断较为困难的是对间皮细胞与癌细胞的区分，特别是当间皮细胞退化后，由于不具有典型性，更易被误诊3。针对较难确诊的患者，可以进一步采用免疫组化联合抗体法进行检查。临床实践中，我们依据单个抗体对不同的肿瘤细胞具有不同的特异性与敏感性的原理，在此基础上，根据胸腹水沉渣石蜡包埋切片的结果选取相应的抗体，进而采用多种抗体进行联合检测4。目前，在胸腹水细胞学涂片中，我们常常采用 Calretin、CK-H、CEA 以及 TTF-1 四种抗体进行肿瘤的鉴别。其中，Calretin 属于一种钙结合蛋白，该物质主要存在于人体的神经元以及其他细胞中，常见于间皮瘤中，而在腺癌中则较少见，因此，该
7、物质可以作为恶性间皮瘤的标志物5；CK-H 属于一种高分子量的细胞角蛋白，往往在人体皮肤的基底细胞、棘层细胞以及部分前列腺基底细胞等细胞层均有所表达，既可以作为鳞癌与腺癌之间鉴别的标志物，同时还可以作为间皮瘤与腺癌之间鉴别的标志物6；CEA 主要存在于人体各种腺皮上皮源性肿瘤中，特别是在各种腺癌细胞中广泛存在，其中，该物质在人体的胃肠道腺癌中具有较高的阳性率，而在人体的体腔间皮细胞中则不存在，且在间皮瘤与增生性间皮细胞中呈现为不表达或者是低表达，因此，该物质是腺癌与间皮癌之间鉴别的重要标志7；TTF-1 主要存在于原发性肺腺癌中，且对其具有较高的敏感性与特异性，因此，该物质可以作为原发性肺腺癌
8、与转移性肺腺癌之间鉴别的标志物，同时该物质对于肺原发性低分化腺癌与鳞癌也具有一定的鉴别价值8。临床上采用 CKlow、CK-H、CEA 以及 TTF-1一组抗体联合应用作为鳞癌与腺癌的鉴别，同时还可以作为肿瘤细胞来源于肺脏的依据。Calretin 呈现为阳性表达说明患者为间皮瘤间皮增生，但是对其良恶性的具体判断还需依据患者肿瘤细胞的异型性、核分裂数等进行综合判断。CKlow 与 CK-H 均呈现为阴性，但 TTF-1 呈现为阳性，则应该考虑患者为肺未分化癌。 综上所述，在胸腹水沉渣石蜡包埋中联合应用免疫组化进行检查，能够提升临床检出率，确定肿瘤细胞的来源及其发病部位，为临床治疗提供参考意见。
9、参考文献： 1奉孝荣，陈莉，梁辉，等.胸腹水沉渣切片在脱落细胞学中的作用J.西部医学，2010，22（7）：1230-1231. 2黄金长，张功亮，郭广秀，等.细胞块石蜡包埋及免疫细胞化学染色技术在胸腹水细胞病理学诊断中的应用价值J.实验与检验医学，2013，31（5）：489-490. 3朱利，刘双元，冯君，等.胸腹水沉渣切片对肿瘤细胞诊断的意义J.临床和实验医学杂志，2011，10（13）：1037，1039. 4邢荣格，张晓玲，高远，等.免疫组化联合抗体在胸水析出物诊断中的应用J.河北医药，2012，34（5）：710-711. 5翟辉霞，李文灿.免疫组化联合抗体在胸腹水沉渣石蜡包埋病理诊断中的应用J.卫生职业教育，2014，32（4）：144-145. 6陈学敬，周立娟，曲杨，等.沉渣包埋联合免疫组化在胸水转移性肺腺癌与胸膜恶性间皮瘤鉴别诊断中的应用J.诊断病理学杂志，2014，21（5）：263-266. 7罗波，袁静萍，孔庆志，等.P63TTF-1 及 CD56 联合相关免疫组化肺癌诊断中的意义J.西部医学，2013，25（1）：63-65. 8朱林琳，罗明惠，孟亚飞，等.免疫组化抗体联合应用在胸腹水沉渣包埋病理诊断中的意义J.中国农村卫生，2015， （18）：45-45. 编辑/哈涛
