1、念珠菌对两种抗真菌药物的敏感性对比分析摘要：目的 检测念珠菌对 2 种抗真菌药氟康唑、伊曲康唑的体外药物敏感性，指导临床选择敏感的抗真菌药物。方法 实验受试菌株共 40株，均来自于 2013 年 1 月2014 年 11 月我院皮肤科患者送检的标本，均证实为念珠菌。用 M27-A2 法测试念珠菌对氟康唑、伊曲康唑的敏感性。结果 结果显示氟康唑、伊曲康唑对念珠菌的敏感率分别为75.5%、67.5%。结论 氟康唑、伊曲康唑对念珠菌均具有较好的敏感性，本实验结果显示两者无明显差异，因氟康唑价格相对低廉，且对念珠菌的抗菌作用较好，仍可作为念珠菌感染的主要治疗药物。 关键词：念珠菌；抗真菌药；药敏试验
2、念珠菌属一共含有 163 种菌种，存在于正常人的皮肤、呼吸道、消化道以及泌尿生殖道等部位，是人体的正常菌群，属于条件致病菌。随着广谱抗生素的广泛应用及宠物饲养量不断增多，皮肤真菌病的发病率有逐年增多的趋势。且病原菌感染的类型、致病病菌等，也呈现出明显的地区差异1。对此，本文选择最常用的 M27-A2 法进行对比，选择的药物为目前应用较多的氟康唑以及伊曲康唑，从念珠菌对两种抗真菌药的敏感性以及耐药性的差异，为临床念珠菌病（candidiasis）发现耐药菌株以及治疗提供依据。 1 资料与方法 1.1 一般资料 所用 40 株受试菌株，均来自于 2013 年 1 月2014 年11 月我院皮肤科患
3、者送检的标本临床分离株。按常规方法及科玛嘉念珠菌显色培养基联合进行菌株鉴定。以沙氏培养基 4冰箱保存。质控菌株采用 CLSI 推荐的质控株。所选药物均由厂家直接提供，所有药物均在有效期内。 1.2 方法 根据 CLSL/NCCLS 推荐的酵母微量稀释法抗真菌药物敏感试验参考方案 M27-A22严格进行操作，对分离的念珠菌进行氟康唑、伊曲康唑敏感性试验，方法如下。 1.2.1 药液的配置 实验前，分别将配置好的贮存的药液取出，置35温箱孵化解冻。然后用稀释液 RPMI-1640（内含 1%葡萄糖）进行倍比稀释，三种药液的配置如下：氟康唑：取药液先作 19 稀释，得到10 倍终浓度（128 g/m
4、l） ，然后将药液以 2 倍梯度倍比稀释，得到 10个梯度实验浓度的药液。氟康唑的终质量浓度范围在 0.12564 g/ml。伊曲康唑：取药液先作 19 稀释，得到 10 倍终浓度（160 g/ml） ，再次作 19 稀释，得到 10 倍终浓度（16 g/ml） ，然后将药液以 2 倍梯度倍比稀释，得到 10 个梯度实验浓度的药液。伊曲康唑的终质量浓度范围为 0.031316 g/ml。 1.2.2 受试药敏板的制备 在无菌 96 微孔板中用加样枪每行从第212 孔每孔分别加入配置好的（15）103CFU/ml 二倍终浓度菌悬液100 l；从第 211 孔，每孔加入药液 100 l，第 1、2
5、、3 行的药液分别为氟康唑、伊曲康唑，浓度按配置好的浓度范围由高到低；第12 孔加不含药的 RPMI1640 液基 100 l（作阳性对照） ；第 1 孔加入不含药的 RPMI1640 液基 200 l（作阴性对照） 。 1.2.3 质控药敏板的制备 方法同受试药敏板。质控株 MIC 结果稳定，质控株包含在每一次药敏试验中。 1.2.4 培养 将制备好的药敏板加盖后置 35恒温培养箱中进行孵育，培养 48 h，进行结果判定。 1.3 结果判定 评分标准：与生长对照孔相比肉眼观察完全透明或未见生长为 0 分；雾状混浊为 1 分（念珠菌 80%生长受抑制） ；浊度明显降低为 2 分（念珠菌 50%
6、生长受抑制） ；浊度轻度下降为 3 分；浊度未降低为 4 分。遇有团块、颗粒形成时用吸打、混悬器等技术分离混匀。本试验对 Itraconazole、Fluconazole 采取评分 1 分（即 80%生长受抑制，肉眼观察为雾状混浊）为判定终点基准 MIC。当药物的 MIC 值超过或低于测定范围时，按以下方法进行统计：当 MIC 值高于最高浓度 64 g/ml 或16 g/ml 时，按64 g/ml 或8 g/ml 计算，记为耐药；当 MIC 值为最低浓度以下时，则按0.03 g/ml 或0.0125 g/ml 计算，记为敏感。 1.4 统计学分析 应用 SPSS 13.0 统计软件，采用 2
7、检验对两种药敏试验方法进行对比分析。 2 结果 对于念珠菌对药物的敏感性，本研究现采用 M27-A2 方案对临床应用较早、价格相对低的氟康唑与近些年应用较广的伊曲康唑作对比分析。念珠菌对两种药的敏感性实验结果，见表 1。 用 SPSS 对其进行 2 检验，2=0.600，P=0.438，P0.05，表明两种药物对念珠菌的敏感性无明显差异，对念珠菌而言两者都是很好的抗菌药物。这与有些文献报道不符，考虑可能为样本量小或地区念珠菌敏感性差异有关。 3 讨论 本实验分别采用 M27-A2 法，测定 40 株临床分离念珠菌 MIC 值，试验表明，大多数菌株对所测的唑类药物是敏感的。氟康唑应用于念珠菌之间
8、的体外药敏试验研究最多。NCCLS 的判定折点为：MIC8 mg/L 敏感，1632 mg/L 是中介性敏感（I） ，64 mg/L 则为耐药。本药敏试验结果显示 75.5%的念珠菌对氟康唑敏感性较好，低于部分文献报道3，考虑可能与念珠菌的耐药性增加相关，但是有研究报道药敏试验提示耐药者仍有对治疗反应良好的现象。伊曲康唑用于念珠菌的体外药敏试验的研究相对氟康唑较少。M27-A 规定的判定折点为 MIC0.125 mg/L 为敏感，0.250.5 mg/L 为 S-DD，1 mg/L 则为耐药。MIC 为 S-DD 和耐药的菌株对伊曲康唑的反应差。 近几年，由于念珠菌感染的发病率和耐药率逐年增多
9、，甚至较少见的头癣也时常见到，它主要通过人与人、人与患病动物相互接触而引发4。为了提高对真菌病的诊断和治疗水平，临床微生物实验室需密切配合临床，做好真菌的常规检验的同时，应积极开创和改进真菌药敏试验方法，氟康唑、伊曲康唑对念珠菌均具有较好的敏感性，本实验结果显示两者无明显差异，因氟康唑价格相对低廉，且对念珠菌的抗菌作用较好，仍可作为念珠菌感染的主要治疗药物。此外，临床医生也应提高对药物敏感性测定的重要性认识，应用药敏试验，选择敏感的药物，减少耐药菌的出现。 参考文献： 1王迎林，陆祖萍，项彤，等.宁波地区浅部真菌病 3637 例致病菌的菌种分析J.中国皮肤性病学杂志，2012，26（10）：9
10、00-901. 2王端礼.医学真菌学实验室检验指南M.1 版.北京：人民卫生出版社，2005：103-104. 3Brunella Posteraro，Rosa Martucci，Marilena La Sorda.Reliability of the Vitek 2 Yeast Susceptibility Test for Detection of In Vitro Resistance to Fluconazole and Voriconazole in Clinical Isolates of Candida albicans and Candida glabrataJ.Journal
11、 of Clinical Microbiology， 2009，47（6）：1927-1930. 4Ali，Rezaei-Matehkolaei Koichi， Makimura G Sybren，de Hoog Mohammad Reza，et al.Multilocus differentiation of the related dermatophytes Microsporum canis，Microsporum ferrugineum and Microsporum audouiniiJ.Journal of medical microbiology，2012，61（Pt 1）：57-63. 编辑/罗茗柯
