1、浅谈如何用色谱荧光法检测烟气中的挥发酚成分摘 要建立了快速测定卷烟主流烟气中（邻、间、对）-苯二酚、（邻、间、对）-甲基苯酚和苯酚的超高效液相色谱荧光检测法（UPLC-FLR）.采用 1%的醋酸水溶液对剑桥滤片进行超声提取后，经 0.2m 滤膜过滤直接进行 UPLC 分析.利用 FLR 检测器分别对 7 种挥发酚进行定性定量，且（间、对）甲基苯酚可以完全分开.该法检测卷烟主流烟气中挥发酚相对标准偏差为 0.73%4.62%，回收率为 86.62%96.88%.方法具有前处理简便、分析时间短、重现性好等优点，适合卷烟主流烟气中酚类物质的批量快速检测. 关键词UPLC-FLR； 主流烟气； 挥发酚
2、 中图分类号：TU834.6+34 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2015）21-0115-01 挥发酚是卷烟主流烟气中重要的有害成分，被列入加拿大政府 46 种有害成分名单和 WHO“烟草制品管制研究小组”建议的管制成分清单.因此对卷烟主流烟气中挥发酚进行研究，对于了解烟叶香气质量和指导卷烟配方具有重要意义，并为卷烟减害降焦、烟草制品质量控制及中式卷烟的开发提供理论依据.挥发酚检测目前主要是高效液相色谱法，因其不需要样品预分离和衍生化，具有操作简单、可直接进行样品测定等优点，在酚类化合物的分析中得到了广泛的应用.使用液相色谱可在常温下进行测定，具有很高的灵敏度和精密度，但以往
3、的方法前处理较复杂，分析时间较长，且无法分开（ 间、对） 甲酚，只能合并定量.本文利用 UPLC FLR 同时测定主流烟气中的（ 邻、间、对）-苯二酚、 （ 邻、间、对）-甲基苯酚和苯酚，对 7 种化合物分别定性定量.方法具有前处理简便、分析时间短、重现性好等优点. 1 实验部分 1.1 主要仪器和试剂 仪器为美国 Waters 公司 Acquity 超高效液相系统，带有二元高压梯度泵、自动进样器、柱温箱和荧光检测器，以及 Waters Em-power 2.0 数据处理工作站.BS224S 电子分析天平（感量： 0.1 mg） ，JHN-2 型超声波清洗器，MILLI- Q 超纯水制备仪（美
4、国 MILLIPORE 公司）.甲醇（色谱纯试剂，Fisher 公司） ，醋酸（ AR，上海化学试剂有限公司） ，去离子水（电阻率18 M?cm）.（邻、间、对）-苯二酚（标样，Supelco 公司）.（邻、间、对）-甲酚和苯酚（标样，Dr.Ehrenstorfe GmbH 公司）质量分数 99.5%. 1.2 色谱条件 KinetexTM PFP（propyl-linkedpentafluorphenyl） 液相色谱柱 （ 2.6 m，50 mm2.1 mm） ，流动相为甲醇（ A）和 1% 醋酸水溶液（B） ，采用多级线性梯度洗脱程序，流速为 0.5 mL/min，柱温为 30 ，进样体积
5、 2 L，. 1.3 标准溶液的配制 称取邻、对-苯二酚，苯酚，邻、对-甲基苯酚各 100 mg，间-苯二酚、间 -甲基苯酚 20 mg 分别于烧杯中，加适量甲醇溶解后转移至 100 mL 容量瓶中，用甲醇溶解定容，作为标准储备液.存放在 4 冰箱中.取以上储备液各 2 mL 于 25 mL 容量瓶中混合，用甲醇定容，作为一级储备液.取一级储备液 5，2，1，0.2，0.1 mL 分别于 10 mL 容量瓶中，用甲醇定容，存放在 4 冰箱中. 1.4 烟丝的样品前处理 将卷烟样品在（221）和相对湿度 60%2%条件下平衡 48 h，用吸烟机按规定的标准条件抽吸卷烟，用 92 mm 剑桥滤片捕
6、集 20 支卷烟的主流烟气，吸毕，取出滤片.将 1 张捕集烟气粒相物的剑桥滤片折叠放入250mL 锥形瓶中，准确加入 40mL1%的醋酸水溶液，室温下超声萃取 20 min，静置 5 min，萃取液经 0.2m 滤膜过滤，立即检测. 2 结果与讨论 2.1 色谱分离条件选择 2.1.1 样品处理条件选择 据文献报道，在一定时间内可将主流烟气总粒相中挥发酚萃取完全，更长的萃取时间会因温度升高而导致挥发酚氧化损失.经过实验发现，20 min 即可以保证萃取完全，更长的时间挥发酚检测值会变小，因此挥发酚萃取时间选择 20 min. 2.1.2 流动相的选择 用水/甲醇作流动相时酚羟基易产生电离，峰拖
7、尾严重.用水/乙腈作流动相时，间、对甲酚无法分开.而用醋酸水溶液/甲醇作流动相可抑制酚酸的电离，形成疏水缔合物，使分离效果和峰形得到较大改善，因此选择 1% 醋酸水溶液/甲醇为流动相.根据 7 个组分的极性差别，采用等度洗脱难以实现各组分完全分离.经反复试验，最后确定流动相的梯度洗脱。 2.1.3 测定波长的选择 样品荧光最佳激发波长一般相当于其最大紫外吸收波长，而对于多组分检测，将激发波长固定在 250350 nm 间任意波长上，改变发射单色器的波长，可获得较多的色谱峰与较大的灵敏度的波长即为发射波长.本实验由于各挥发酚的最大激发波长和发射波长有差异，为提高仪器检测的灵敏度和选择性，分别测定
8、目标酚标样的最大激发波长和发射波长，并根据其出峰顺序确定程序检测波长. 2.2 工作曲线及检测限 将标准溶液进样检测，以峰面积 Y 对质量浓度（，g/mL） 进行线性回归，保留时间、回 归 方 程、相 关 系 数 及 检 测 限（ S/N =3）. 2.3 方法的回收率及精密度 抽吸相同卷烟 7 份，其中 4 份作空白，另外 3 份分别加入多酚混合标准溶液，按“1.4”节方法进行实验，根据 4 次平行测定的结果计算相对标准偏差.结果表明，3 种多酚的平均回收率为 86%96%，其相对标准偏差均小于 5%. 2.4 实际样品测定 按 1.4 方法处理，对 4 种卷烟样品同时进行了烟丝及卷烟主流烟
9、气中的多酚及挥发酚含量的平行样分析.其中还与文献对比了 1R5F 主流烟气中 7 种挥发酚的含量，结果相当. 3 结论 本文建立了利用 UPLC-FLR 法快速测定卷烟主流烟气中（ 邻、间、对）-苯二酚，苯酚， （邻、间、对）-甲基苯酚含量的分析方法，实验用 1% 的醋酸水溶液超声提取卷烟主流烟气粒相物中的（邻、间、对）-苯二酚，苯酚， （ 邻、间、对）-甲基苯酚后直接进样检测， 7 种成分在 5 min 中之内完全出峰，并且间、对甲基苯酚完全分开.本法前处理简单、准确度高、重复性好，耗时短，适用于大批量样品的分析. 参考文献 1 闫克玉.烟草化学M.郑州： 郑州大学出版社，2002. 2 Dietrich Hoffmann，Ilse Hoffmann.The less harmful cig-arette： A controversial issue.A tribute to Emst L.Wyn-derJ，Chem Res Toxicol，2001，14（7）：716-791. 3 刘芳，杨柳，倪朝敏，等.超声萃取-快速 HPLC 法测定卷烟主流烟气中的苯酚、甲酚和苯二酚J.烟草科技，2007，243（10）：31-35.
