1、三白通络胶囊急性毒性与长期毒性试验研究摘要：目的 通过研究三白通络胶囊的急性毒性与长期毒性反应，确定三白通络胶囊的安全性，为临床用药提供科学依据，保证用药安全。方法 以高剂量组 100g/kg，中剂量组 40g/kg，低剂量组 10g/kg 给大鼠连续灌服 12w，分别测量大鼠体重，三白通络胶囊测定血液学和血液生化学指标，并作组织病理学检查。结果 试验结果表明，三白通络胶囊各剂量组动物的观测指标与空白对照组比较，均无显著性差异。病理检查各脏器组织均未见药物中毒性病理形态学改变。停药后也未见药物延迟性毒性反应。结论 三白通络胶囊无急性毒性，耐受量大，临床用此药将是安全的。 关键词：三白通络胶囊；
2、急性毒性；长期毒性；耐受量 三白通络胶囊为我院一中药制剂，具疏风化痰，活血通络之功效，用于风痰淤阻所致的口眼?沸薄芪?面神经麻痹见上述症候者。为确保其安全性，为临床用药提供科学依据，我们进行了动物试验。 1 材料与方法 1.1 受试动物及药物 健康瑞士小白鼠，沈阳中国医科大学实验动物部；健康 Wistar 大白鼠，中国医科大学实验动物部。受试药物三白通络胶囊（丰南区中医医院制剂室，冀药制字 Z20051609 批号 150523） 。 1.2 方法 1.2.1 小鼠急性毒性试验 健康瑞士小白鼠 100 只，体重在1822g，雌雄各半，鼠料块正常饲养，给水及青菜，室温 22左右，试验前禁水禁食
3、12h 备用。为计算出半数致死剂量（LD50）对试验小白鼠进行 0%-100%致死量范围的预试验，取小白鼠 70 只，雌雄各半，随机分为七组，17 组每组 10 只。逐组依法酌情进行。首先第 1 组给以配制之 50%三白通络胶囊内容物水溶液 0.4ml/10g 体重，一次性灌胃给药，观察 7d 无不良反应无死亡时，再以同样方法增大剂量，观察 100%直至 600%三白通络胶囊内容物水溶液，直至浓度不能再增加为止。根据预实验结果，采用最大耐受剂量（MTD）实验法，取小白鼠 40 只，雌雄各半，随机分成三组。第 1 组 10 只为对照组。第 2 组 10 只为给药 1 组：给以 600%三白通络胶
4、囊内容物水溶液 0.4ml/10g 体重，一次性灌胃给药1。第 3 组20 只为给药 2 组，以同样药物浓度，同样剂量在第 1 次给药后 4h 再给药1 次。对照组以水代之，观察 7d，观察小白鼠有无明显毒性反应及死亡情况。 1.2.2 小鼠长期毒性试验 运用中国医科大学实验动物部培育的健康Wistar 大白鼠，体重在 90110g，雌雄各半，共 80 只，按体重性别随机分为四组，即对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组 20 只。以中国医科大学实验动物部生产之鼠类饲料块和青菜饲养。正常饲养 1w后进行试验。剂量及给药途径：将其冲剂以温开水溶解后经 灌胃给药。低剂量组：1 次/d，每次灌胃
5、 100%三白通络胶囊剂（每 1ml 含 1.0g 生药下同）2.0ml，即每日 10g/kg，此量稍大于临床成人等效量。中剂量组：1 次/d，每次灌胃 400%三白通络胶囊剂 2.0ml/只，即每日 40g/kg。高剂量组：2 次/d，每次灌胃 400%三白通络胶囊剂 2.5ml/只，即每日100g/kg。对照组：1 次/d，每次灌胃生理水 2.0ml/只。各组均连续给药12w。 1.3 观测指标 给药后注意观察大白鼠精神状态、活动、食欲变化、饮水、大小便性状及皮肤毛发等一般体征。每两周测体重一次。实验前和给药后第 6、12w 末由尾静脉取血进行行血细胞学和生化学检查。实验结束后各组取 50
6、%的大白鼠以乙醚全麻处死进行病理解剖学检查。其余大白鼠停药饲养观察 2w 后各组再取其 50%大白鼠以乙醚全麻处死，进行病理解剖学检查。每次病理解剖首先注意各脏器肉眼变化，并将所有脏器以 10%福尔马林水溶液固定，再取材、脱水、浸腊等病理学常规制片，H、E 染色，肝加苏丹 III 脂肪染色，光学显微镜观察。 2 结果 2.1 小鼠急性毒性试验 由表 1 和表 2 可以看出，配制成最大浓度为100%直至 600%的三白通络胶囊内容物水溶液，对小鼠进行一次性灌胃，未测出其半数致死量，说明本制剂无急性毒性作用。使用最大浓度对小鼠做进一步观察，观察 7d 小鼠无不良反应，无 1 例死亡。其最大耐受量为
7、临床患者用药量的 280 倍。 2.2 大鼠长期毒性试验 2.2.1 对大鼠一般指标的影响 给药后各给药组和对照组动物由于食欲好，体重逐渐增加，且各组间无显著性差异，见表 3。 2.2.2 对大鼠血常规指标的影响 以三白通络胶囊内容物混悬液，高、中、低不同剂量连续灌胃给药 12w，样品各组雌性、雄性大鼠的血红蛋白、红细胞、血小板、白细胞总数及其分类与对照组比较，差异均无统计学意义（P0.05） ，表明该样品对大鼠的血常规指标无明显影响，见表 4。 2.2.3 对大鼠血液生化指标的影响 以三白通络胶囊内容物混悬液，高、中、低不同剂量连续灌胃给药 12w，样品各组雌性、雄性大鼠的血清总蛋白、血清白
8、蛋白、血清球蛋白、谷丙转氨酶、尿素氮与对照组比较，差异均无统计学意义（P0.05） ，表明该样品对大鼠的血液生化指标无明显影响，见表 5。 2.2.4 对大鼠出血时间的影响 出血时间的测定：利用断尾出血法测之，每次以温水 4050水浴鼠尾 23min，擦干后剪之，首次距尾末端 0.5cm 处剪之，以后每次距末端 0.20.3cm 剪之。结果用药后各组大鼠出血时间缩短，见表 6。 2.2.5 对大鼠凝血时间的影响 凝血时间测定：利用断尾取血时，首先将尾部以 4050温水浴之。然后切断尾末端以毛细玻璃管吸之。然后定时折断毛细玻璃管以观察有无血纤维丝出现，计算凝血时间。结果各给药组凝血时间明显缩短，
9、见表 7。 2.2.6 对大鼠脏器的影响 对大鼠的脏器进行病理解剖学检查。 2.2.6.1 肉眼观察 给药各组和对照组大白鼠发育正常、营养良好、毛色光泽好、皮肤呈浅粉红色，口腔、鼻腔、肛门和外阴部无出血或异常分泌物。皮下脂肪层较厚。胸腔、腹腔、心包腔无积液，浆膜光滑，无粘连。心、肺、肝、脾、胰、肾、消化道、胸腺和肾上腺、卵巢、子宫、睾丸和大脑等均未见异状。延期观察各组动物亦无异常发现。 2.2.6.2 镜下观察 对各组所有动物之心、肝、肾、肺、脾、脑、内分泌腺等均制片观查，观查结果如下：心：给药组和对照组心肌纤维精细均匀、横纹清楚、排列整齐。胞核内脂褐素未见增多，亦未见变性、坏死或炎性反应。间
10、质无充血或炎性细胞浸润。心内膜和心外膜亦无异常变化。肺：给药各组和对照组肺泡大小较均匀一致，肺泡壁薄，内无充血或炎性细胞浸润。肺泡腔无炎性细胞渗出，亦未见水肿液。支气管周围未见明显炎性反应。肝：给药组和对照组肝组织结构完整，肝细胞大小均匀一致，肝素排列整齐，未见肝细胞变性或坏死，亦无炎性细胞浸润。肝窦清楚，窦内皮细胞无明显增生或肥大。汇管区小胆管和纤维组织未见增生，亦无炎性细胞浸润。肝苏丹 III 染色阴性。脾：包膜光滑，脾组织无明显增生，脾窦轻度扩张充血。胰：腺体及胰岛未见病变。胃、肠：肠、胃各层结构清晰，无变性坏死样改变。肾：各给药组和对照组双肾皮质与髓质分界清楚，肾小球大小一致，分布均匀
11、。肾小球内未见增生、充血或炎性细胞浸润。肾曲管上皮无变性或坏死，未见管型。间质内无充血或炎性细胞浸润。内分泌腺：各组之胸腺、肾上腺、睾丸和卵巢均未见异常。大脑：脑皮质和髓质结构清楚。脑内神经细胞未见变性或坏死，胶质细胞无明显增生，亦未见脑组织软化现象。 此外，对子宫组织学检查亦无异常改变。 实验结束次日，各组取 50%大白鼠用乙醚全麻处死，进行病理解剖观察。2w 后再取各组余下大白鼠的 50%，亦用乙醚全麻处死，进行病理解剖观察。4w 后将各组余下的大白鼠用乙醚全麻处死，进行病理解剖观察。各次解剖之大白鼠主要脏器均以 10%福尔马林水溶液固定，取材，病理常规制片检查。首次处死大白鼠各脏器未中毒
12、病变。各延长期处死的大白鼠无论大小剂量组的心、肺、肝、脾、胃、脑、消化管和内分泌腺均未见中毒性改变。 结果可见，对照组及个给药组动物各脏器组织均未见药物中毒性病理心态学改变。 3 结论 急性毒性试验中并未测出 LD50，最大耐受试验标兵，在 7d 的观察期内，小鼠近视、排便、活动正常，未见任何中毒表现，无小鼠死亡。 长期毒性试验，三白通络胶囊内容物经水溶解制成溶液，按低、中、高不同剂量连续给大白鼠灌胃 12w，给药各组和对照组在生长发育方面无明显差异，对血液细胞学和血液生化学无明显影响。对心、肝、肾、脑和内分泌腺及其他脏器亦无明显中毒反应。因而在 100g/kg 剂量下无毒、安全，此剂量已相当于人临床剂量的 58 倍。 参考文献： 1佟继铭，华正祥.健骨冲剂对大鼠长期毒性研究J.承德医学院学报 1997，014（003）：184.编辑/倪冰冰
