1、探讨糖尿病患者雌激素受体（ER）基因多态性与骨密度的关系摘要：目的 深入探讨糖尿病患者雌激素受体基因多态性与骨密度之间的联系。方法 选取我院 2012 年 11 月2014 年 10 月收治的 40 例糖尿病患者为研究对象，采用双能量 X 线法对患者的 BMD 进行测量，PCR-RELP 检测雌激素受体基因多态性，并与 60 例健康受检人群进行综合性比较。结果 检测结果显示，与健康人群相比，糖尿病患者 PP、xx 基因型频率明显更高（P0.05） 。 1.2 方法 1.2.1 骨密度及骨代谢相关指标的检测 采用的仪器为 NORLAND XR-36 双能量 X 线骨密度测量仪，首先对受检对象左侧
2、股骨近端的股骨颈、华氏三角、大转子以及第 2、3、4 以及 24 腰椎骨密度进行全面的测量。然后结合受检对象的基本临床资料计算其体重指数（BMI，kg/m2） ；研究中对受检对象的血钙、镁、磷等指标的测量则采用自动生化分析仪进行具体测量。 1.2.2 雌激素受体（ER）基因多态性检测 下游引物：5，-TCT TTC TCT GCC ACC CTG GCG TCG ATT ATC TGA-3， ；下游引物：5，-CTG CCA CCC TAT CTG TAT CTT TTC CTA TTC TCC-3， ；全血 DNA 抽提：2%EDTA 抗凝（1：0.2）全血 l，采用 Promega 公司生
3、产的全血 DNA 抽提试剂盒，抽提基因组 DNA，并将其充分溶于 60lTE 中，然后将其置于-20进行保存；PCR 反应：取基因组 DNA1.1l，下游引物及上游引物各20pmol，KC150mmol/L，dNTP200mol/L，MgCl22.5mmol/L，Tris-HCL 10mmol/L，Taq DNA Polymerase 0.5U，反应总体系为 30l；循环条件：72延伸 70s，61退火 45s，94变性 45s，严格经过 35 个循环后，72延伸 5min，上述操作完成之后，取产物 10l 经 1.5%琼脂糖凝胶电泳，紫外光下就扩增的结果进行详细的观察；最后，当反应终止以后，
4、产物经 1.5%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，借助美国阿尔法公司生产的凝胶图像分析仪射片，然后对基因型进行最后的分析：“P“、“X“表示不存在相应酶切点，“p“、“x“则表示存在相应的酶切点。 1.3 统计学处理 运用 SPSS.17.0 统计软件加以分析，使用（xs）表示本实验的计量资料，并应用配对 t 检验，差异有统计学意义P0.05。 2 结果 2.1 ER 基因多态的 PCR 及酶切结果 ER 基因 PCR 产物为长 1300bp 的片段，经 PvuII 酶切后 PP 型为单一条带 1300bp，Pp 型则为450bp、850bp 以及 1300bp 三条带，pp 型为 450bp 和
5、 805bp 而条带；经XbaI 酶切后 xx 型为 390bp 和 910bp 而条带，Xx 型为 390bp、910bp 和1300bp 三条带，XX 型为 1300bp 单一条带。 2.2 糖尿病患者于健康受检者 ER 基因多态性分布特点比较，1 型糖尿病（n=20）及 2 型糖尿病（n=20）PP 基因型频率分别为 5 例（25.00%）和 4 例（20.00%） ，健康受检人群（n=40）PP 为 4 例（10.00%） ，组间比较有统计学意义（P0.05） 。 3 讨论 从早期研究资料来看，界内普遍认为 2 型糖尿病患者的的骨量正常或小幅度升高2，而随着临床研究的深入我们发现，2
6、型糖尿病患者存在比较明显的骨代谢异常，骨密度降低则与患者继发性甲旁亢有直接或间接的额联系，并且与糖尿病病程呈明显的负相关；从性别角度来看，男性糖尿病患者腰椎 BMD 低于正常同龄对照，而女性腰椎 BMD 则并呈现低于同龄对照的情况，而相反是髋部 BMD 较低；从这一点我们也能够看出男性 BMD 除了会受到年龄因素的影响之外，糖尿病是一个非常重要的因素；而女性患者 BMD 除了与正常同龄人一样受绝经及其年龄因素的影响以外，糖尿病可在一定程度上加重其髋部骨量的流失。 结合而本次研究来看，我们还发现糖尿病及其慢性并发症与患者遗传因素具有非常紧密的联系，但是当前临床研究上还并没有关于 ER 基因多态性与糖尿病患者骨密度关系的研究资料，因此，我们还需要投入更多的精力进行更深层次的研究和探讨。 从研究结果及相关数据来看，糖尿病患者发生骨量减少和骨质疏松的情况比较高，ER 基因多态性的检测不仅能够对骨质疏松的分子遗传学发病机制有着不可替代的指导意义以外，还能够有效预测糖尿病患者发生骨质疏松的危险性，这对于糖尿病的患者来说意义重大。 参考文献： 1关美萍.雌激素受体基因多态性与 2 型糖尿病骨密度的相关研究D.第一军医大学，2000. 2吴洁，邱勇，张乐，等.青少年特发性脊柱侧凸患者雌激素受体基因多态性与骨密度的关系J.中国骨质疏松杂志，2012，3（11）：246-249. 编辑/金昊天
