1、实训项目十四 高效液相色谱柱的性能考察及分离度测试一、实验目的1. 了解高效液相色谱仪基本结构和工作原理，初步掌握其操作技能。2. 学习高效液相色谱柱效能的评定及分离度的测定方法。3. 了解高效液相色谱法在日常分析中的应用。二、实验原理在高效液相色谱中，若采用非极性固定相（如十八烷基硅烷，辛烷基硅烷等） 、极性流动相（由水和一定量的与水互溶的极性调节剂组成，如甲醛、乙腈等） ，即构成反相色谱分离系统。反之，则称为正相色谱分离系统。反相色谱系统所使用的流动相成本较低，应用也更为广泛。这种分离方式适合于同系物、苯并系物等。萘、联苯、菲在十八烷基硅烷键合硅胶柱上的作用力大小不等，它们的分配比不等，在
2、柱内的移动速率不同，因而随流动相流出柱子的时间顺序有先后之分。 定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。分离度： R= =柱效( 理论板数) ： n=5.54( )2=16( )2三、主要仪器与试剂1仪器高效液相色谱仪（配有紫外检测器） ；分析天平；C 18 色谱柱；超声波清洗器；流动相过滤器；容量瓶；吸量管；10L 平头微量进样器。2试剂苯、萘、联苯、正己烷等均为分析纯；甲醇（色谱纯） ；高纯水。四、操作步骤1色谱条件色谱柱：长 150nm，内径 4.6nm，装填 5m 的 C18 烷基键合固定相柱温：室温流动相：甲醇-水(87 :13)，流量 1.0mLm
3、in-1紫外检测器：波长 254nm，灵敏度 0.080。进样量：3L。2标准溶液的配制标准贮备液 配制含苯、萘、联苯各 1000gmL -1 的正己烷溶液，混匀备用。标准使用液 用上述贮备液配制含苯、萘、联苯各 10gmL -1 的正己烷溶液，混匀备用。3色谱测定按操作规程开启电脑，开启脱气机、泵、检测器等的电源，启动在线工作软件，设定操作条件。至系统稳定、基线平直后，即可进样。吸取 3L 的样品进样，记录各组分色谱峰的保留时间、峰面积及分离比，再重复进样两次。实验结束时，按操作规程清洗系统及色谱柱，关机。 五、数据记录与处理1.记录实验条件。2.记录色谱图中苯、萘、联苯的保留时间 ，测量相应色谱峰的半峰宽RtW1/2，计算各组分的理论塔板数 n 及分离度 R。已知组分的出峰顺序为苯、萘、联苯。六、注意事项1流动相要经脱气后方可使用。放置了 24h 或以上的水相或含水相的流动相如需再用，需用微孔滤膜重新过滤。2仪器长时间不用，每个泵通道和整个流路一定要用甲醇冲洗后保存，以免结晶或造成污染。七、问题与讨论1与气相色谱法相比，液相色谱法有哪些特点？2为什么高效液相色谱柱要采用 510m 粒度的固定相？3实验结束后，应如何清洗色谱柱？
