1、HPLC 法测定恩替卡韦原料的有关物质摘 要：目的：建立高效液相色谱法测定恩替卡韦有关物质的方法。方法：色谱柱为 KromasilC18（250mm4.6mm，5m） ，以乙腈-水-三氟乙酸（100：900： 1）为流动相，流速为 1mlmin-1，检测波长为254nm。结果：在本方法中，恩替卡韦的线性关系良好，r 为 0.9999；专属性强，恩替卡韦与各中间体及各降解产物之间都有良好的分离度；精密度和稳定性良好，RSD 均小于 2%。结论：该方法准确、简便、快速，可用于恩替卡韦的有关物质测定。 关键词：恩替卡韦 有关物质测定 高效液相色谱法 Determination of Entecavi
2、rTablets by HPLC Zhao Hai-qiao Chen man Zhao Ji-fang （Shandong Fangming Pharmaceutical Group CO.，LTD.，Dongming 274500 ，China） Abstract：Objective To establish a method for the determination of Entecavirby HPLC.Methods The determination was carried out on Kromsil C18column，with Acetonitrile-water- Tri
3、fluoroacetic acid （100：900： 1） as the mobile phase at the flow rate of 1.0ml？min-1 .The detection wavelength was 254nm. Results The method showed good linearity with a correlation coefficient （r） of 0.9999； the precision and stability were satisfactory with all RSDs below 2%. Conclusion This method
4、is an accurate，fast and simple method for the determination of Entecavirtablets. Key word： entecavir determination HPLC 恩替卡韦是由美国百时施贵宝（Bristol Myers Squbb）公司在20世纪 90年代开始研制开发的一种新型抗乙肝病毒新药，主要用于治疗成人伴有病毒复制活跃和血清转氨酶持续增高，或肝组织学为活动性病变的慢性乙型肝炎，是目前降病毒最快最强、变异几率最低的核苷类似物。恩替卡韦是新一代抗 HBV核苷类似物药物，因其具有高效的抗病毒治疗作用和极低的耐药率而成为
5、抗病毒治疗的首选。本文建立的方法，方法简便，结果可靠。 一、仪器与试药 1.仪器 日本岛津 SPD-20A 高效液相色谱仪。 2.试药 恩替卡韦对照品（山东方明药业集团股份有限公司，1203001） ；乙腈、三氟乙酸为色谱纯；水为纯化水；其它试剂均为分析纯；恩替卡韦（山东方明药业集团股份有限公司；批号：1310001、1310002、1310003） 二、方法与结果 1.色谱条件 色谱柱为 KromasilC18（250mm4.6mm，5m） ，以乙腈-水-三氟乙酸（10：900： 1）为流动相，流速为 1mlmin-1，检测波长为 254nm，柱温为 30，进样量为 20l。 2.供试品溶液
6、的制备 取恩替卡韦对照品约 20mg，精密称定，置 100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液。 3.对照溶液的制备 精密量取恩替卡韦供试品溶液 0.1ml，置 100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。 4.专属性试验 破坏试验：取恩替卡韦适量置 100ml容量瓶中，照下述方法试验：（1）加 1.0mol/L盐酸溶液 2ml并放置 8小时作为酸破坏样品；（2）加1.0mol/L氢氧化钠溶液 2ml并放置 8小时作为碱破坏样品；（3）加 3%过氧化氢溶液 2ml并放置 8小时作为氧化破坏样品；（4）置 4500lx光照度下 8小时作为光照降解样品。结果表明：恩替卡
7、韦对酸、碱、氧化剂及光照均较稳定，各降解产物分离度良好。 5.线性关系考察 精密称取恩替卡韦对照品约 20.0 mg，精密称定，置 100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为储备液，精密量取储备液 1ml置 100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为溶液，精密量取溶液2.0，1.0，1.0，1.0ml，分别置 10ml、10ml、20ml、100ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为溶液、，按上述液相条件，分别进样 20l，记录色谱图峰面积。以恩替卡韦峰面积 A为纵坐标，浓度 C为横坐标计算得回归方程为：A=1256.21C+20.326 R=0.9999。结果表明恩替卡韦在 0
8、.022g/ml 浓度范围内线性关系良好。 6.精密度试验 精密量取供试品溶液及对照溶液各 20l，按上述液相条件，连续进样 6次， RSD 均小于 2.0%。结果表明，精密度良好。 7.稳定性试验 取恩替卡韦供试品溶液，室温下在 0、2、4、6、8 小时测定，结果表明，本品的供试品溶液在室温 8小时内稳定，计算得：RSD=1.0%，n=5。 8.样品测定 对批号为 1310001，1310002，1310003 的恩替卡韦样品，按照“2.2及 2.3”项下方法制备供试品及对照溶液，结果见表 1。 表 1 样品有关物质测定结果表 三、结果与讨论 1.流动相的选择 曾比较了乙腈-水（10：90） ，甲醇-水（20：80） ，乙腈-水-三氟乙酸（10：90：0.1）等 3 种流动相的分离情况，发现乙腈-水-三氟乙酸（10：90：0.1）分离效果好，且峰形比较好，故选择该流动相。 2.检测波长的选择 以甲醇为溶剂，配置 0.05 mgmL的溶液，在 200400nm 范围内扫描，结果表明，在 254nm 波长有最大吸收，故将 254nm 作为检测波长。 参考文献 1国家药典委员会.中华人民共和国药典 2010年版（二部）S.北京：中国医药科技出版社，2010：附录D. 2冀满丰.高效液相色谱-梯度洗脱法测定恩替卡韦分散片的含量和有关物质J.中国药业，2012，21（9）：26-27.
