1、HPLC 法同时测定复方氨酚愈敏口服溶液中三种组分的含量摘 要：目的：建立 HPLC 法同时测定复方氨酚愈敏口服溶液中愈创木酚磺酸钾、对乙酰氨基酚、咖啡因含量的方法。方法：以 FL2200-II高效液相色谱仪，采用 Ultimate XB-C18 色谱柱，流动相 50mM 磷酸二氢钾溶液（含 1%三乙胺，用磷酸调节 PH 为 3.0）-甲醇（84：16） ，检测波长 210nm，流速 1.0mL/min。结果：愈创木酚磺酸钾、对乙酰氨基酚、咖啡因分别在 6-120g/mL（R2=0.9996） 、6-120g/mL（R2=0.9996） 、5-100g/mL（R2=0.9999）范围内线性良好
2、，平均含量为0.66%，0.97%，0.70%，平均加标回收率为 101.5%，99.2%，98.1%。结论：方法简便，准确度高，重现性好，可应用于愈创木酚磺酸钾、对乙酰氨基酚、咖啡因的含量测定。 关键词：HPLC 法 复方氨酚愈敏口服溶液 愈创木酚磺酸钾 对乙酰氨基酚 咖啡因 复方氨酚愈敏口服溶液为复方制剂，其成份为愈创木酚磺酸钾、对乙酰氨基酚、咖啡因等，其中愈创木酚磺酸钾为刺激性祛痰药，具有促进支气管分泌，使痰液便稀易于咳出，同时兼有微弱的抗炎作用1；对乙酰氨基酚为苯胺类解热镇痛药，具有良好的解热镇痛作用2； 咖啡因本省就具有收缩头部血管，缓解头痛的作用，对乙酰氨基酚具有协同效果，可促进对
3、乙酰氨基酚的吸收，增强镇痛疗效3。 常见对这三种组分的含量分析方法为气相色谱法4、分光光度计法5-6、高效液相色谱法7-10，但未见对复方氨酚愈敏口服溶液中的三种组分的检测分析相关报道。因此实验采用 HPLC 法，同时测定复方氨酚愈敏口服溶液中的愈创木酚磺酸钾、对乙酰氨基酚、咖啡因的含量，结果表明方法可使上述三个组分实现良好的分离与分析，并且简便准确， 重复性好，可作为复方氨酚愈敏口服溶的质量控制和质量研究。 一、仪器与试剂 FL2200-II 高效液相色谱仪（浙江福立分析仪器有限公司） ，色谱柱为 Ultimate XB-C18/4.6250mm， 5m（月旭材料科技（上海）有限公司） ；H
4、S2060 超声波清洗器（浙江福立分析仪器有限公司） ；JA2004 型电子分析天平（上海雷韵公司） 。 甲醇（色谱纯，美国进口） ；水为超纯水；磷酸（优级纯，国药集团）；磷酸二氢钾、三乙胺（分析纯，国药集团） ； 标准品：愈创木酚磺酸钾、对乙酰氨基酚、咖啡因（国家标准物质研究中心，含量均99.9%） ； 样品：复方氨酚愈敏口服溶液（海南三风友制药有限公司，市售） 。 二、方法与结果 1.标准溶液制备 精密称取对乙酰氨基酚标准品 60mg，置 50mL 量瓶中；取愈创木酚磺酸钾标准品 30mg，咖啡因标准品 25mg，分别置于 25mL 容量瓶中，加水使溶解，并稀释至刻度，摇匀作为储备液。精密
5、称取对乙酰氨基酚储备液 20mL，愈创木酚磺酸钾储备液 5mL，咖啡因储备液 3mL，置于 200mL 容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，作为混合标准品溶液，即得。 2.供试品溶液的配制 精密量取某复方氨酚愈敏口服溶液 1g，置 100mL 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，摇匀，以 0.45m 微孔滤膜滤过，作为供试品溶液，即得。 3.色谱条件 色谱柱为 Ultimate XB-C18/4.6250mm，5m，流动相为 50mM 磷酸二氢钾（含 1%三乙胺，用磷酸调节 PH 为 3.0）-甲醇=84：16，流速为1.0 mL/min，检测波长为 210nm，柱温 35，进样量 20L。复方氨酚
6、愈敏口服溶液中三种组分色谱图见图 1。 图 1 三种组分标准品（A）和某样品（B）的 HPLC 图 1.愈创木酚磺酸钾；2.对乙酰氨基酚；3.咖啡因 4.精密度试验 精密吸取同一混合标准品溶液 20L，按上述色谱条件，连续进样 6次，测定愈创木酚磺酸钾、对乙酰氨基酚、咖啡因峰面积值， 计算 RSD分别为 0.35%，0.28%，0.09%。结果表明仪器精密度良好。 5.线性关系 分别精密吸取标准品溶液 0.5，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0mL 置 10mL量瓶中， 以流动相稀释至刻度，摇匀， 得不同浓度的混标溶液；分别精密吸取 20L 按上述色谱条件进样测定色谱峰面积，以标准品浓度（
7、ug/mL）为横坐标， 峰面积值为纵坐标， 进行线性回归。结果表明各成分在各自进样范围内线性关系良好， 见表 1。 表 1 三种组分的线性关系 6.稳定性试验 取同一供试品溶液，于上述色谱条件下，分别在0，1，2，4，8，12h 后进样，测得在 12 h 内愈创木酚磺酸钾、对乙酰氨基酚、咖啡因峰面积，计算其 RSD 分别为 1.0%，1.5%，0.9%，表明供试品溶液在 12h 内稳定。 7.样品含量重复性试验 精密称取同一样品 6 份，照上述供试品制备方法制备，按上述色谱条件下进样。测得愈创木酚磺酸钾、对乙酰氨基酚、咖啡因的平均含量为 0.66%，0.97%，0.70%；RSD 分别为 0.
8、36%，0.20%，0.62%。结果表明样品含量测定重复性良好。 8.加标回收试验 取某复方氨酚愈敏口服溶液，称取 9 份，每份为 0.2g，每三份为一组，依次加入混合标准品溶液第一组 4 mL，第二组加入 5 mL，第三组加入 6 mL，后以流动相溶解稀释定容于 25mL 容量瓶中，按上述色谱条件下分析。实验所得创木酚磺酸钾、对乙酰氨基酚、咖啡因平均加标回收率为 101.5%，99.2%，98.1%；RSD 分别为 1.03%，0.88%，1.56%。 三、讨论 1.检测波长的选择 分别对愈创木酚磺酸钾、对乙酰氨基酚、咖啡因进行 190-700nm 全波长扫描，发现对乙酰氨基酚、咖啡因在 2
9、10nm附近有最大吸收，而愈创木酚磺酸钾也会有较大吸收，确定 210nm 为检测波长。 2.流动相的选择 考察甲醇-水、甲醇-缓冲盐等流动相，实验表明在甲醇水体系中，峰形拖尾严重，即使添加不同比例的减尾剂三乙胺均无法改善，只有在甲醇-缓冲盐体系中，可以通过对有机系比例的调整和添加三乙胺，能实现良好的峰形和分离度，所以确定 50mM 磷酸取磷酸二氢钾（含 1%三乙胺，用磷酸调节 PH 为 3.0）-甲醇=84：16 为实验流动相。 3.分析方法验证结果表明，HPLC 法同时测定复方氨酚愈敏口服溶液中愈创木酚磺酸钾、对乙酰氨基酚、咖啡因含量，方法简便，准确度高，重现性好，可用于相关组分的含量测定。
10、 参考文献 1赵明.高效液相色谱法测定复方愈创木酚磺酸钾口服溶液中 2 组分的含量J，中国医院药学杂志 2008，28（1）：77-78. 2陈湘荔.HPLC 法测定美扑伪麻片中对乙酰氨基酚含量J，海峡药学 2011，23（8）：50-52. 3佚名.对乙酰氨基酚+咖啡因协同治疗头痛简介J，今日药学 2010，20（3）：63. 4郭晓玲，钱蔚，扬长金，等.毛细管气相色谱法测定速效伤风胶囊中对乙酰氨基酚、咖啡因、马来酸氯苯那敏的含量J，色谱 1998，16（2）：164-166. 5文霞，林卫.伤风止咳糖浆中愈创木酚磺酸钾的分光光度测定法J，中国医药工业杂志 1993，24（2）：77-79.
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