1、开题报告化学液质联用测定银杏提取物中银杏酸的方法研究一、选题的背景与意义在生活水品不断提高的今天，健康与美丽成为人们不断追求的目标。作为天然活性成分的代名词银杏便备受热捧。无论是时尚美丽的美容界，还是天然健康的保健品行业，又或者是不断探索的医药品领域，都随处可见银杏的芳名。尤其医疗领域中，银杏是一种药用历史悠久的植物，以银杏黄酮和银杏内酯为主要成分的银杏叶制剂是目前国际上流行的治疗心脑血管疾病的天然有效药物，许多国家都致力于银杏叶制剂的开发。银杏叶提取物（EGB）的化学成分不仅包括银杏黄酮/内酯等主要有效成分，还有银杏酸这一有害成分。银杏酸是国内外一致公认的潜在过敏物质，是自然界中最强烈的接触
2、性过敏原中的成分之一，可引起严重的过敏反应，还会引起基因突变、神经损伤等。德国卫生部规定银杏提取物EGB制剂中银杏酸的含量必须小于5UG/G。市面上竟然有人在EGB中利用芦丁等掺杂使假，但现行质量标准又无法控制，这个问题如果不解决，终究会影响银杏叶制剂的功效，损害并断送我国的银杏叶产业。所以，真正全面控制EGB的质量迫在眉睫1。我国是银杏种植大国，也是银杏叶提取物生产和出口大国，因此，建立准确的银杏酸检测方法就显得尤为重要。二、研究的文献回顾目前就银杏酸的检测没有规定的国家标准，但是相关文献报道不少。其中关于由于实验者不同，实验方法也竞相各异，归纳起来大致有以下几大类不同的方法。21高效液相法
3、王志强黄胜海张琰曾报道过利用AGILENT1100高效液相色谱仪对SCCO2萃取和甲醇回流萃取银杏果外种皮中的银杏酸进行含量测定2。沈刚，姚渭溪报道过一种用改性的超临界二氧化碳萃取和离线的反相高效液相色谱分析银杏叶提取物中银杏酸含量的方法。以硅胶为载体，在30MPA、55条件下，8甲醇作改性剂时的超临界二氧化碳萃取，最小检测限为042MG/L4。仰榴青，吴向阳，陈钧还报道过反相高效液相色谱法测定银杏外种皮中银杏酸含量的方法，该方法以INERTSILODS2色谱柱，流动相为甲醇3HAC溶液928，V，V，流速10MLMIN，检测限52NG。但银杏外种皮提取物经硅胶柱层析预处理5。孔玉霞，李晨恺，
4、王盼盼，宋金玉报道了银杏酸含量的反相高效液相色谱测定方法。银杏酸在酸性盐溶液中，仅用正己烷萃取后的样品即可供HPLC分析，避免了多次浓缩过程。研究表明，此定量分析方法可用于银杏制剂中银杏酸含量的定量检测，最小检出量为041MG/L8。22紫外光度法吴向阳，仰榴青，陈钧在不同生长季节银杏叶中有毒成分银杏酸含量的测定中报道过银杏叶经正己烷处理后用紫外分光光度法测定银杏叶中有毒成分银杏酸含量的方法。该方法最低可测至572106，可用于银杏叶和银杏茶中有毒成分银杏酸的定量分析3。23液质联用法何静仁，谢笔钧用LC/ESI一MS对银杏叶提取物中银杏酸进行鉴定，并用反相银化HPLC研究4种银杏酸的分离和含
5、量测定。在银杏叶的乙醇浸提液中加酸性盐溶液和少量吸附剂后，用正己烷提取，浓缩后的残留物进行HPM分析。流动相为甲醇5乙酸9010,其中银离子浓度为003MOL/L。HPLC和二极管阵列检测联用对银杏酸色谱峰进行光谱分析和纯度鉴定9。陈学国，孔亮等报道过全二维液相色谱串联质谱分离分析模式，将质脂体色谱柱和ODS反相色谱柱作为二维分析色谱柱，二者通过一个连有两个05ML定量环的八通阀耦联。质脂体色谱柱上的馏分在反相色谱柱上分离后，直接进入紫外一检测器，然后经分流器分流后进入大气压电离质谱方法来分析银杏叶提取物成分。不过该方法只给出了定性分析，并未给出定量分析结果6。吴向阳,仰榴青,陈钧等报道了银杏
6、叶提取物及其制剂经石油醚提取,提取液浓缩后用石油醚定容,HPLC直接测定,并用LC/MS对其中的银杏酸进行了定性鉴定。结果大致给出总银杏酸含量并未给出单一银杏酸含量710。KARINENDJOKO,JEANLUCWOLFENDER等曾用LCESIMS检测过银杏叶中银杏酸的含量，该方法需要经过氯仿等有机溶剂萃取，还要过硅胶柱等繁琐的前处理15。综上所诉，目前检测银杏酸的方法主要以HPLC法为主，高效液相法的技术较成熟，但大多测定结果均未能达到5PPM以下的标准。紫外分光光度法用于定量分析误差较大，准确度不高。液质联用技术处于起步阶段有待进一步确定及提高，从而满足相关国际限量标准。三、研究的技术路
7、线与预期目标拟采取的技术路线预期达到目标建立较为简洁步骤方法，选择一种能较好提取该类化合物的溶剂，进行充分快速的净化、浓缩操作，并确保方法的回收率；色谱分离条件要满足化合物的残留分析，能对银杏提取物中银杏酸残留量情况进行检测。检测方法能满足兽药残留以及分析化学行业的分析要求，最低检测限达到国内外相关技术标准，符合出入境检验检疫药物残留控制限量要求。四、研究的总体安排与进度2010年10月15日完成选题工作2010年10月16日2010年12月10日外文翻译，文献综述和开题报告2010年12月11日2011年1月20日实验验证及方法初步探索2011年2月20日2011年4月3日实验条件优化与数据
8、整理2011年4月4日2011年5月3日毕业论文撰写2011年5月4日2011年5月20日毕业答辩五、主要参考文献1祝匡善,刘明警惕银杏叶制剂中的银杏酸含量N医药经济报,2007,200701192王志强,黄胜海,张琰不同工艺提取银杏外种皮中银杏酸及含量的测定J现代农业科技，2009（24）3263283吴向阳，仰榴青，陈钧不同生长季节银杏叶中有毒成分银杏酸含量的测定J分析检测，2002，23（12）94974沈刚，姚渭溪超临界流体萃取和高效液相色谱法测定银杏酸J分析化学研究简报，2000，28（8）9859885仰榴青，吴向阳，陈钧高效液相色谱法测定银杏外种皮中银杏酸的含量J分析化学研究样品
9、提取、净化、浓缩液液提取净化浓缩条件的建立、优化色谱柱分离条件HPLCPDA色谱条件建立、优化LCMS/MS测定数据处理、结果技术报告数据分析、建立详尽方法报告，2002,30（8）9019056陈学国，孔亮，盛亮洪，厉欣，邹汉法全二维液相色谱串联质谱用于银杏叶提取物成分分析的研究J色谱，2005，23（1）46517吴向阳，仰榴青，陈钧高效液相色谱法测定银杏叶提取物及其制剂中银杏酸的含量J药学学报，2003，38（11）8468498孔玉霞，李晨恺，王盼盼，宋金玉银杏酸的定量分析方法研究J辽宁大学学报，2010，37（1）57609何静仁，谢笔钧银杏酸的反相银化高效液相色谱法分离和测定J药学
10、学报，2001,36（8）60961210聂黎行，鲁静银杏叶提取物中总银杏酸的HPLC法限量检测J药物分析杂志，2005，25（8）90991111仰榴青,吴向阳,杨克迪,尹秀莲,陈钧银杏酸分析方法研究进展J药物分析杂质，2003,23（3）24124412蒋永红，王佩维,李五洲,曹礼群银杏叶提取物中银杏酸的分离与分析J日用化学工业，2002,32（3）666813王颖,盛龙生,楼凤昌,张正行,安登魁银杏总酸中有关成分的LC/DAD/API/MS分析J中国药科大学学报，2001,32（5）37137414魏秀莉,唐翠,印春华银杏叶提取物中银杏酸的HPLC测定J中国医药工业杂质，2003,34（
11、6）29529615KARINENDJOKO,JEANLUCWOLFENDER,KURTHOSTETTMANNDETERMINATIONOFTRACEAMOUNTSOFGINKGOLICACIDSINGINKGOBILOBALLEAFEXTRACTSANDPHYTOPHARMACEUTICALSBYLIQUIDCHROMATOGRAPHYELECTROSPRAYMASSSPECTROMETRYJJOURNALOFCHROMATOGRAPHYB,2000,74424925516NFUZZATI,RPACE,FVILLAASIMPLEHPLCUVMETHODFORTHEASSAYOFGINKGOL
12、ICACIDSINGINKGOBILOBAEXTRACTSJFITOTERAPIA,2003,7424725617DIRKLICHTBLAU,JOHNMBERGERANDKOJINAKANISHIEFFICIENTEXTRACTIONOFGINKGOLIDESANDBILOBALIDEFROMGINKGOBILOBALEAVESJNATPROD,2002,651501150418HONGJUNXIA,XIAODANWANG,LILI,SHENGJIAWANG,CHANGCHUANGUO,YAOLIU,LUSHANYU,HUIDIJIANG,SUZENGDEVELOPMENTOFHIGHPERF
13、ORMANCELIQUIDCHROMATOGRAPHY/ELECTROSPRAYIONIZATIONMASSSPECTROMETRYFORASSAYOFGINKGOLICACID151INRATPLASMAANDITSAPPLICATIONTOPHARMACOKINETICSSTUDYJJOURNALOFCHROMATOGRAPHYB,2010,8782701270619王军，钱虹银杏酸分析方法的研究世界农药，2008,31（1）525420ECKHARDLEISTNERANDCHRISTELDREWKEGINKGOBILOBAANDGINKGOTOXINJJOURNALOFNATURALPR
14、ODUCTS,2010,731869221HISASHIKURIBARA,SUSANTWEINTRAUB,TATSUMIYOSHIHAMA,ANDYUJIMARUYAMAANANXIOLYTICLIKEEFFECTOFGINKGOBILOBAEXTRACTANDITSCONSTITUENT,GINKGOLIDEA,INMICEJJOURNALOFNATURALPRODUCTS,2003,66（10）1333133722张小利，欧阳臻，杨克迪，陈钧银杏酸的分离制备及HPLC分析J中药材，2003，26（8）55755923赵月珍,陈正收,徐瑾,周应军银杏酸的分离与银杏叶制剂中银杏酸的含量测定J中医药导报，2006,12（7）868824张洪国,李晖色谱技术在银杏酸分析中的研究应用J现代仪器，2003，31113
