1、文献综述化学固相微萃取高效液相色谱法测定己烯雌酚己烯雌酚是一种人工合成的非淄体雌激素，别名人造求偶素，无色结晶粉末，能溶于甲醇，乙醇，乙醚，氯仿，脂肪油，强碱溶液中，几乎不溶于水。因其能促进蛋白合成，加快增重和骨骼钙化，并减少饲料消耗，被用作鸡，牛，羊等畜禽促长增肉剂；同时在水产养殖，女性丰胸化妆品的方面也有使用。己烯雌酚残留会给消费者带来不良的生理影响（儿童性发育异常，男性出现女性特征）。会损害肝肾功能。从六十年代初开始，意大利、荷兰、波兰、秘鲁、刚果、墨西哥、丹麦、爱尔兰等国家已制定法律禁止在饲料中添加，20世纪70年代，比利时、法国、德国、菲律宾、加拿大、瑞士、南斯拉夫、美国也相继禁止使
2、用，1975年FAO/WHO禁止使用己烯雌酚。2002年，我国农业部第193号公告规定截止2002年5月15日，己烯雌酚及其盐、酯制剂停止在所有食品动物中使用；第235号公告规定在动物性食品中不得检出己烯雌酚。目前，世界上多国家禁止在食品中使用己烯雌酚。己烯雌酚测定方法有酶联免疫测定法、放射免疫法、GCMS测定法等。而从前人大量的DES残留量测定实验研究来看，它在动物组织或动物性食品中残留度很低，这就要求我们能测定出极低的浓度的DES，在对样品进行预处理时，我们选用具有富集作用的固相微萃取（SPME），使待测液的浓度达到HPLC的检出范围。试样的预处理是样品分析中至关重要的一环，其目的在于减小
3、杂质对待测无的干扰及对试样的痕量待测组分进行预富集,其方法有超声波萃取、固相萃取（SOLIDPHASEEXTRACTION，SPE）、液液萃取等。固相微萃取技术（SPME）11即为其中的一种，它操作步骤简单，不需要大量溶剂，集采集、萃取、浓缩于一体，且具有萃取速度快、灵敏度高、便于实现自动化以及易于色谱、电泳等高效分离检测受锻炼用等突出的优点。一般而言，可采用气相色谱（GC）进行分析检测的化合物均采用SPME方法进行萃取分析，即用于GC的进样系统而形成SPMEGC联用技术，并迅速成熟。另一方面，由于GC只适用于强挥发性或中等挥发性的中低极性化合物的分析，而对于低挥发性或不挥发性的高极性物，如药
4、物、肽、蛋白质、强极性的杀虫剂等，高效液相色谱（HPLC）则具有比GC更多的优势。因此，自1995年，CHEN等人13首先设计出SPMEHPLC联用仪器的接口装置，并以稠环芳烃考察了了这种方法的分析性能，得到了较好的效果，并证明此方法与一般的HPLC直接进样方法在分析性能上无差别，到其由最初的手动方式又发展为自动化的管内（INTUBE）方式，并在涂层材料的研究、分离条件的优化及应用领域的拓宽上都有了新的发展。SPMEHPLC联用技术得到进一步完善。SPMEHPLC联用得以实现的关键在于其解吸过程是否能与HPLC进样系统匹配,即能否使解吸液的体积足够小,以避免在进样后产生明显的柱外效应或出现超载
5、现象而导致色谱峰严重拓宽,致使分辨率下降,直接影响分析的灵敏度。例如,若涂层厚度为7M,待测物的扩散系数为1010M2/S,在流动相连续流动而待测物在流动相中有较好的溶解度的情况下,依据式4,解吸过程将在1S内完成。由于待测物都将集中在解吸液的前部,因此可以以很少的解吸溶剂完成解吸过程,使进样体积足够小。CHEN等人以苯并芘为考察对象,在以乙腈水体积比为9010为流动相时,得到了012L的解吸体积,没有出现超载。由于不同的待测物在流动相中的溶解度不同将导致解吸体积发生较大的变化,因此应在操作中针对不同的分析对象选择合适的解吸溶剂。萃取头涂层萃取头是SPME装置的装置的核心,其涂层的性质已经成为
6、SPME方法成功与否的关键。与其他萃取方法一样,SPME萃取头涂层同样是遵循“相似相溶”的原则,如同毛细管色谱柱的选择一样,没有一种萃取头能够萃取所有的化合物。萃取头涂层的极性与厚度必须与分析物的性质相匹配,具有极性较强涂层如聚丙烯酸酯PA的萃取头适合于萃取极性化合物,而具有非极性的聚二甲基硅氧烷PDMS涂层的萃取头则主要用于非极性化合物的萃取。理想的萃取头涂层应能满足下述四方面的要求对于分析物要有较强的萃取能力、能在较短时间内达到吸附平衡、热解吸时分析物能迅速地从萃取头上解吸、所选萃取头必须具有良好的热稳定性。萃取时间的确定为了获得高灵敏度并减小环境因素的影响，本试验采用平衡采样，即当分析物在采样相与样品间达到分配平衡后再停止萃取。对可能影响平衡时间的环境因素，如PH、缓冲溶液浓度以及盐度，进行了考察，在环境水样的常见PH（58），缓冲容量（5200MMOL/L）以及盐度（0500MMOL/L）范围内，选取达到萃取平衡的时间即为萃取时间。测定样品DES的原理样品均浆后，经甲醇提取过滤，通过HPLC色谱分离，用紫外检测器检测，根据RT定性。在波长230NM处测定吸光度，同条件下绘制工作曲线，DES含量与吸光度值在一定浓度范围内成正比，样品与工作曲线比较，进行定量。
