1、浅谈国内菌种保藏材料和保藏方法摘要：菌种保藏是为了保持菌种的生物活力，确保其不被污染，不发生生物变异，使其接近原始菌株的状态。主要介绍了近年来我国菌种保藏的方法和保藏材料。 关键词：菌种保藏 保藏方法 保藏材料 菌种是国家的重要资源，为了保证菌种在传代过程中不发生变异，丧失其优良特性。因此，每个国家都十分重视菌种的保藏。菌种保藏是为了保持菌种的生物活力，确保其不被污染，不发生生物变异，使菌种在保藏的过程中力求其保有原始菌株的状态。所以，探究菌种保藏方法和保藏材料对我国菌种保藏具有十分重要的意义。 1、菌种保藏的原理 菌种保藏技术的原理是利用微生物的生化特点，通过人工模拟，制造特殊的生存条件对菌
2、种进行保藏，使微生物在保藏过程中生物代谢处于停止或者严重不活泼状态，抑制其生长和繁殖，使其处于休眠状态，阻止菌种产生繁殖变异。通常采用的方法有干燥、降低培养基的营养成分以及缺氧干燥等，使菌种在这些特殊环境中不发生变异，保持纯种，从而达到保藏的目的。 2、菌种保藏材料 （1）名胶片菌种保藏材料。胡必勇等利用名胶片保藏法对 1979 年到 1988 年分离的志贺菌和沙门菌的 118 株菌种的保藏效果。王红也采用了该保藏材料对金黄色葡萄球菌以及绿脓杆菌进行了保藏观察，通过五年的传代鉴定，发现菌种的各项生化特征都没有发生变异，也没有发生丢失，并且菌种的存活率高达百分之百。由此得到，这种保藏方法不但操作
3、简单，不需要使用贵重的设备，并且能够使菌种保存的时间长，这种保藏材料十分适合基层菌种保藏使用。 相关人员于 2007 年 6 月进行名胶片干燥保存菌种法试验研究，选用的标准菌种是 ATCC26003 金黄色葡萄球菌。通过连续五年的观察和鉴定，得到了以下试验结果，如图所示： 从表中可以得到，从 2007 年到 2012 年历年传代鉴定结果中可以得到菌种各项生化特征以及形态和原菌株没有区别，菌种存活率为 100%，这表明使用明胶片对菌种保存的效果比较好。 （2）牛乳菌种保藏材料。为了得到更多的实用、操作简便并且能够对菌种长期保存的方法，为科研和教学提供标准的菌株。徐雅娟等将二十九种复苏的细菌菌种接
4、种在无细菌、无污染的新鲜牛乳中，将该培养基放在冷冻室中，保持零下二十度对其进行保存，定期对菌种进行复苏鉴定。实验结果显示，在这种方式下，一次接种的这二十九种菌种能够保存三年。在对菌种的形态、生化特性、存活情况、染色以及血清学试验的分析结果中可以得到，这些检测项的结果和菌种的各项原始鉴定结果没有差别。由此可见，利用无菌鲜牛乳作为菌种保藏料具有良好的保藏效果。使用该保藏材料不用特殊的实验设备，也不需要反复传代。 （3）甘油菌种保藏材料。在菌种保藏中，最常用的保藏材料就是甘油。钟志宏等人为了寻找到一种适合保藏实验室使用菌种的简便方法，对甘油原液保存菌种的方法实施了改良措施。他们将普通菌种进行纯化，并
5、将纯化后的菌种接种在肉汤管中，增菌时间为 6 小时，然后向试管中加入定量的生理盐水-甘油保存液，将试管放置在零下二十度的冷藏室中进行保存；将奈瑟氏菌属和链球菌属进过纯化以后接种在加有血清的肉汤管，将试管置于含量为 5%-10%的二氧化碳环境中增菌 10 小时，然后向其中加入适量的保存液，放置在零下八十度的环境中保存；将真菌菌种进行纯化，然后直接取菌洗入肉汤，不做增菌培养，在试管中加入保存液，放置在零下二十度的环境中保存。对上诉三种保藏方法进行为期3 年的试验观察，结果表明，各个菌种均取得了良好的保存效果，菌种的染色特性、形态结构以及菌种的生化反应等和标准株的各项指标一致。该实验结果认为利用生理
6、盐水-甘油保存方法对菌种进行保存能够使其保存的时间较长，尤其是针对奈瑟氏菌属和链球菌属等这些需要特殊保存法进行保存的菌种，也能够用这种保存材料在普通的实验室进行保存。3、菌种保藏方法 （1）真空干燥冷冻保藏法。该保藏方法是将成熟阶段的微生物培养基以悬浮状态置于保护剂中，制成浓菌液，保护剂可以是卵白、无菌血清、海藻糖或者脱脂牛奶。将浓菌液分装在若干安瓿瓶中，将安瓿瓶放置在冰箱中开始冷冻，当菌液的温度达到了设定温度以后，再对其进行干燥处理，最后将安瓿瓶置于真空条件中将安瓿瓶熔封，并置于零下二十度的环境中保存。 这种方法对减少菌种死亡、基因突变以及泄露等有十分高效的作用，尤其是对一些有高致病性菌种的
7、保存，该方法的效果非常好，也是目前最有效的方法。但是该方法也具有一些缺点，使用该方法保藏菌种，操作复杂，需要抽真空、冷冻干燥等。 （2）加入保护剂的冷冻保藏法。最常见的是加入甘油保护剂，将菌种培养物制成悬浊液封存在试管中，将试管放置在干冰、液氮或者零下二十度的冷藏室中冷冻保藏。另外也可以用无菌鲜牛奶作为菌种保藏剂。将菌种进行纯化，使用接种环将纯化后的菌种接种在含有无菌鲜牛奶的试管中，将试管置于真空环境下熔封，并置于零下四度的冰箱中保藏。 （3）人工传代和超低温保藏技术。为了达到保藏菌种的目的，使菌种自分离时就保持不变的优良特性，为人类研究和生产提供优良的菌种。马洪波等人研究了菌种保藏的原理并探
8、讨了菌种的复苏技术。菌种保存的方法主要有液氮保存法、冷冻干燥保存法、传代培养保存法、超低温保存法等。在实验室中，经常用到的就是冷冻保存法，采用的保藏材料就是生理盐水-甘油液保存。通过对超低温保藏菌种和人工传代培养菌种的保藏效果进行对比和分析，研究人员得到：对于抵抗能力比较强的菌种，将它们保藏在超低温环境中可以存活十五年；抵抗能力弱的菌种可以存活五年。而使用人工传代法保藏时，菌种会出现不同个别基因突变，因此再次验证了低温保藏菌种的良好效果。另外保藏菌种的方法还有矿油封藏法和沙土管干燥保藏法等。 4、结语 利用菌种的生化特性，通过人工制造特定的环境能够达到菌种保藏的目的，确保菌种不发生变异，长时间
9、保存并具备生物活力。常用的保藏材料有：名胶片、牛乳、甘油等，最常用的保藏方法是加入保护剂低温冷冻保藏法。随着我国科研技术的不断发展，相信未来会出现更过的实用性强、易于操作的菌种保藏方法，提高菌种保藏的年限和保藏效果，为科研和生产提供更好的保障。 参考文献： 1梁宁利.微生物菌种保藏方法概述J.农产品加工?学刊，2012，7（4）：99-100. 2查杰.菌种保藏的原理和方法探讨J.时代报告：学术版，2012，16（8）：126. 3张介驰，戴肖东，张丕奇等黑木耳菌种保藏方法的比较研究J.中国食用菌，2007，16（4）：44-45. 4刘新锐，叶夏，王玉青等香菇菌种液氮保藏技术研究J.热带作物学报，2011，9（7）：36-37. 5常金梅，蔡芷荷，吴清平，张鲁斌.菌种冷冻干燥保藏的影响因素J.微生物学通报，2008，7（6）：59-60.
