1、第六章 胚胎移植,1,胚 胎 移 植,胚胎移植（embryo transfer,ET）也称受精卵移植，是指将一头良种母畜配种后的早期胚胎取出，或者由体外受精及其他方式获得的胚胎，移植到另一头同种的生理状态相同的母畜体内，继续发育成为新个体，所以又称之为人工授胎或借腹怀胎。,提供胚胎的个体称为-供体（donor）接受胚胎的个体称为-受体（recipient）,2,胚 胎 移 植 的 意 义,1.发挥优良母畜的繁殖潜力，提高繁殖效率。2.促进家畜改良的速度3.产生双胎和使不孕母畜获得生殖能力4.濒危动物的拯救和保护5.研究手段,3,胚 胎 移 植 的 原 则,1.受体与供体在分类学上的相同属性2.
2、动物生理上的一致性3.动物解剖部位的一致性4.胚胎发育的期限5.胚胎的质量6.供体、受体的状况,4,胚胎移植原则图解,5,胚 胎 移 植 的 程 序,优良种公畜,供体（优良母畜）,超 数 排 卵 处 理,发 情、配 种,胚 胎 回 收,超 数 排 卵 处 理,受体（优良母畜）,同 期 发 情 处 理,发 情,胚 胎 移 植,优 良 后 代,6,胚胎移植图解,7,雄性生殖内分泌调控,8,雌性生殖内分泌调控1,9,雌性生殖内分泌调控2,10,在生理或非妊娠条件下，雌性动物每间隔一定时期均会出现一次发情，通常将这次发情开始至下次发情开始、或这次发情结束至下次发情结束所间隔的时期，称为发情周期。,发
3、情 周 期,11,通常根据动物的精神状态、雌性动物对雄性动物产生的性欲表现、卵巢内卵泡的生长发育、排卵和黄体形成的情况及雌性生殖道（子宫、阴道等）的生理变化等几个主要方面，将发情周期划分为：发情前期（前情期） 发情期 发情后期（后情期） 间情期（休情期）,12,13,1.供体的超数排卵( Superovulation of Donor ),在母畜发情周期的适当时期，用促性腺激素进行处理，诱发其卵巢上有大量卵泡同时发育并排卵，称为超数排卵，简称超排。超排技术通常用于单胎家畜，如牛、绵羊和山羊等，其目的是让优良母畜排出大量卵子，充分发挥其繁殖潜力，因而是胚胎移植中的一个重要环节，也是首要环节。超排
4、方法：在发情周期的一定时期，用PMSG或FSH促进卵泡发育，于发情开始后12-16h和20-24h各配种（输精）一次，并于第一次配种后静脉注射hCG或LH，以便排出多数卵子。,14,15,羊供体超排处理方案,16,羊的阴道栓处理,17,羊的阴道栓处理,18,19,羊的阴道栓处理,20,影响超排效果的因素,家畜本身：母畜个体差异可导致超排反应不同，这与家畜的种类、品种、年龄、体重及营养情况都有关系。促性腺激素：所用激素的种类、用量和注射程序，尤其是制品中两种促性腺激素（FSH/LH )的比例差异，是影响胚胎数量及质量的重要因素；用量的大小则与超排的多少直接有关，如果用量过大，往往会使卵泡发育过多
5、，以致发生排卵延迟或不能排卵。,21,用药时间：发情周期阶段、产后阶段及季节不同，超排结果均有差别。 重复超排：一般而言，供体对前3次超排处理 的反应相似，但有些个体对重复超排的反应不佳，可能是由于促性腺激素产生了抗体。为了 提高重复超排的效果，一是延长激素处理的间 隔，二是尽量采用同种动物的促性腺激素，以减少抗体的产生。,22,超排效果好的卵巢黄体,23,超排效果不好的卵巢黄体,24,2.受体的同期发情( Synchroestrus of recipient ),无论在何种家畜或任何品种，为了使胚胎移植获得成功，必须使受体母畜与供体的发情同期化，使二者的生殖器官处于相同的生理阶段。受体与供体
6、发情开始的时间越接近，移植的受胎率越高。这是因为妊娠初期的子宫环境在不断发生变化，而特定时间的环境只适合于发育阶段相应的胚胎生存；也可能是因为非同期胚胎不能对受体产生促黄体作用。为了获得最佳受胎效果，应将受体与供体的发情时间之差控制在24h之内。,25,同期发情方法:诱发同期发情的理想药物有孕激素和前列腺素PGF2及其类似物。其剂量根据PG种类和用法不同而异。在国外，普遍采用氯前列烯醇(cloprostenol)和15甲基PGF2倘若在400头以上的大牛群中进行胚胎移植，因为每天都可能遇到发情母牛，就可以尽量选留自然发情的母牛作为受体，不需要进行同期发情处理。,26,羊受体的同期发情处理方案,
7、27,3.供体的配种（输精）,超排供体的配种次数，应比自然供体多一些，每次输入的精子数亦应增多。超排供体的受精率，通常比自然供体为低，这可能是由于排卵不集中、卵母细胞有缺陷或母畜生殖道的环境不太适宜于精子的运行。,28,4.收集胚胎（Collection of eggs）,收集胚胎就是在配种或输精后的适当时间，从超排供体回收其胚胎，以备给受体移植，亦称胚胎回收或胚胎采集，简称采卵。采卵的效果与采集时间、方法和检卵技术均有关系。,29,（1）.采卵时间,一般将配种当日定为0 天，由配种后第二天开始计算采卵天数。根据采集目的不同，决定在第几天采卵。就母牛而言，一般第1-4天可以由输卵管采到16细胞
8、以前的卵，58天可以由子宫采到桑植胚和囊胚。其依据是胚胎在生殖道内的发育情况及移行速度 .,30,31,32,33,（2）采卵方法,有手术法和非手术法两种。在大家畜基本上已将手术法淘汰，但在绵羊、山羊、猪和实验动物由于受解剖特点的限制，一直采用手术方法。不管用何种方法，一般收集卵子数只能相当于黄体数的4080。,34,第一种由宫管结合部冲向输卵管。本法冲卵率高，很少损害生殖道。除了猪因宫管结合部具有阀门样结构不能采用以外，各种中、小动物均可采用。第二种方法是由输卵管伞冲向宫管结合部。本法适用于猪，是由一个插入该处的钝注射针头或光滑的细玻管收集卵子；其缺点是术后常造成宫角尖端或输卵管粘连。,手术
9、法采卵,35,第三种方法是由子宫角尖端冲向子宫角基部。本法用于发情5天以后收集子宫内的卵，其收集数量比A, B法略少，易引起子宫粘连。 冲卵液为杜氏PBS,用量:第一、第二两种方法用5-l0ml，第三种方法用10-20ml。,36,37,羊的手术法采卵,38,羊的手术法采卵,39,手术操作现场,40,Sgie创造了一种带有气球的非手术采卵器，可由牛的子宫角采卵，显著提高了采卵率。Folley和Stewart又相继改进，设计出三通路（进气、进液、回液）导管采卵器（附图4），使用更加方便有效，能够从同一供体反复收集卵子。冲卵液的用量一般为500 ml，装入输液瓶内，每次放出30-60m1，反复冲洗
10、子宫角，并回收到集卵杯内。冲完一个子宫角后，再用同法冲洗另一子宫角。,非手术法采卵,41,42,43,5.检卵（Egg picking）,将冲卵液回收之后，尽快置于放大10-15倍的实体显微镜下，检查收集到的卵数，并用一细吸管将卵移至新鲜培养液内，在放大40-200倍的复式显微镜下，进行形态学观察，选出适合于移植的正常卵（附图5）。形态不正常者（附图6）及发育延迟2天以上的卵，都不可用于移植。,44,检胚,45,显微镜下的胚胎,46,47,48,6.移植胚胎（Egg transplantation）,移植胚胎就是将采取的可用卵移给受体母畜，亦称卵的移植，简称移卵。移卵方法：与采卵方法相似，也分
11、为手术法与非手术法两种，前者适用于不能进行直肠操作的中小动物，后者适用于大家畜。,49,手术法移卵,方法与采卵一样，先暴露输卵管及子宫角，再将卵注入输卵管或子宫角。当移入输卵管时，将毛细移卵管的尖端通过输卵管伞插到壶腹部，注入含有胚胎的培养液12滴；若移入子宫角，可先用钝针头刺破子宫角壁，然后将毛细管从针孔插入子宫腔，注入含胚胎的培养液,50,51,52,羊的手术法移卵,53,54,非手术法移卵,自从1982年以来，非手术法已被某些胚移中心用于商业性移植，但将胚胎送到子宫角内需要有一定经验。为了提高成功率，Elsden（1982）将其总结为四步。 将胚胎吸入0.25ml细管中，位于两个气泡之间。 将细管装入卡苏枪，枪外由一塑料套保护。 将受体保定好，进行硬膜外麻醉，由直肠触摸黄体位于何侧。 将胚胎送到黄体同侧的子宫角中部。,55,56,57,58,
