1、液相色谱质谱法测定塑料杯中双份 A 的不确定度1.分析方法和测量步骤 1.1 提取步骤 将食品罐头用低温液氮粉碎仪粉碎至颗粒 1mm 以下，称取约 0.5g 样品（精确至 0.1mg）于 100mL 锥形瓶中，加入 30mL 甲醇，超声提取60min，取上清液于 50mL 容量瓶中，用甲醇定容，取 1mL 进样分析。 1.2 仪器条件： 样品使用 Agilent 1200-6400 QQQ 液相色谱-质谱联用仪测量，色谱柱为 ZORBAX Eclipse XDB-C18 反向色谱柱，1003mm，粒径为 1.8m.流动相采用甲醇和纯水，梯度洗脱，梯度如下式（1）所示： 进样体积为 5L，流速为
2、 0.4mL/min，柱温为 35。 采用电喷雾（ESI）离子源，负离子模式检测，喷雾毛细管电压为4000V，去溶剂气压力为 50psi，温度为 350，流量为 10L/min，选择反应检测（SRM）模式扫描，定量离子强度定量。 1.2.1 定量方法 采用外标法定量，配制一系列浓度为5g/L、10g/L、20g/L、50g/L、100g/L 的 BPA 标准工作溶液，按分析方法测量定量离子的峰面积，绘制标准曲线，外标法定量。经过7 次平行测试，样品中 BPA 的含量分别为：g/kg。 2.计算公式和数学模型 样品中的 BPA 含量可采取下式计算： 其中， X样品中 BPA 的含量，g/kg；
3、C样品定容后溶液的浓度，g/L； V样品定容体积，mL； m称取的样品质量，g； d稀释因子（不稀释时可忽略） ； 3. 不确定度的分量来源分析和计算 根据数学模型，LC-MS/MS 测量 BPA 含量的不确定度来源于以下因素：（1）标准曲线产生的不确定度 u1； （2）标准溶液产生的不确定度 u2； （3）样品定容产生的不确定度 u3； （4）样品称量产生的不确定度 u4； （5）测量重复性产生的不确定度 u5； 现对以上因素计算如下： 3.1 标准曲线产生的不确定度 u1 标准曲线取 5 个浓度点，每个浓度点重复进样 3 次，结果如表 1 所示： 平均浓度 （g/L）：（m 为标准溶液浓度
4、水平的个数） 峰面积平均值：（n 为每个标准溶液浓度水平的个数） 由此，可得到 用最小二乘法拟合线性方程，得到： A=-1762.81+910.33C ，相关系数 r=0.9997 对 C20.0 进行 2 次重复测量，由标准曲线得到 2 个数据点为：19.11g/L 和 19.06g/L，求得 C20.0=19.09g/L。 根据标准不确定度的计算公式： 式中： p重复测量的次数（p=2） ； mn标准曲线溶液的测量次数（mn=15） ； 标准曲线中 BPA 浓度的平均值，g/L； SR标准曲线的标准差。 带入，可得到： g/L 因此，标准曲线产生的相对标准不确定度为： 3.2 标准溶液产生
5、的不确定度 u2 浓度为 200mg/L 的贮备溶液，用 200L 移液枪准确移取 100L 该溶液，定容至 10mL，得到的溶液浓度为2mg/L，再用 200L 移液枪分别移取 25、50、100、250、500L 定容至10mL，得到系列标准溶液，在这个过程中，影响不确定度的分量分别为：3.2.1 移取贮备溶液的不确定度 将浓度为 200mg/L 的贮备溶液稀释至 2mg/L，需用到一支量程为 20-200L 的移液枪，根据证书，其相对标准不确定度为 0.14%，因此移取100L 溶液产生的相对标准不确定度为 0.0007。定容至 10mL 需要用到10mL 的容量瓶，由校准证书知实验室用
6、容量瓶为 A 级，容量允差为0.02mL，此不确定度属于 B 类，取三角分布可得对应的相对标准不确定度： 定容过程中还应考虑稀释重复性带来的相对标准不确定度，稀释的重复性标准差约为 0.01mL，按照均匀分布，相对标准不确定度为。 因此由贮备溶液稀释带来的相对标准不确定度为 3.2.3 配制系列标准溶液的不确定度 配制系列标准溶液时，需要用量程为 20-200L 的移液枪移取上述溶液，根据证书，这支移液枪的相对标准不确定度为 0.14%，因此移取25、50、100、250、500L 溶液所产生的相对标准不确定度分别为：0.00018、0.00035、0.0007、0.00175、0.0035，
7、按照均方根计算标准溶液体积误差引起的溶液浓度的相对标准不确定度为： 同样，配制系列标准溶液也需定容至 10mL，其容量允差为0.02mL，因此由容量瓶引入的相对标准不确定度： 而稀释的重复性标准差为 0.01mL，按照均匀分布，相对标准不确定度为：。 因此配制系列标准溶液引入的相对标准不确定度为： 3.2.3 标准溶液产生的相对标准不确定度为： 3.3 样品定容产生的不确定度 u3 样品溶液体积的不确定度由体积误差和稀释重复性构成，定容需要用到 50mL 容量瓶，其允差为0.05mL，此不确定度属于 B 类，取三角分布可得其相对标准不确定度为： mL 稀释的重复性偏差约为 0.03mL，按照均
8、匀分布，相对标准不确定度为： 因此样品定容产生的相对标准不确定度为： 3.4 样品称量产生的不确定度 u4； 称取 0.5000g 样品，天平的最小刻度为 0.1mg，按照均匀分布，标准不确定度为 g，相对不确定度为： 3.5 测量重复性的不确定度 u5 称取 7 个平行样品，根据上述实验步骤和检测步骤，最终检出的 BPA浓度分别为：1898.1、1809.2、1810.0、1803.3、1753.3、1794.5、1810.7g/kg，平均值为： g/kg 其中，n 为重复测量次数（n=7） 。 因此计算可得标准偏差为： g/kg 因此，平均值的标准不确定度为： g/kg 3.6 相对标准不确定度分量汇总表 3.7 合成标准不确定度 以上分析中，各因素互不相关，因此按照方和根计算合成不确定度：因此，用液相色谱-质谱法测定水管中的 BPA 含量的标准不确定度为：g/kg 3.8 扩展不确定度的评定 取包含因子 k=2，得到扩展不确定度为： g/kg 4 分析报告 用液相色谱-质谱法测定食品罐头中的 BPA 含量，样品中 BPA 的含量为 g/kg
