1、烟草根茎提取物对辣椒茶黄螨的杀螨活性研究摘 要：以石油醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醇和水 5 种溶剂对烟草根茎的平行提取物及顺序提取物为材料，研究其对辣椒茶黄螨的触杀毒力。试验结果表明，在不同溶剂的平行提取物及顺序提取物中，分别以乙醇提取物对辣椒茶黄螨的致死率最高，48 h 校正死亡率分别为 89.56%和81.77%，分别显著高于其他溶剂处理；乙醇平行提取物及顺序提取物对辣椒茶黄螨的致死中浓度分别为 0.935 7 和 1.100 8 mg/mL，显著高于对照哒螨酮的 0.133 6 mg/mL，乙醇提取物对辣椒茶黄螨的毒杀效果较哒螨酮差。 关键词：烟草根茎；辣椒茶黄螨；杀螨活性 中图分类号：S4
2、35.418.2 文献标识码：A 文章编号：1001-3547（2014）06-0074-04 茶黄螨（Polyphago tarsonemus Latus）又名侧多食跗线螨，属蜱螨目跗线螨科，是辣椒上为害最为严重的一类害螨1。其以刺吸式口器吸取植物汁液，为害植物的叶、花、果实、球茎、块根等，其个体小，分布广，繁殖快，世代重叠，每年田间可发生 20 代以上，且适应性强，对植物特别是经济作物如辣椒、茄子、番茄、豇豆、菜豆、黄瓜等造成了不可估量的经济损失2。而化学农药的防治，将不可避免地产生3R（抗性 Resistance、残留 Residue 和再猖獗 Resurgence）等问题3。同时，辣椒
3、作为人们常备的食用原料，化学农药的大量使用将严重影响它的消费市场4。因此，生物防治与生物农药特别是天然产物农药的使用给辣椒茶黄螨的防治提供了广阔的发展空间5。早在 20 世纪初，除虫菊、烟草、鱼藤等植物已被作为天然产物农药进行研究开发，在 21 世纪已发展成为成熟的商品化制剂广泛使用，同时今天国内天然产物对螨类控制效果的研究也取得了很大进展，吴文君等6报道了杀虫植物苦皮藤的毒杀成分，丁伟等7、吴静等8、张永强等9报道了姜黄（Curcuma longa） 、丁香（Syringa vulgaris）和黄花蒿（Artemisia annua）对朱砂叶螨有明显的生物活性；曹挥等10报道了采用生化方法测
4、定地肤三氯甲烷提取物对山楂叶螨体内谷胱甘肽-S-转移酶、羧酸酯酶、单胺氧化酶、Ca2+-ATP 酶活性的影响，使螨体内神经胺积累，造成神经传递的阻断从而导致螨体的死亡等。此外国内外专家学者研究报道了印楝11，烟草12、瑞香狼毒13等植物源活性成分的杀螨活性，为开发天然产物杀螨剂奠定了研究基础。 烟草（Nicotiana tabacum）全株都含烟碱，以叶中含量最多，约占全株含量的 64%，其余，根占 13%、茎 18%、花 5%，烟叶用于烟丝生产，根与茎对于烟草行业生产几乎不再有经济价值。烟草产地丰富，全国均有种植，特别是云南、贵州、四川等地有大量基地进行栽培。烟草中有效成分烟碱的杀虫活性已有
5、许多研究报道，并且也有很多以烟碱化学结构为模板进行开发的杀虫剂产品，但有关烟草在杀螨活性或以烟碱为模板开发杀螨活性化合的研究还鲜有报道，尤其是针对辣椒茶黄螨的研究。为了明确该植物对辣椒茶黄螨的杀螨活性，本试验就烟草根茎提取物对辣椒茶黄螨的室内生物活性进行了测定。 1 材料与方法 1.1 试验材料 供试螨类 茶黄螨（Polyphago tarsonemus Latus） ，采自重庆市忠县田间的辣椒苗上，为在人工气候室内（251）、 RH（相对湿度）60%80%条件下，用盆栽辣椒苗上饲养了多年所获得的敏感品系。 供试烟草根茎提取物 烟草（Nicotiana tabacum）购于忠县农贸市场，取根、
6、茎，切片，阴干，粉碎机粉碎，备用。 供试烟草根茎平行提取物：称取 5 份上述粉末，每份 100 g，分别装入 5 个 10 L 的烧瓶，以 61 的比例依次分别向 5 个磨口瓶中加入 600 mL 的水、丙酮、无水乙醇、乙酸乙酯和石油醚，密闭，每日振摇 3 次，于 25浸渍 1 周。过滤，将水浸液加热浓缩为浸膏状，丙酮、无水乙醇、乙酸乙酯和石油醚浸提液旋转蒸发为浸膏状，获得 5 种溶剂的植物平行提取物浸膏，4存放于冰箱内备用。 供试烟草根茎顺序提取物：称取 100 g 烟草根茎粉末，先用 600 mL石油醚 3060冷浸 1 周，过滤，残渣备用，滤液浓缩挥发后获得石油醚提取物浸膏，4存放于冰箱
7、内备用；过滤后的残渣再以 600 mL 乙醇冷浸 1 周，过滤，将滤液浓缩定容获得乙醇顺序提取物浸膏；残渣再按序用丙酮、乙醇和水重复上述操作，分别获得丙酮、乙醇和水的顺序提取物浸膏。 称取上述平行提取物与顺序提取物浸膏少量，加入 3%的吐温-80，以蒸馏水稀释配制成 5 mg/mL 溶液，对供试对象进行生物测定。 1.2 试验方法 茶黄螨的生物测定 参照 FAO 推荐的测定螨类抗药性的标准方法玻片浸渍法14进行并改进。将载玻片一端贴上双面胶带，将供试螨背部粘于双面胶带上，每玻片 40 头，于温度（261）、RH 60%80%的环境下放置 4 h，用解剖镜检查，剔除死亡和不活泼的个体，记载活螨数
8、。而后，将带螨的玻片一端浸入相应浓度的药液中，浸渍 5 s 后取出，用滤纸吸除螨体及其周围多余药液，同饲养条件下放置 3 d，每 24 h 检查一次。用毛笔轻触螨体 5 次，以螨足均不动者为死亡，试验重复 3 次。以清水加相应量吐温-80 的溶液为对照。进行毒力测定时，每种药液按预试梯度配制 5 个浓度，每个浓度重复 3 次，计算致死中浓度。数据处理 采用校正死亡率来评判各提取物对茶黄螨的生物活性，计算方法如下：校正死亡率（%）=（处理组死亡率-对照组死亡率）/（1-对照组死亡率）100%。校正死亡率经反正弦转化后，进行方差分析，比较各处理结果间的差异。由 SPSS 14.0 软件完成 One
9、-Way ANOVA之 Duncans 检验和试验数据的方差分析15。 2 结果与分析 2.1 烟草根茎平行提取物对辣椒茶黄螨的室内触杀毒力 从表 1 看出，水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和石油醚粗提物对辣椒茶黄螨的 48 h 校正死亡率分别为 57.35%、89.56%、76.03%、58.38%和40.87%。其中，乙醇平行提取物对辣椒茶黄螨的杀螨活性最强。 2.2 烟草根茎顺序提取物对辣椒茶黄螨的室内触杀毒力 从表 1、2 看出，相同处理时间下，烟草根茎平行提取物对辣椒茶黄螨的致死活性高于顺序提取物。在烟草根茎不同溶剂平行提取物中，乙醇和丙酮提取物对茶黄螨的致死活性较好，处理 48 h 校正死
10、亡率分别为89.56%和 76.03%；顺序提取物中，乙醇和丙酮提取物对茶黄螨的致死活性较好，处理 48 h 校正死亡率分别为 81.77%和 73.27%，与同组其他溶剂的提取物间存在显著差异（P0.05） ，且乙醇顺序提取物对茶黄螨的致死活性显著高于丙酮顺序提取物。 2.3 烟草根茎乙醇平行、顺序提取物与哒螨酮对辣椒茶黄螨的毒力回归直线 处理 48 h 后的 5 mg/mL 乙醇平行提取物、顺序提取物对茶黄螨具有明显的致死作用。为了进一步明确平行提取物与顺序提取物间的毒力差异情况，需要做进一步的毒力测定，以致死中浓度（LC50）来比较 2 种溶剂提取物的毒力差异，并以 15%哒螨酮乳油 3
11、 000 倍液为对照，结果如表 3 所示。 从表 3 看出，2 种提取物中，对辣椒茶黄螨毒力较强的是乙醇平行提取物，其 LC50 为 0.935 7 mg/mL，其致死中浓度大于对照哒螨酮的0.133 6 mg/mL，故其对辣椒茶黄螨的毒杀效果低于哒螨酮。 3 讨论与结论 烟草根茎化学成分丰富，主要为烟碱、酚类、有机酸类、醛酮类、萜烯类及酯醇类等重要物质，其中，酚类物质具有 40 余种，占有较大比例，主要包括苯酚、间甲苯酚、对甲苯酚、邻甲苯酚、苯二酚、间苯二酚、儿茶酚等，而某些酚类物质特有的化学结构如消螨酚（Dinex）等多具有较强的杀螨活性。据相似相容原理，醇类对酚的溶解性相对较高，同时，乙
12、醇极性大，对生物碱类也有较好的溶解性，其提取物中含有大量生物碱及酚类物质，正好阐释了乙醇提取物杀螨活性较的原因。 烟草、除虫菊、毒鱼藤合称为“三大植物性农药” ，将烟草根茎作为植物源杀螨药物的开发，至今鲜有报导；而将烟草根茎作为植物源杀螨药物，除了具有原料易得、浸提工艺简单等优点外，还具有低毒、高效、无残留、不易产生抗性等优点，加之烟草种植广泛，将其根茎作为植物源农药进行开发具有很大的潜力市场和资源。 对烟草根茎不同溶剂提取物的生物活性测定结果表明，烟草根茎杀螨活性物质主要存在乙醇提取物中，以乙醇平行提取物的效果较为显著；另从表 1、2 还可以看出，在乙醇之外的溶剂提取物仍然具有一定的杀螨活性
13、，证实了烟草根茎中含对茶黄螨具有杀螨生物活性的物质不止一种，且极性大小不同。 烟草根茎中成分较为复杂，对辣椒茶黄螨具杀螨活性的物质含量相对过低，虽然乙醇平行提取物杀螨活性较好，但还是低于药物哒螨酮活性。只有更深层次地将活性成分结构化合物进行分离、鉴定，才能充分证实杀螨活性物质归属，更有利于在下一步对烟草根茎中有效成分作为植物源活性杀螨剂的开发中奠定基础理论。 参考文献 1 袁翼翔.辣椒茶黄螨的发生与防治J.现代农业科技，2011（14）：191-192. 2 韦文添.广西温室辣椒茶黄螨的发生与防治J.西南园艺，2006，34（4）：56. 3 刘保才，王俊琪，孙国语.蔬菜病虫害化学防治中的 3
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15、取物对两种病原真菌的生物活性J.农药，2007，46（10）：713-715，718. 9 张永强，丁伟，田丽，等.黄花蒿提取物对柑橘全爪螨的生物活性J.中国农业科学，2009，42（6）：44-47. 10 曹挥，王有年，刘素琪，等.地肤提取物对山楂叶螨体内几种酶活性的影响J.林业科学，2007，43（2）：68-72. 11 Williams L A D， Ajai M. The insecticidal and acaricidal actions of compounds from Azadirachta indica（A. Juss.） and their use in tropic
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