1、紫杉醇原料药含量测定不确定度评定摘要：通过建立 HPLC 法测定紫杉醇原料药含量的数学模型，找出影响不确定度的主要因素并对各不确定度分量进行评估。计算各变量不确定度及合成不确定度，本次紫杉醇原料药含量测定结果为 99.9%，其相对扩展不确定度为 2%（k=2） 。 关键词：紫杉醇 不确定度 HPLC 紫杉醇（Paclitaxe） ，是紫杉烷类化合物家族中的重要成员之一。它是从红豆杉属植物中提取出的一种具有抗肿瘤活性的天然药物，这种药物对卵巢癌、非小细胞肺癌、乳腺癌都有很好的疗效，是目前临床化疗药物的一线药物。不确定度是对测量结果可能误差的度量，其重要性已得到广泛认可。 本文以紫杉醇原料药为研究
2、对象，建立简便有效的 HPLC 方法测定紫杉醇原料药含量，并根据相关规范和表示指南1，2，分析含量测定不确定度大小及其主要影响因素。 1、试验方法 1.1 仪器与试药 Agilent 1200 高效液相色谱仪，UVW 检测器；紫杉醇标准品（含量 99.5%，批号：100382-201102） ，中国食品药品检定研究院；紫杉醇原料药 20 克。甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水。 1.2 色谱条件 Venusil （F5PH） （4.6250mm ） ，上海艾杰尔科技有限公司；柱温：25；流动相：乙腈-水（45：55） ；流速：1.5mL/min；进样量：5L；检测波长：227nm。 1.3 溶液配
3、制与分析 精密称取适量紫杉醇标准品（约 50mg） ，加甲醇溶解，定容至 50mL，得紫杉醇标准溶液。 精称供试品适量（约 50mg） ，用甲醇溶解并定容至 50mL，混匀，0.45 m 滤膜过滤，滤液作为供试品液。 上述两种溶液进样量均为 10L，单点外标法进行定量分析。 2、建立数学模型 C、CS-为供试品液、标准溶液中紫杉醇的浓度（mgmL-1） ； A、AS-为供试品液、标准溶液中紫杉醇色谱图的峰面积。 紫杉醇原料药含量测定的数学模型为： Asam（紫杉醇） ：样品中紫杉醇所产生的峰面积； Gstd（紫杉醇）：称取紫杉醇标准品的质量； Astd（紫杉醇） ：标准品中紫杉醇所产生的峰面积
4、； Gsam ：称取的试样质量； P：标准品中紫杉醇的含量。 3、构成不确定度来源的主要分量 基于分析方法、检测设备工作原理和以往大量分析工作中积累的经验，认为高效液相色谱仪检测紫杉醇原料药含量的不确定度的来源主要包括以下方面： （1）数学模型引入的测量不确定度； （2）高效液相色谱仪计量性能的局限性，如稳定性等； （3）分析方法：来自测试方法本身的不确定度； （4）标准样品：标样定值的不确定度； （5）环境：温、湿度等环境因素的变化带来标准曲线的轻微漂移。 4、不确定度分量的评定 4.1 数学模型引入的测量不确定度 4.1.1 Asam（紫杉醇） ：样品中紫杉醇的峰面积引入的不确定度来源 4
5、.1.1.1 样品在液相色谱仪中进针时引入的不确定度 我们采用同一个样品连进 10 针，经测试，10 针的紫杉醇面积的相对标准偏差为：0.5%，因此 u111=0.5%。 4.1.1.2 制备试液时定容引入的不确定度 试液制备时定容至 50ml，本实验室采用的均为 A 级玻璃器皿，根据JJG196-90 容量计量器具允许误差中有关规定，50 ml 的 A 级容量瓶允差为 0.05ml，按照均匀分布考虑，取 k= ，则由容量瓶引入的不确定度为 4.1.2 根据高效液相色谱的检测原理可知，Astd（紫杉醇） 标准品中紫杉醇所产生的峰面积的不确定度与 Asam（紫杉醇） 样品中紫杉醇所产生的峰面积的
6、不确定度一样，因此 u12=u11=0.5%。 4.1.3 Gstd（紫杉醇）和 Gsam：称取标准紫杉醇和试样的质量的不确定度 本实验室称取标准紫杉醇和试样的质量采用精密度为 0.01mg 的电子天平，根据以往的评定经验可知，使用此电子天平称量时引入的不确定度为感量的 2 倍，即 0.02mg，因为其远远小于称取标准品的质量，在此予以忽略。 4.1.4 P：紫杉醇标准品含量的不确定度 本实验室所购买的紫杉醇标准品未提供偏差和不确定度，在此当作常数，其不确定度予以忽略。 下面我们根据实测结果结合数学模型进行数学模型引入的不确定度的合成： Asam（紫杉醇）=13237.2，Astd（紫杉醇）=
7、11196.8，Gsam=58.9mg， Gstd（紫杉醇）=49.8mg，P=99.9% 4.2 分析方法的相对标准不确定度 根据中国药典 HPLC（高效液相色谱法）检测方法要求可知，要求检测的重复性不大于 2%，按照 JJF1059测量不确定度评定与表述指南的有关规定可知，方法引入的标准不确定度为 4.3 使用标准样品定值不准引入的标准不确定度 生产厂家未给出标准物浓度值的不确定度，在此认为是常数，认为不确定度 u4rel 为零。 4.4 样品一致性引入的不确定度 本实验室对一批产品独立取样 8 次，测量结果如下：99.8，99.6，99.1，100.5，99.4，100.7，99.0，9
8、9.7 根据这些数据可知其标准偏差为：RSD0.61% 在实际测量中是测一个样，因此：u4rel= RSD0.61%。 4.5 环境对测量不确定度的影响 本实验室环境可以满足检测方法的要求，因此本实验室的环境对测量不确定度的影响 u5rel 予以忽略。 4.6 合成标准不确定度 综上所述，对本实验室紫杉醇原料药含量的测量相对标准不确定度的评估如下： 4.7 扩展不确定度的评定 由于在实测中本实验室采用测量 2 次取平均值的方法，因此其测量不确定度为正态分布，包含因子 K=2，在工业技术领域，通常只取 95%的置信水准， 4.8 测量不确定度的报告 本实验室采用相对扩展不确定度进行测量不确定度的
9、报告，以紫杉醇原料药含量的测量结果为 99.9%为例，报告形式为： y=99.9%（12%） ，置信概率为 95%。 5、讨论 本次试验评估出的含量测定扩展不确定度为 2% ，k=2。影响测量不确定度结果的主要因素为分析方法和样品的一致性。 目前，不确定度测量的重要性已得到广泛认可，它可提供分析测定过程中误差来源的有关信息，为改善分析结果提供解决方案。 参考文献 1 State Bureau of Quality Technical Supervision Measurement Department（国家质量技术监督局计量司） ，Expression Guide to Uncertainty in Measurement （测量不确定度评定与表示指南）.Beijing （北京）：China Metroligy Press （中国计量出版社） ，2005.11 2 LI Shen-an （李慎安） ，SHI Chang-yan（施昌彦） ，LIU Feng（刘风）.JJF1059-1999 Evaluation and Expression of Uncertain in Measurement （JJF1059-1999 测量不确定度评定与表示） 。Beijing （北京）：China Metroligy Press （中国计量出版社） ，1999.1
