1、第二节 细胞化学染色检验,瑞氏染色的原理,瑞氏染料中含有碱性亚甲蓝和酸性伊红两种成分,它们与细胞内的各种物质具有不同的亲和力,使其显现出不同的色调,以利辨认.,1.细胞核是由核糖核酸与强碱性的组蛋白,精蛋白形成核蛋白,与酸性染料伊红有亲和力,染成红色.2.幼稚细胞的胞质和核仁含有酸性物质,与碱性染料亚甲蓝有亲和力,染成蓝色.主要的鉴别点:酸碱性,各种原始细胞的鉴别,定义：,细胞化学染色是细胞学和化学相结合的一门科学。它是以细胞形态学为基础，根据化学反应的原理、应用涂片染色的方法观察细胞的化学成分及其变化的重要方法。,各种类型血细胞的化学成分（酶，脂，糖，蛋白，核酸）,分布及其量不完全相同,在病
2、理情况下,血细胞的成分可发生改变.研究的对象：细胞和组织中的化学物质 研究的方法：根据细胞和组织中化学物质的有无以及强弱判断血细胞类型以及是否发生异常.,细胞化学染色的临床应用,1、 辅助诊断急性白血病的细胞类型（不同系别，不同阶段的细胞所含化学物质不同）； 2、 辅助血液系统疾病的诊断和鉴别诊断（IDA、 CML与类白）。,一、铁染色,原理： 正常人骨髓中的储存铁主要存在于骨髓小粒和幼红细胞中。骨髓小粒中的含铁血黄素称细胞外铁，其中的三价铁与分子中的蛋白质结合不牢，经稀盐酸处理后而游离，并能在酸性亚铁氰化钾溶液中产生普鲁士蓝反应。细胞内铁也可用此法显示。根据反应的强弱了解骨髓中铁的含量。,细
3、胞内铁：中、晚幼红细胞胞浆中有蓝绿色颗粒,为铁蛋白.铁粒幼细胞：胞质内有蓝绿色颗粒的幼红细胞.环铁粒幼红细胞：胞质内有蓝绿色颗粒在6个以上，并围绕于核周排列成环形者，超过1/2区域.细胞外铁：正常骨髓以含铁血黄素形式储存的铁，主要存在骨髓小粒的巨噬细胞的胞质内或外。正常情况下 +,细胞外铁反应强度的判断标准：,显微镜检查 肉眼观察 着色程度 形态大小 分布情况 阳性 显色不明显 淡染 小 稀疏（+） （绿蓝） （颗粒小珠）（星状排列） 强阳性 显色明显 深染 大 密集（+） （蓝黑） （大珠成堆） （片状分布） ,+,+,+,+,-,环形铁粒幼细胞,环形铁粒幼细胞,参考值 1、细胞外铁：（）（
4、） 2、细胞内铁：观察100个幼红细胞,计算出铁粒幼红细胞百分比,阳性率为1244,无环形铁粒幼红细胞和铁粒红细胞。,铁的生成和利用,食物中的铁经吸收后在单核吞噬系统内储存, 铁通过幼红细胞表面的铁受体,转至幼红细胞内,与原卟啉结合形成血红素.细胞外铁:单核吞噬系统内的铁,反映骨髓的储存铁 细胞内铁:幼红细胞和红细胞内的铁,骨髓可以利用的铁.,几种病理情况,1.体内铁摄入不足或消耗过多:骨髓细胞内外铁均减少或消失(IDA) 2.铁利用障碍:幼红细胞线粒体合成血红素功能障碍,为铁失利用,内外铁均增加(铁粒幼细胞性贫血) 3.铁储存于单核吞噬细胞内不能被释放入幼红细胞内,为铁失利用,外铁增加,内铁
5、减少(慢性炎症贫血),疾病鉴别意义：,缺铁贫：外铁明显下降，甚至消失；内铁下降,铁粒幼细胞减少。经铁剂治疗后，铁增加.铁粒幼细胞贫血：内、外铁增加，且出现环铁粒幼红细胞增多,有时可见铁粒红细胞.,感染、肝硬化、慢性肾炎、尿毒症、恶性肿瘤：外铁增加,内铁减少。骨髓增生异常综合症:环形铁粒幼细胞大于有核红细胞的15%,细胞外铁也常增加.,二、中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）,原理:成熟中性粒细胞内的AKP在PH 9.49.6缓冲液中能水解基质液中的-磷酸柰酚，产生-奈酚，其与重氮盐偶联，形成不溶性灰黑色偶氮染料沉淀，定位于酶活性处。AKP主要存在于中性成熟粒细胞内,其他细胞基本阴性.,阳性程度：
6、,- 胞浆中无紫黑色颗粒 + 胞浆中有一层棕黑色不透明或局限地方有紫黑色颗粒(约1/4) + 胞浆中颗粒占胞浆1/2或遍布整个胞浆，但较疏松 + 胞浆中颗粒占3/4，颗粒染色浓 +仅见核影，其余均是黑色,1.阳性率计算: 100个中性杆状,分叶核粒细胞中阳性细胞总数.,结果统计:,2.AKP积分的计算,积分：-0分 举例：细胞数 积分 +1分 5 5*00 +2分 5 5*15 +3分 10 10*220 +4分 20 20*360 60 60*4240 AKP积分总分为325 参考范围：30130分,参考值： 阳性率 40% 积分值 30130分,生理变化： AKP活性和年龄有关，新生儿、婴
7、幼儿高于成年人，老年人略低,应激状态下增加。病理变化： （1）增高 细菌感染、AA、类白血病、急淋、骨髓纤维化,真红,慢淋,血小板增多症,恶性肿瘤等 （2）减低 急慢粒、PNH、MDS、恶组,病毒感染等,临床意义:,1.慢粒(无继发感染时)积分明显下降 中性粒细胞类白血病积分可大于200 2.细菌感染NAP积分增加 病毒性感染无明显变化（感染症状相似）3.急性白血病类型的鉴别： 急粒 NAP明显减低 急淋 NAP增高 急单 NAP正常或减低,4.再障与PNH的鉴别 再障 NAP增高 PNH NAP减低,慢粒与中性粒细胞性类白血病反应的鉴别,三、过氧化物酶染色（POX）,原理： 细胞内的过氧化物
8、酶能将底物的过氧化氢分解，产生新生氧。后者将试剂中的联苯胺氧化为联苯胺蓝，再与亚硝基铁氰化钠结合，进而生成棕黑色化合物沉淀于酶的所在部位。,结果判断:,1.阴性：细胞胞浆中无蓝色颗粒2.阳性：细胞胞浆中出现蓝色颗粒者。,阳性程度参考标准:,-:无颗粒沉着+/-:颗粒细小,分布稀疏+:颗粒较粗,常呈局灶性分布+:颗粒粗大,分布较密,占胞浆1/2-2/3+:颗粒粗大,成团块状分布+:颗粒布满整个细胞,可覆盖胞核,正常情况下：,粒系：原粒早幼粒中幼粒成熟粒细胞 多数（-） （+） 阳性程度逐渐增强 嗜酸阳性最强；嗜碱（-）单核系：原单幼单成熟单核细胞 （-） （弱+） 阳性颗粒细少而分散其他细胞:淋
9、巴细胞,红细胞,巨核细胞（-）,有时吞噬细胞可呈阳性反应,疾病：,急粒（AGL）原粒阳性或阴性,常为阳性（颗粒较粗大，呈局灶分布）,为+急早幼粒（APL） 呈强阳性反应（+）急单（AML）原单,幼单多数阴性或弱阳性（颗粒细小、稀少、散在分布）,急淋（ALL）阴性。各阶段淋巴细胞POX均呈（-）反应，ALL骨髓中残留的原粒细胞POX可为（+），但比例小于3%。急性红白血病原始粒细胞阳性或阴性,原单阴性或弱阳性,有核红阴性,应用：,是急性白血病形态学分型中最重要,首选的常规化学染色.,对急淋和急非淋做出判断，阳性率大于5%诊断为髓系，小于3%不能排除淋巴系。区别小型原始粒细胞和原淋鉴别急性非淋巴细
10、胞性白血病的各亚型（M1与M5的鉴别）。鉴别急单（阳性弱阳性）和异常组织细胞（阴性）,四、过碘酸雪夫反应（糖原染色PAS）,原理： 多糖类物质中的1，2-乙二醇基经过碘酸氧化后产生醛基，此醛基进而与雪夫 (Schiff) 液作用，使无色品红变为红色的化合物，定位于胞浆中。,正常情况下:,1.粒系：原粒早幼粒成熟粒细胞 （-） （+） (+)随细胞成熟，阳性程度逐渐增强，阳性为弥散性，细颗粒状 嗜酸（-）；嗜碱（+）2.单核系：原单幼单成熟单核 （-） （+） （+） 阳性为细颗粒状，有时细胞边缘颗粒较粗大,3.红系： 幼红成熟红细胞 （-） （）4.淋巴系： 小部分（），多数呈（+），阳性率小
11、于20，阳性为粗大颗粒状或块状5.巨核细胞和血小板：（+）呈颗粒状或块状,疾病：,(一)白细胞系统 1.有助于急性白血病类型的鉴别 急淋原始淋巴阳性率升高，粗颗粒或块状 急粒部分原始粒阳性，细颗粒或弥散分布 急单原幼单可阳性，细颗粒 巨核细胞粗颗粒或块状强阳性，协助ANLL（M7）的诊断 2.慢淋阳性率增加，粗颗粒或块状,(二)红细胞系统,1.红白血病（M6），MDS有核红可阳性2.各类贫血的鉴别： 缺铁贫、地贫幼红可呈（+） AA、溶贫、巨幼贫（-）,(三)其他：,帮助确认一些特殊细胞 1.不典型巨核细胞强阳性 淋巴瘤RS细胞阴性 2.戈谢细胞强阳性 尼曼皮克细胞弱阳性阴性 3.白血病细胞
12、腺癌骨髓转移的癌细胞强阳性红 色细颗粒、粗颗粒或块状,五、-醋酸萘酚酯酶染色 （非特异性酯酶染色- NAE）,原理： 血细胞内的-醋酸萘酚酯酶将基质液中的-醋酸萘酚水解，产生-萘酚， 萘酚再与重氮盐偶联，形成不溶性有色沉淀，定位于胞质内酶所在的部位。 -醋酸萘酚酯酶存在于单核细胞、粒细胞及淋巴细胞中，单核细胞的阳性可被氟化钠抑制。,结果判断：,油镜计数100个细胞，分别计算出阳性率和阳性积分以及抑制率 抑制前阳性率-抑制后阳性率 或阳性积分 或阳性积分抑制率%= % 抑制前阳性率或阳性积分,正常情况下：,粒系各期粒细胞为阴性反应，少数可弱阳性，不被NaF抑制单核系原单（-）或（+），幼单单核阳
13、性，被NaF抑制淋巴系多数阴性，少数弱阳性，不被抑制红系少数幼红可阳性，不被抑制巨核、血小板阳性，不被抑制,疾病情况下:, 急粒 急早幼粒 急单 急淋ASDAE 原粒可呈 白血病早幼粒细胞 白血病细胞 原淋和幼淋 （+）反应 （+）强阳性 呈（+）较强 细胞呈阴性 或弱阳性NaF抑制 不被抑制 不被抑制 被抑制 不被抑制 ,细胞化学染色,急淋 急粒 急单 过氧化物酶 () 分化差的原始细胞(-)(+) ()(+) (POX) 分化好的原始细胞(+)(+) 糖原染色 (+) ()或(+) ()或(+) (PAS) 成块或颗粒状 弥漫性淡红色 弥漫性淡红色 非特异性脂酶 () ()或(+) (+) (NSE) NaF抑制不敏感 能被NaF抑制,
