1、液相色谱质谱法对猪肝中瘦肉精的检测摘 要：本文利用液相色谱-质谱法对市售猪肝中盐酸克伦特罗与莱克多巴胺残留量进行检测。采用高氯酸甲醇混合液酸解，在过滤和离心之后，乙酸乙酯异丙醇混合液萃取，旋蒸，加入甲酸溶解，使用固相萃取柱对溶解液净化，液相色谱/串联质谱仪测定，内标法定量。检测结果准确，能满足常规残留检测需要要求。 关键词：液相色谱-质谱法 盐酸克伦特罗 莱克多巴胺 内标法 自“瘦肉精”事件曝光后，引起了政府部门的高度重视，食品安全问题也成为人们的重要关注点。瘦肉精是专门用于动物的一类药物，任何一种可以增加动物瘦肉生长、抑制脂肪生长的物质都称为瘦肉精。目前，瘦肉精中使用最多、最主要的是盐酸克伦
2、特罗和莱克多巴胺，它们都是属于 -受体激动剂，可以更好地提高肌肉组织，减少脂肪组织，是动物营养重新分配剂。将瘦肉精添加于饲料中，可以加快动物生长速度、使猪的瘦肉率提高近 10%，提升养殖单位经济效益。如果用于饲料添加剂，它用量大、长时间使用、代谢慢，通常在屠宰上市时，在动物体内的残留量还是很大，一般残留在动物脏器中。当人体食用量达到一定值或食用了高残留的内脏组织，便会引起中毒现象。这些药口已被我国列入禁用药品目录。但还是有少数养殖场仍在非法使用，对消费者的健康构成严重的威胁。本文实验建立了液相色谱-串联质谱法，可同时检测猪肝中盐酸克伦特罗和莱克多巴胺残留的方法。 一、实验材料、方法 1.仪器与
3、材料 实验室常用玻璃器皿（移液管，容量瓶等） ；固相萃取柱装置；真空泵；超声波清洗气机；水浴恒温震荡器；台式微量高速离心机；氮吹仪（HGC-12A） ；超纯水机；电子分析天平；液相色谱-质谱联用仪（美国安捷伦 1200 Series/ 6410） 。 甲酸（色谱纯） 、乙酸铵（色谱纯） 、甲醇（色谱纯） ；高氯酸（色谱纯） 、乙酸乙酯（色谱纯） 、异丙醇（分析纯） 、MCX 固相萃取柱（Waters Oasis MCX Cartridges 6cc/150mg） ；分别称取适量克仑特罗-D9、莱克多巴胺-D6 用甲醇制成标准内标储备液（100g/ml） ；测试样品（猪肝，购买于商铺） ；去离子
4、水（由 6.2.8 超纯水机制成，电阻率 18.2Mcm） 。2.仪器工作条件 2.1 液相测定条件 色谱柱为安捷伦 ZORBAX Exlipse Plus C18（250mm4.6 mm，5m） ；进样量：2.5L；流速为 0.3mL/min；柱温为 40；流动相为 A-0.1%甲酸水+10mmol/L 乙酸胺，B-甲醇，梯度洗脱如表 1。 表 1 2.2 质谱测定条件 电离规定：电喷雾电离源（ESI） ，采用正离子方式扫描，多反应监测（MRM）方式检测；电离电压：4000V；干燥气温度：350；雾化器压力：40psi；干燥气流速：10L/min；鞘流气温度：400；鞘流气速：10L/min
5、；毛细管电压：4000V；喷嘴电压：1500V；驻留时间：40ms。 3.样品处理 提取：称取样品 5.00g（精确至 0.01g）放入 50mL 离心管中，加20ml 0.2mol/L 高氯酸甲醇混合液（9：1）涡旋 3min，置于 70水浴中酸解 1 小时，放进高速冷冻离心机中 6500r/min 离心 5min，转移上清液到 50mL 离心管用 NaOH 调 pH 为 9.50.2，6500r/min 离心 5min， 上清液转移到 50mL 离心管，加入 8gNaCl，加入 15mL 乙酸乙酯异丙醇混合液（7：3） ，震荡 3min，6500r/min 离心 3min，取上层液体到 1
6、00mL 鸡心瓶中，剩余液体再加入 15mL 乙酸乙酯异丙醇混合液提取，离心，提取合并上层液，50旋转蒸发至近干，加入 3mL2%甲酸待净化。 净化：Waters MCX 柱，使用前用 5ml 甲醇、5ml 水、5ml2%甲酸溶液活化。取全部提取液过柱，弃去滤液，依次用 5ml2%甲酸溶液，5ml 水，5ml 甲醇淋洗，最后用 5ml5%甲醇氨洗脱，整个过程流速控制不超过1ml/min，洗脱液 50下氮气吹干后，用初始流动相定容至 1ml，过 22nm滤膜，用于 LC/MS 测定。 二、实验结果与讨论 1.色谱条件的优化。为使组分获得好的分离效果，及在分析样品时减少杂质的干扰，本试验进行了梯度
7、优化选择。对比试验结果确定为流动相：A：乙腈、B：0.1%甲酸水。 表 1 试验选择的梯度 （min，%） 分离效果如图 1 2.质谱条件的优化。为得到响应高且稳定的信号，避免干扰和提高目标物的灵敏度，进行了质谱条优化。所选择的离子对与标准基本一致，发现莱克多巴胺定性离子对 302.2/284.3 样品基质干扰严重，试验对比定性离子对 302.2/107.1 效果较好。 表 2 对比定性离子对效果 3.线性范围与检测限。0.2、0.5、1、2、5、10ng/ml 的标准工作曲线线性关系良好，莱克多巴胺回归方程为 y=1.7063x-0.0526，相关指数 R2=0.9999；克仑特罗回归方程为
8、 y=1.8461x-0.0202，相关指数R2=0.9999；本试验的方法定量检出限均为：克伦特罗 0.05g/kg；莱克多巴胺 0.2g/kg。 4.准确度和精密度。以猪肝做添加回收试验，样品中添加浓度为0.2g/kg、0.5g/kg、1g/kg.每个浓度做了 6 次平行试验。 表 3 猪肝中不同残留物的回收率 三、 结论 本文通过液相色谱-质谱法对猪肝中的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺残留量进行了实验检测，并优化了色谱、质谱条件及前处理方法，同时，被测样品得到较好的分离，线性范围广，重现性好。由于此方法前处理简单易行、操作性能好、灵敏度高、回收率高，应在质量检测中广泛推广应用。 参考文献 1翟淑平，周德刚，孙志文等.液相色谱串联质谱法测定猪肉中莱克多巴胺残留J.中国兽药杂志， 2007， 41（12） 2冯冰，张佳宜，王英等.猪肝中莱克多巴胺残留的分析研究J.食品研究与开发，2007，128（4） 3沈建忠.动物性食品中莱克多巴胺残留检测J.酶联免疫吸附法S.农业部，2008-04-29.
