1、 1 含 油脂食品中邻苯二甲酸酯 类 测定的 方法研究 王亚琴 王吉祥 冯雷 牛之瑞 珠娜 张晓红 （云南省产品质量监督检验研究院 云南 昆明 650023） 摘要 ：建立了同时检测含油脂食品中 16种邻苯二甲酸酯类化合物的分散固相萃取 -气相色谱 -质谱（ GC- MS) 分析方法。样品经正己烷饱和的乙腈提取，提取液通过 PSA填料进行分散固相萃取净化， 定性和定量 选择离子监测模式 (SIM)测定。结果表明，含油脂食品中 16 种邻苯二甲酸酯的 在 50和 100 ug/kg添加水平下的加标回收率 为 66.81% 101.55%，相对标准 偏差 3.72 9.6%。方法灵敏度、精密度和检
2、出限都能满足日常检测分析的要求， 简便 、 快速 、准确 ， 避免了含油脂食品使用凝胶色谱仪这一传统方法大量使用有机溶剂的弊端，节约了检测成本，提高了工作效率。更重要的是，最大限度的减小前处理过程实验仪器、试剂带入的PAEs干扰，使检测结果更准确。 关键词 :气相色谱 -质谱 ; 邻苯二甲酸酯 ; 增塑剂 ; 含油脂 食品 Research on the sample pretreatment methods of Phthalic Acid Esters in Food Containing Fat WANG Yaqin, WANG Jixiang , FENG Lei, NIU Zhiri
3、u, ZHU Na,ZHANG Xiaohong （ Yunnan Institute of Product Quality Supervision and Inspection， Kunming 650023， Yunnan， China） Abstract: A method for the simultaneous determination of 16 phthalate esters in food Containing Fat by Dispersive Solid Phase Extraction- Gas Chromatography-Mass Spectrometry ( d
4、- SPE- GC- MS) was developed and evaluated The samples were extracted with acetonitrile(saturated with hexane), and the extract was cleaned up by PSA d- SPE. The qualitative and quantitative analysis were used with SIM mode The results showed that the average recoveries rate were in the range of 66.
5、81% 101.55% at the spiked levels of 50 and 100 ug /kg; and the RSDs of precision were 3.72 9.6% Precision,Sensitivity and Detection Limit meet the challenge of analysis. The method is simple,rapid,and accurate,which can improve work efficiency and reduce the cost.It can avoid the the large solvent c
6、onsumption in the Usage of gel permeation chromatography.More importantly, disturbance of Instrument and reagent in experiment were decreased to a minimum. Key: GC- MS; PAEs; Food Containing Fat 1引言 邻苯二甲酸酯 ( Phthalic Acid Esters, 简称 PAEs, 别名酞酸酯 ), 它可增加聚合物材料的延展性和柔软度 , 因而常作为聚氯乙烯 ( PVC)、纤维素树脂、天然橡胶和合成橡胶
7、的增塑剂 ， 并具有挥发性小 ， 耐热性、耐光性和耐寒性好等特点 ， 可改善 PVC 的加工性，所以被广泛地应用于塑料制品生产中。 但因其与塑料基质间没有形成化学共价键 , 呈游离态当塑料中的酞酸酯接触到所包装物质中水、油脂等时 , PAEs 类成分可从塑料中迁移至食品中。 极易溶出 , 因此随着时间的推移 , 可由塑料中迁移扩散到外环 境 1 3 。 2011 年台湾塑化剂事件爆发掀起了两岸食品安全风波 , 2012年国内白酒的塑化剂事件的发生，再次使邻苯二甲酸酯成为食品安全的焦点。 特别是含油制品，如果在加工、加热、包装等过程中， PAEs 类成分的溶出和迁移可能性更大 ，因此， 检测食品
8、中 PAEs 具有重要意义。 目前， PAEs 检测方法有 傅里叶变换红外光谱法 4、 气相色谱法 ( GC) 5， 6 、气相色谱 -质谱法 ( GC-MS) 7 9 、高效液相色谱法 ( HPLC)10 12、液相色谱 -质谱法（ LC-MS） 13、 14 。 其 中， GC-MS具有重复性好、定性准确的优点，是邻苯二甲酸酯最常用的 检测 方法之一。 由于邻苯二甲酸酯与油脂化学性质相似，含油脂食品的前处理比较困难，所以前处理方法的优化成为关键。 目前，国家标准 GB/T21911-2008食品中邻苯二甲酸酯的测定 对含油脂食品样品中 PAEs 的测定方法是采用凝胶渗透色谱分离系统，该方法
9、能较好的去除其中的脂肪、蛋白质、色素等干扰。但该分离系统购置价格相对较为昂贵，在大部分的检测实验室作者简介：王亚琴（ 1979 ），女（汉），工程师，硕士，研究方向：食品检测 2 中还不能普遍应用 。而且，在使用凝胶渗透色谱分离系统过程中，管路和试剂也会带入一些 PAEs，影响分析 结果的准确性 。因此，本文就含油脂食品试样中 16 种 PAEs 的前处理技术进行了探讨，研究了提取溶剂、分散固相萃取填料和用量的选择及操作中可能带入的干扰 等因素的影响，提出并建立了简便可行的前处理方法， 大大缩短了分析时间，减低了操作中可能带入的污染， 再利用 GC-MS 进行分离和检测，结果 更准确 。 2
10、实验部分 2.1 仪器与试剂 岛津 QP2010 Plus 气相色谱 /质谱联用仪 （日本岛津公司） ；离心机（ 上海安亭科学仪器厂 ）； 氮吹仪（ 北京康林科技有限责任公司 ） 。正己烷、乙腈、丙酮（ HPLC级 ， Fisher）； 乙二胺基 -N-丙基甲硅烷（ PSA，北京振翔公司） ； 16 种邻苯二甲酸酯标准品： 符合 GB/T 21911-2008所列 16种化合物， 1000 mg/L溶于正己烷中，购自美国 o2si smart solutions公司。 由于 PAEs 的广泛存在，检测过程中涉及使用到的玻璃器皿洗净后应至少用丙酮润洗 2次，晒干备用；所有试剂或溶液均 不得 接触
11、塑料或者其他含有 PAEs 的物品，必要时需进行重蒸。 2.2 实验方法 2.2.1标准溶液的配制 标准储备溶液：分别吸取适量 1000 mg/L标准品，加入正己烷溶解，逐级 稀释至所需浓度，备用。 2.2.2提取 称取 1.0 g 样品放入玻璃离心管中，加入 2mL乙腈 (正己烷饱和 )， 涡旋 2 min，以 4000 r /min离心 2 min，取乙腈层，重复提取一次，合并提取液， 用氮气吹至近干，再用乙腈定容至 2ml， 待净化。 将 该乙腈溶液离心取上清液 1ml加入 PSA填料 200mg， 振荡 3min后，以 4000 r/min离心 5min，取上清液，供 GC-MS 检测
12、。 2.2.3 色谱 -质谱条件 色谱条件 : Rtx-5ms 色谱柱 （ 30m0.25mm0.25m)；进样口： 250 ， 不分流进样；程序升温：初始温度 60 ( 保持 1 min)，以 20 /min升至 220 (保持 1min)，再以 5 /min升至 300 ( 保持 4min)； 进样量 :1L；流速： 1 mL /min；质谱条件 :接口温度 : 280 ，离子源温度 230 ；电离方式： EI；电离能量： 70 eV；溶剂延迟： 3.5min；监测方式： SIM 模式： 16 种邻苯二甲酸酯的特征离子与 GB/T 21911-2008食品中邻苯二甲酸酯的测定 中一致。 3
13、结果与讨论 3.1提取溶剂的选择 选择原则： PAEs提取效率高，含 油食品中的干扰成分如：脂肪、蛋白质、色素等尽量少，前处理过程尽量少引入 PAEs。 PAEs 易溶于正己烷、乙腈、氯仿、甲醇等有机溶剂。本实验结合含油食品特点，选用了正己烷、乙腈（正己烷饱和）和乙腈 三种应用范围广且提取效果较好的溶剂作 为提取剂，比较了不同 含油基质样品中 PAEs 的提取效果。结果表明，乙腈 （正己烷饱和） 对 16 种 PAEs提取 效率比乙腈高 ， 且 油脂 、色素带入较少 。 正己烷完全与油脂互溶，带入油脂较多， 易造成色谱柱和离子源的污染 。 所以，最终选取乙腈（正己烷饱和）作为提取溶剂。 3.2
14、分散固相萃取填料 和用量 的选择 含油脂食品经 有机溶剂 提取 后 ，提取液中还是含有一定量的脂肪及色素，若不进行进一步的净化处理，将会对质谱的定性产生巨大干扰，还会对离子源造成严重污染 ， 乙二胺 -N-丙基硅烷 ( PSA)固相材料同时含有伯胺和仲胺基团 ， 可通过弱阴离子交换或极性作用去除食品中的脂肪酸 、 其他有机酸 、 糖及色素 15 17 。本文分别将 PSA、 C18和石墨化碳填料按一定比例混合，然后作 PAEs的回收率， 实验表明石墨化碳对 PAEs具有较强吸收，不能用它来吸附色素；而 C18填料 对 DBP、 DNOP、 DPP和 DNP几种 被测物吸附较强 ， 加标回 收率
15、 只有 40%左右 ， 将 PSA与 C18按比例混合后的加标回收率也比单独使用 PSA的低， 因此 本文 选择仅使用 PSA填料 加少量 无水 Na2SO4作为 填料 。 PSA为主要成分，去除脂肪酸及部分油脂 ； 无水 Na2SO4可很好地3 去除基质中的水分，提高有机溶剂的提取效率 ; 为了确定 PSA填料的用量，我们选择加入 50mg， 100mg， 200mg， 300mg和 400mgPSA，结果显示 PSA 含量在 200mg时，各 PAEs色谱图的峰面积基本无变化，即采用 200mg PSA填料时，提取液中的杂质已经基本去除，考虑经济因素，我们采 用 200mg PSA 填料。
16、 3.3线性关系与检出限 将 2.2.1中 16 种邻苯二甲酸酯标准品 配制质量浓度为 0.05 10.0mg /L 的混合标准溶液，在优化的GC/MS 条件下进行检测，以目标物质峰面积 y对质量浓度 x(mg/L)做线性回归。以空白样品的 3倍信噪比（ S/N） 确定 16种 PAEs 的检出限 (LOD)。 线性回归方程、线性范围、检出限等结果见表 1。 表 1 16种 PAEs 的线性方程、相关系数、线性范围和检出限 Table 1 Linear equations， correlation coefficients， linear ranges and detection limits
17、 of the PAEs 化合物名称 * 线性方程 相关系数 线性范围 /(mg/L) 检出线 /g/L) DMP Y = 61793.83X + 256 R2 = 0.9971 0.05 10.0 1.5 DEP Y = 60023.46X + 125 R2 = 0.9981 0.05 10.0 0.7 DIBP Y = 81352.83X + 158 R2 = 0.9987 0.05 10.0 0.3 DBP Y = 95008.54X + 120 R2 = 0.9986 0.05 10.0 3.6 DMEP Y = 44909.29X + 423 R2 = 0.9970 0.05 10.
18、0 10.6 BMPP Y = 43785.07X + 103 R2 = 0.9987 0.05 10.0 15.2 DEEP Y = 24310.56X + 244 R2 = 0.9975 0.05 10.0 36.8 DPP Y = 97568.75X + 157 R2 = 0.9979 0.05 10.0 18.2 DHXP Y = 78583.58X + 111 R2 = 0.9980 0.05 10.0 1.3 BBP Y = 42596.08X + 162 R2 = 0.9977 0.05 10.0 3.5 DBEP Y = 13589.46X + 157 R2 = 0.9968
19、0.05 10.0 30.6 DCHP Y = 72250.19X + 128 R2 = 0.9990 0.05 10.0 3.4 DEHP Y = 58834.94X + 168 R2 = 0.9966 0.05 10.0 0.7 DNHP Y = 69600.19X + 157 R2 = 0.9986 0.05 10.0 1.1 DNOP Y = 82996.53X + 118 R2 = 0.9968 0.05 10.0 1.4 DNP Y = 4209.61X + 124 R2 = 0.9961 0.07 10.0 70.4 DMP: 邻苯二甲酸二甲酯； DEP: 邻苯二甲酸二乙酯； D
20、IBP: 邻苯二甲酸二异丁酯 ； DBP: 邻苯二甲酸二丁酯； DMEP: 邻苯二甲酸二（ 2-甲氧基）乙酯 ； BMPP: 邻苯二甲酸二（ 4-甲基 -2-戊基）酯； DEEP: 邻苯二甲酸二（ 2-乙氧基）乙酯； DPP: 邻苯二甲酸二戊酯； DHXP: 邻苯二甲酸二己酯； BBP: 邻苯二甲酸丁基苄基酯； DBEP: 邻苯二甲酸二（ 2-丁氧基）酯； DCHP: 邻苯二甲酸二环己酯； DEHP: 邻苯二甲酸二（ 2-乙基）己酯； DNHP: 邻苯二甲酸二苯酯； DNOP: 邻苯二甲酸二正辛酯； DNP: 邻苯二甲酸二壬酯 3.4加标回收率及其精密度 在油乳腐中分别添加 2个浓度水平的 1
21、6种 PAEs 混合标准工作液，每个添加浓度重复测定 6次，计算添加回收率和测定结果的相对标准偏差。 16种邻苯二甲酸酯的回收率为 66.81% 101.55%，相对标准偏差小于 9.6%。本方法能够满足高脂食品中邻苯二甲酸酯检测的要求。 表 2 样品中 16种 PAEs 的加标回收率及其精密度 (n=6) Table 2 Recoveries and their precisions ( RSDs) of PAEs spiked in in Fatty Food （ n=3） 化合物名称 加标浓度/(ug/L) 回收率/% 相对标准偏差 /% 化合物名称 加标浓度 /(ug/L) 回收率/%
22、 相对标准偏差 /% DMP 50 94.22 7.52 DHXP 50 78.13 7.83 100 96.84 4.57 100 79.58 5.79 DEP 50 90.21 6.86 BBP 50 85.49 6.97 4 100 93.82 5.49 100 87.96 5.73 DIBP 50 81.56 6.73 DBEP 50 72.59 7.42 100 85.27 4.13 100 76.55 6.15 DBP 50 85.54 6.05 DCHP 50 70.83 7.48 100 86.86 4.72 100 73.67 6.68 DMEP 50 101.55 4.73
23、 DEHP 50 76.49 6.49 100 100.62 7.58 100 78.94 5.42 BMPP 50 79.15 7.37 DNHP 50 76.83 6.73 100 80.24 5.84 100 78.16 5.17 DEEP 50 94.59 5.49 DNOP 50 67.52 8.75 100 95.36 3.72 100 71.98 6.37 DPP 50 84.69 6.85 DNP 100 66.81 9.80 100 87.73 7.81 200 69.46 7.41 3.5前处理中应注意的问题 含油脂食品中 PAEs的检测，如果前处理步骤过多、浓缩倍数过大或
24、溶剂空白的选择不当，都会对结果造成较大影响，为提高结果的准确性，必须注意一下问题： 1、整个实验过程尽可能使用玻璃器皿，禁用塑料制品，玻璃器皿使用前要用洗液浸泡后纯净水淋洗干净，晾干后使用。所有溶液和试剂均保存在玻璃试剂瓶中 ， 有机溶剂的量取或转移不得使用瓶口 分配器 ， 所有溶液的配制及稀释均用玻璃移液管和玻璃微量注射器 ； 为保证理想的实验结果 ， 每批样品都要做系统空白 ， 若空白值偏高 ， 应考虑更换实验中使用的有机溶剂。 3.6实际样品的分析 2011年 6月以来，本实验室采用该方法对云南产的 200多个油乳腐和食用油样进行了 PAEs 物质检测，根据 GB 9685-2008食品
25、容器 包装材料用添加剂使用卫生标准中规定的 DEHP、 DBP在食品中的特定迁移量限值分别是 1.5mg/kg、 0.3 mg/kg为判断依据， 结果表明 部分油乳腐中 DBP、 DIBP和 DEHP的 含量 较高 ,食用油 基本没有问题。通过分析和样本实验发现，油乳腐中的 PAEs是由玻璃瓶盖上的密封垫圈迁移出来的，通过更换合格的密封垫圈，样品中的 PAEs均在合格范围内。 4结论 本文建立的方法测定含油脂食品中 16种 PAEs化合物的 分析方法， 从实验数据可看出 ， 16 种邻苯二甲酸酯 在 50和 100 ug/kg添加水平下的加标回收率为 66.81% 101.55%，相对标准偏差
26、 3.72 9.6%。方法灵敏度、精密度和检出限都能满足日常检测分析的要求，简便、快速、准确，满足了普通无凝胶色谱仪实验室的检测要求，也大大减少了试剂的使用量，节 约了检测成本。同时，本方法还能最大限度的减小前处理过程实验仪器、试剂带入的 PAEs干扰，使检测结果更准确。 参考文献 1刘超 ,李来生 ,许丽丽 ,等 . HPLC测定一次性塑料用品中邻苯二甲酸酯类增塑剂 .化学研究与应用J,2007,19(7):834 837. 2徐颖 ,郭立新 ,蔡曹盛 .食用油中增塑剂溶出的原因分析及风险预测 .中国 油脂 J, 2012,37(5):48 50 SRIVAST AVA A, SH ARMA
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