1、1双黄连注射液质量标准草案双黄连注射液Shuanghuanglian Zhusheye【处方】 金银花 250g 黄芩 250g 连翘 500g 【制法】 以上三味，黄芩酌予碎断，加水煎煮二次，每次 1 小时，分次滤过，合并滤液，滤液用盐酸（2mol/L）调节 pH 值至 1.02.0，在 80保温 30分钟，静置 24 小时，滤过，沉淀加 8 倍量水，搅拌，用 40%氢氧化钠溶液调 pH值至 7.0，并加等量乙醇，搅拌使溶，滤过，滤液用盐酸（2mol/L）调节 pH 值至 2.0，60保温 30 分钟，静置 12 小时，滤过，沉淀用乙醇洗涤至 pH 值至4.0，加 10 倍量水，搅拌，用 4
2、0%氢氧化钠溶液调节 pH 值至 6.0，加入 0.5%活性炭，充分搅拌，50保温 30 分钟，加入 1 倍量乙醇搅拌均匀，立即滤过，滤液用盐酸（2mol/L）调 pH 值至 2.0，60保温 30 分钟，静置 12 小时，滤过，沉淀用少量乙醇洗涤后，于 60以下干燥。金银花、连翘分别加水浸渍 30 分钟后，煎煮二次，每次 1 小时，分次滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为 1.201.25（70-80测），放冷至 40，缓缓加入乙醇使含醇量达 75%，充分搅拌，静置 12 小时，滤取上清液，回收乙醇至无醇味，加入 34 倍量水，调节 pH 值至 7.0，充分搅拌并加热至沸，静置 48小时，滤取上
3、清液，浓缩至相对密度为 1.10-1.15（70-80测），放冷至 40，加入乙醇使含醇量达 85%，静置 12 小时，滤取上清液，回收乙醇至无醇味，分别制成金银花、连翘提取液，备用。取黄芩提取物，加水适量，加热并用40%氢氧化钠溶液调节pH值至7.0使溶解，加入金银花、连翘提取液，加水至1000ml，加入0.5%活性炭，保持pH值7.0，加热微沸15分钟，冷却，滤过，加注射用水至1000ml，灌封，灭菌，即得。【性状】 本品为棕红色的澄明液体。【鉴别】（1）取本品10ml，置水浴上蒸干，残渣加85%乙醇5m1使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩苷、绿原酸对照品，分别加85%乙醇制成每1ml含0.
4、1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录 B）试验，吸取上述三种溶液各1l，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，2置紫外光灯（365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。（2）取本品4ml，置水浴上蒸干，残渣加甲醇5m1使溶解，作为供试品溶液。另取连翘对照药材0.5g，加甲醇10ml，热浸1小时，滤过，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法（附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各25l,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（8：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105加
5、热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。【检查】 溶液的颜色 精密量取本品 0.5ml，置 25ml 纳氏比色管中，加水稀释至刻度，摇匀，与黄色 7 号标准比色液（附录 A 第一法）比较，不得更深。pH 值 应为 5.56.5（附录G）。蛋白质 取本品2ml，置试管中，滴加鞣酸试液13滴，不得产生混浊。鞣质 取本品1ml，依法检查（附录 S），应符合规定。树脂 取本品5m1，置分液漏斗中，加三氯甲烷10ml振摇提取，依法测定（附录 S），应符合规定。草酸盐 取本品10ml，用稀盐酸调节pH值至12，保温滤过，滤液调节pH值至56，取2ml，加3%氯化钙溶
6、液23滴，放置10分钟，不得出现混浊或沉淀。炽灼残渣 取本品10ml，置已恒重的坩埚中，依法测定（附录IX J），不得过1.5%（g/ml）。钾离子 取本品2ml，依法测定（附录 S），应符合规定。总固体 精密量取本品25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，置水浴上蒸干后在105干燥3小时，置干燥器内冷却30分钟，称定重量。 遗留残渣应为2.22.8%（g/ml） 。重金属 取本品 2ml，依法检查(附录 E 第二法 )。含重金属不得过百万分之十。砷盐 取本品 1ml，加 2硝酸镁乙醇溶液 3ml，点燃，燃尽后，先用小火3炽灼使炭化，再在 500600炽灼至完全灰化，放冷，残渣加盐酸 5ml 与水
7、21ml 使溶解，依法检查(附录 F 第一法)。含砷量不得过百万分之二。溶血与凝聚 2%红细胞混悬液的制备 取兔血或羊血数毫升，置盛有玻璃珠的容器内，振摇10分钟，或用玻璃棒搅动10分钟，除去纤维蛋白原使成脱纤血液，加约10倍量的生理氯化钠溶液，摇匀，离心，倾去上清液，沉淀的红细胞再用生理氯化钠溶液洗涤23次，至离心后上清液不显红色为止，将所得红细胞按体积用生理氯化钠溶液配成2%的混悬液（当日使用，用时摇匀）。试验方法 取试管3支，分别加入供试品溶液0.0、0.3、0.3ml，然后分别生理盐水2.5、2.2、2.2ml和上述红细胞混悬液2.5ml，迅速置36.50.5恒温箱中，开始每隔15分钟
8、观察1次，1小时后，每隔1小时观察1次，一般观察4小时，不得有溶血和凝血现象。若有凝聚，可取其中加有供试液的一支试管振摇，凝聚物应能均匀分散。热原 按热原检查法（附录 A），剂量按家兔体重1m1/kg缓缓注射，应符合规定。异常毒性 取本品，加氯化钠注射液稀释 3.5 倍，依法检查（中国药典2005 年版二部附录 XI C） ，静脉注射，应符合规定。过敏试验 取本品，依法检查（中国药典 2005 年版二部附录 XI K） ，应符合规定。山银花 取本品 20ml，加盐酸 3 滴，边加边搅拌，滤过，滤液加氢氧化钠试液调节 pH 值至 7，用水饱和的正丁醇振摇提取 2 次，每次 30ml，合并正丁醇液
9、，加氨试液 30ml 洗涤，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇 2ml 使溶解，作为供试品溶液。另取灰毡毛忍冬皂苷乙对照品适量，加 50甲醇制成每 1ml 含0.6mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录 B）试验，吸取上述两种溶液各 2l，分别点于同一高效硅胶 G 薄层板上，以三氯甲烷 -甲醇-水（6：4：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液，在 105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，不得显与对照品完全一致的紫红色斑点。其他 应符合注射剂项下有关的各项规定（附录 IU）。【指纹图谱】精密吸取本品2ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，4摇匀，作为供试品溶液
10、。另取绿原酸对照品适量，精密称定，加50甲醇制成每1ml含40g的溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法（附录D）测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；YMC-Pack ODS-A 色谱柱(柱长为150mm，柱内径为4.6mm)；梯度洗脱，以甲醇为流动相A，以0.25%冰醋酸（V/V）为流动相B；检测波长为350nm；柱温为30C；流速为每分钟1ml。理论板数按绿原酸峰计算应不低于6000。时间 (分钟) 流动相 A (%) 流动相 B (%)015 1535 85651520 35 652050 35100 650分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10l，注入液相色谱仪，记录60 分钟内
11、色谱图。供试品色谱图应与标准指纹图谱基本一致，有相对应的 12个特征峰，特征峰出峰时间应在 40 分钟之内。将供试品色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004，1.0B 版） ，与标准指纹图谱相比较，剪切 5 分钟之前和 50 分钟之后的溶剂峰，计算相似度，相似度应不低于 0.80。双黄连注射液对照指纹图谱附：（1）岛津 2010 CHT 液相色谱仪数据处理积分参数Width：5；Slope：1000；Drift：0；TDBL：1000；Min Area：1000；10号色谱峰（黄芩苷）不积分。（2）安捷伦 HP1100 液相色谱仪数据处理积分参数斜率灵敏度：1；峰宽：0.1；最小峰面
12、积：1；最小峰高：0.01；谷底积分：开；10 号色谱峰（黄芩苷）不积分。【含量测定】 金银花 照高效液相色谱法（附录 D）测定。5色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相 A，以 1%冰醋酸为流动相 B，按下表进行梯度洗脱；检测波长为324nm。理论板数按绿原酸峰计算应不低于 6000。时间（分钟） 流动相 A（%） 流动相 B（%）025 1626 84742527 26100 7402735 100 03537 16 84对照品溶液的制备 取绿原酸对照品和咖啡酸对照品适量，精密称定，加水制成每 1ml 各含 40g、30g 的混合溶液，即得。供试品溶液的制
13、备 精密量取本品 2ml，置 10ml 棕色量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10l，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每 1ml 含金银花以绿原酸（C 16H18O9）和咖啡酸（C 9H8O4）的总量计，应为 0.200.27mg。黄芩 照高效液相色谱法（附录 D）测定。色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸（ 48：52：1）为流动相；检测波长为 276nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于 1000。对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加 50%甲醇制成每1ml 含 0.2mg 的溶液，即得。供
14、试品溶液的制备 精密量取本品 1ml，置 50ml 量瓶中，加 50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。测定法 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10l，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每 1ml 含黄芩以黄芩苷（C 21H18O11）计，应为 7.09.4mg。连翘 照高效液相色谱法（附录D）测定。色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈水（25：75）为流动相；检测波长为 277nm。理论板数按连翘苷峰计算应不低于 3000。6对照品溶液的制备 取连翘苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 1ml含 30g 的溶液，即得。供试品溶液的制备 精密量取本品 5ml，置 25ml 量瓶中，加 65%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10l，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每 1ml 含连翘以连翘苷（C 29H36O15）计，应为 0.140.20mg。【功能与主治】 清热解毒，清宣风热。用于外感风热引起的发热、咳嗽、咽痛。适用于病毒及细菌感染的上呼吸道感染、肺炎、扁桃体炎、咽炎等。【用法与用量】 静脉滴注，每次每公斤体重 1ml，加入氯化钠注射液中（250500ml） 。肌注一次 24ml，一日 2 次。【规格】 每支装 20ml【贮藏】 密封，遮光，置凉暗处。
