1、实验一：二乙酰一肟法测定血清尿素,一、实验目的1.掌握血清尿素的测定原理和方法。2. 了解尿素测定的参考范围及临床意义。,二、实验原理 尿素（urea）在强酸、加热的条件下，与二乙酰缩合生成红色的二嗪化合物（Fearon反应），其颜色深浅与尿素含量成正比。与同样处理的标准液在540nm处比色，求得尿素含量。由于二乙酰不稳定，一般由二乙酰一肟与强酸作用产生。其反应式如下：,(无色),(粉红色),1、主要器具,微量移液器,三、器材,试管与试管架,三用水浴箱,紫外可见分光光度计,四、试剂,1.酸性试剂离子水约100ml、浓硫酸44ml、85%磷酸66ml、氨基硫脲50mg及硫酸镉(CdSO48H2O
2、) 2g。2.二乙酰一肟溶液3.尿素标准贮存液(100mmol/L)4.尿素标准应用液(5mmol/L),五、操作步骤,取试管7支，按下表操作,混匀后，置沸水浴中加热12min，取出置冷水中冷却5min，波长540nm，空白管调零，分别读取各管吸光度 。,标准管,测定管,沸水浴中加热12min,冷水浴中冷却5min,标准管,测定管,六、计算,（A为吸光度值，取平均值）,参考范围：1.787.14mmol/L,mmol/L,七、注意事项,1.血标本应及时处理，以防尿素酶水解尿素。最好血标 本加草酸钾或氟化钠抗凝以抑制尿素酶。2.本法试剂单一，方法简便，但试剂具毒性和腐蚀性。 3.煮沸时间和煮沸时
3、液体蒸发量影响结果。因此测定和 标准管的试管口径和煮沸时间应尽量一致。煮沸时间 延长吸光度反而降低。,4.显色反应产物对光不稳定，加入氨基硫脲和Cd2+能增加显色稳定性和显色强度，但仍有轻度褪色现象(5%/h)，故显色冷却后宜在2030min比色完毕。5.尿液中尿素也可用此法测定，但因浓度高，需先用去离子水作50倍以上稀释。,八、临床意义,1血液尿素浓度增高 分生理性和病理性因素两方面。生理因素： 高蛋白饮食引起血清尿素浓度和尿液排出量显著增高。血清尿素浓度男性比女性平均高0.30.5mmol/L，随年龄增加有增高倾向。成人日间生理变异平均为0.63mmol/L。,(2) 病理因素1) 肾前性
4、疾病：最重要的原因是失水，因血液浓缩使肾血流量减少，肾小球滤过率减低而致血液尿素浓度增加。2) 肾性疾病：肾小球肾炎、肾病晚期、肾功能衰竭、慢性肾盂肾炎及中毒性肾炎等影响肾小球滤过的疾病，都可使血液尿素含量增高。,3) 肾后性疾病：所有使尿路阻塞的因素都可引起血液中尿素含量增高,如前列腺肿大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱肿瘤致使尿道受压等。2.血清尿素浓度降低 除婴儿、孕妇以及低蛋白高糖饮食者外,常见于肝功能衰竭患者。,九、方法学评价,1本法试剂单一，方法简便，但试剂具毒性和腐蚀性。在标本数量多时加热开始难以达到100,各管间受热温度也可能不一致,因而本法重复性不佳.若改善加热条件,如采用在水浴锅底部加置高约5mm的网垫,在网垫上加热显色,可使CV由不加网垫时的6.46%降至2.99%。2线性上限仅达7.14mmol/L；回收率为96%102.1%。,3二乙酰一肟法的主要干扰来自血清中存在的含氮化合物。很多其它化合物在结构中会有尿素的残基，如瓜氨酸、四氧嘧啶和尿囊素，虽然也会产生一种带颜色的产物，但这些化合物在血清中浓度很低，故很少引起明显的干扰。另一些其它的化合物在血清中浓度高，但这些色素的最大吸收峰不同，因此不产生明显干扰。胆红素达171mol/L、血红蛋白达10g/L均无影响。,
