1、酵母表达的 PCV2 Cap 蛋白在猪体的免疫特性分析摘要：PCV2 也称之为猪圆环病毒型，它是显示出综合症状的一种疾病，只能适用于猪体，这种疾病的传播率高、传播范围广、死亡率高，能带来非常严重的经济损失，而 PCV2 Cap 蛋白是根据 PCV2 研制而成的，它具有增长猪群生长指数以及降低猪群死亡系数的优点，能缓解 PCV2 所带来的后果。 关键词：猪圆环病毒型；猪 干扰素；PCV2 Cap 蛋白；免疫特性 中图分类号：S858.28 文献标识码：A 文章编号：1674-0432（2012）-12-0194-1 猪圆环（PCV）是一种隶属于圆环病毒范围的病毒，表现为无囊膜、二十面体，其具有自
2、主复制的特性，它主要有两种形式，分别是 PCV1 以及 PCV2，其中 PCV1 没有临床疾病，不会造成猪的致病性，而 PCV2 则显示出存在临床疾病，会造成猪的致病性，尤其是对正在成长型的猪仔能形成不可避免的危害。PCV 基因中包含两个最为重要的阅读框，分别是ORF1 以及 ORF2，其中 ORF1 也称之为 Rep，它是由 PCV1 氨基酸与 PCV2 氨基酸组成的，主要显示出病毒的自主复制；ORF2 也称之为 cap，它是由233 氨基酸的编码组成，主要显示出病毒的免疫性原蛋白。目前我国主要研究的是 PCV2 病毒的疫苗，因为它是造成猪群死亡率最高的病毒。 1 实验材料以及实验方法 1.
3、1 实验材料 实验需要准备病毒、细胞、菌种、动物、重组 Cap 以及试剂，其中病毒、细胞以及菌种为 PCV2 JS 分离株、没有被 PCV1 所污染的细胞PK15、酵母菌株 X-33 所代表的 PCV2 Cap 蛋白分泌表达以及酵母菌株pPICZA-ORF2 所代表的 PCV2 Cap 蛋白分泌表达；动物是选用刚刚断奶28 天的猪仔，数量为 20 头 PCV2 呈现阴性的猪仔以及数量为 20 头 PCV2母源抗体呈现阴性的猪仔；重组 Cap 是采用酵母菌株 X-33 以及酵母菌株pPICZA-ORF2 的发酵法培养出来的，具体做法为把 8000g 的发酵液进行离心 15min，之后把上清液取走
4、进行电泳鉴定，鉴定方法为 SDS-PAGE；试剂选用铝胶佐剂，而铝胶佐剂必须达到 10U.mL-1 的抗病毒活性，且必须按照猪 干扰素的酵母表达。 1.2 实验方法 为了实现酵母表达的 PCV2 Cap 蛋白在猪体的免疫特性，需要猪 干扰素与酵母表达的 PCV2 Cap 蛋白组成疫苗，单位是亚，或者把一定数量的铝胶与酵母表达的 PCV2 Cap 蛋白组成疫苗，单位是亚；把刚刚断奶28 天猪仔中一组接种亚单位的猪 干扰素重组，把另一组接种亚单位的铝胶佐剂，建立对照表格，分别显示空白对照的数据以及功毒对照的数据，并在 21 天以后进行免疫的加强，14 天以后进行功毒，功毒材料选用PCV2 JS。在
5、接种了亚单位的猪 干扰素重组的猪仔体内发现了中和抗体以及 ELISA 抗体的数值都异常高，而接种亚单位的铝胶佐剂的猪仔体内发现了中和抗体以及 PCV2，两者相比较发现猪 干扰素重组猪仔体内的抗体比铝胶佐剂猪仔体内的抗体要多出许多；通过功毒对照表发现，只接受了功毒的猪仔出现发热现象，并伴随着病毒血症的出现，在功毒后接种了猪 干扰素重组的猪仔完全没有病毒血症的出现，而在功毒后接种了铝胶佐剂的猪仔有 2 头出现发热并伴随着病毒血症，剩下的均没有病毒血症的出现。 2 实验结果 通过上述实验可以知道 PCV2 Cap 蛋白分泌表达的酵母能成功诱导猪仔的中和抗体，并使它快速、有效的产生，而 PMWS 与抗
6、病毒的染体产生结果和 PCV2 Cap 蛋白分泌表达的 Fenaux 结果是一样的，都呈现出病毒的颗粒状。铝胶佐剂的特点是具有缓释抗原的功能，而 Cap 蛋白重组却呈现出分子的相对质量小、蛋白成分过于简单、产生的抗体停留时间短以及产生的抗原体弱，铝胶佐剂可以中和 Cap 蛋白重组的缺点，所以在实际操作时可以把 Cap 蛋白重组以铝胶佐剂的形式制作出来，这样既中和了病毒，又刺激了淋巴细胞。 在 Cap 蛋白重与猪 干扰素的结果表明，PCV2 Cap 蛋白分泌表达的酵母具有非常出色的免疫原性，并在空白对照以及功毒对照中显示出，没有进行任何措施的猪仔全部呈现出退毛、毛发粗乱、发热以及食欲对退的血症现
7、象，而接种亚单位的铝胶佐剂后，绝大部分的猪仔能在短时间内发热减退、血症减轻，一小部分猪仔还是出现了持续发热的血症现象；所以 PCV2 病毒的最好防治措施是亚单位的 Cap 蛋白重组。猪 干扰素与 Cap 蛋白重组的相结合，具有更加出色的保护效果，这是因为猪 干扰素既能调节蛋白抗原的免疫力，还能使 Cap 蛋白重组的广谱抗病毒性得到充分的发挥。 参考文献 1 曹瑞兵，周国栋，陈溥言.猪干扰素对猪圆环病毒 2 型亚单位疫苗免疫效果的影响J.畜牧兽医学报，2009， （40）：867-872. 2 欧阳素贞，张福良，王双山，王国栋，刘书梅.猪圆环病毒 2 型Cap 蛋白重组腺病毒的构建及表达J.中国预防兽医学报，2008， （14）：165-168. 3 徐磊，宁蓬勃，郭抗抗，董平，董福军，张彦明.猪圆环病毒 2型疫苗研究进展，2012， （10）：64-70. 作者简介：刘宝艳（1969-） ，女，就职于榆树市畜牧总站，研究方向：畜牧兽医。
