1、1高效液相色谱法测定高三尖杉酯碱含量摘要：目的：建立高效液相色谱方法测定高三尖杉酯碱（homoharringtonine，HHT）含量。方法：采用 Thermo C18（4.6150mm 5m）色谱柱。以乙腈0.2%醋酸溶液（用 0.5%三乙胺溶液调节 pH至 6.50.2） （24：76）为流动相，流速 1.0 ml/min，柱温25，检测波长 288 nm。结果：当高三尖杉酯碱的浓度在 80.84 g/ml至 120.48g /ml即为常规检测量的 80%至 120%内时，其峰面积与浓度的线性关系良好，r2=0.9998。平均回收率为 100.46%，RSD=0.18%。结论：本方法测定结
2、果准确，操作简便，分析快速。适用于 HHT原料药的含量测定。 关键词：高三尖杉酯碱 高效液相色谱法 含量 高三尖杉酯碱（Homoharringtonine，HHT）是我国特有的三尖杉属植物中分离出的抗肿瘤生物碱之一，用药剂量少，其作用原理比较独特，与常用的抗白血病药物无交叉耐药性，在我国已经广泛应用于临床。目前治疗非淋巴细胞白血病常用的 HOAP，HOP 方案等均以此为主要成分1，2。虽然国内外有关 HHT测定的报道很多，但应用 HPLC检测的却很少。中国药典 2000版本虽然收集有此药物，对其原料及注射液采用紫外分光光度法测定含量，该法专属性不强，当样品放置较长而产生降解时，因无法分离其降解
3、产物而使含量偏高。建立高效液相色谱法3能有效地分离降解产物，从而准确地测得高三尖杉酯碱的实际含量。该方法简单，2可靠，灵敏度高，可作为 HHT原料药的含量测定方法。 1.、仪器与试药 Agilent-1100 色谱仪及工作站；AG135 电子分析天平；高三尖杉酯碱工作标准品（批号：040601 含量：100%） ；三尖杉碱工作标准品（批号：040701 含量：100%） ；检验用样品（由公司连续生产的三批原料药样品，批号：050401、050402、050403） ；纯化水；三乙胺（分析纯） ；冰醋酸（分析纯） 。 2.、方法与结果 2.1 色谱条件：色谱柱：Thermo C18（4.6150
4、mm，5m） ；。流动相4，5：0.5% 三乙胺溶液： 用大约 50mL水溶解 0.5mL三乙胺，混合均匀，配置成为 0.5%三乙胺溶液；0.2% 醋酸溶液： 先用约 700mL水溶解 2.0mL冰醋酸，用 0.5%三乙胺溶液调 pH至 6.50.2，再用水稀释至 1000mL，制得 0.2%醋酸溶液；流动相：取 240mL乙腈和 760mL 0.2%醋酸溶液混匀即得。流速：1.0ml/min；柱温：25；检测器：UV 检测器；检测波长：288nm。 2.2 溶液配制 ：高三尖杉酯碱对照品储备液（1mg/mL） ；高三尖杉酯碱对照品溶液（0.1mg/mL） ；三尖杉碱储备液（0. 6mg/mL
5、） ；分离度试验溶液：精密吸取 5.0mL 高三尖杉酯碱对照品储备液和 2.0mL三尖杉碱储备液，置 50mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，混匀，此溶液含高三尖杉酯碱约 100g/mL 和三尖杉碱约 24g/mL；供试品溶液（0.1mg/mL） 。 2.3 系统适用性试验：在上述色谱条件下，分别进样流动相、三尖杉碱储备溶液、高三尖杉酯碱对照品溶液、分离度试验溶液，记录各图谱。3测试结果为：高三尖杉酯碱对照品溶液保留时间（min）4.448、分离度6.06、拖尾因子 1.25、理论板数 7251；三尖杉碱储备溶液保留时间（min）3.326、分离度 6.02、拖尾因子 1.05、理论板数 684
6、1。根据此结果，分离度试验溶液中高三尖杉酯碱和三尖杉碱的分离度不低于 3.0；高三尖杉酯碱计，理论塔板数不低于 3000，拖尾因子不大于 1.5。 2.4 系统精密度：取 10l 高三尖杉酯碱对照溶液注入色谱仪，记录色谱图。连续进样六次，主峰面积的 RSD为 0.24%。 2.5 线性关系：准确称取高三尖杉酯碱工作对照品（批号：040601）约 20mg、22.5mg、25mg、27.5mg、30mg 置 25mL容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，混匀。分别吸取 5mL各溶液分置 50mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，混匀，得到系列样品测试溶液。各浓度点（80%120%）各取 10l 溶液，
7、注入液相色谱仪，记录色谱图。连续进样三次。以 HHT浓度 C（g/ml）对峰面积 A进行回归计算，得回归方程Y=3.6785X-5.3824及相关系数 r2=0.9998。结果表明，在所测浓度范围内（80.84-120.48g/ml） ，HHT 浓度（x）与峰面积（y）的线性关系良好，r20.999。 2.6 准确度：准确称取高三尖杉酯碱工作对照品（批号：040601）约20mg、25mg、30mg 各 1份置 25mL容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，混匀。分别吸取 5mL各溶液分置 50mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，混匀，得到系列样品测试溶液。各浓度点（80%、100%、120%）溶液各取10l，注入液相色谱仪，记录色谱图。连续进样三次，计算每个样品峰面积的平均值、每个浓度点的含量及 3个点间的平均含量和 RSD。结果见4表 2：
