1、细菌分散仪在结核病实验室诊断中的应用体会,检 验 科 任 易,1. 结核病实验室诊断简介,2. 结核分枝杆菌细菌学检测,3. 传统的细菌学方法介绍,4.细菌分散仪的应用评价,5.细菌分散仪的原理及特点,结核病实验室诊断技术简介,1.结核抗体2.结核蛋白芯片3.体外r-干扰素试验4.结核杆菌分泌抗原,1.涂片2.培养3.药敏4.菌型鉴定,细菌学,免疫学,分子生物学,其 他,1.HPLC2.质谱技术3.流式技术,1.实时荧光定量PCR2.DNA3.RNA4.耐药基因突变5.菌型鉴定6.测序,结核分枝杆菌细菌学检测,1.直接抹片法2.离心制片法,1.固体培养法2.液体培养法,1.罗氏比例法2.BD仪
2、器法3.液体微量法,传统方法-菌悬液的制备流程,吹打研磨棒磨菌瓶,目视比浊比浊仪分光光度计,传统方法-菌悬液制备的困扰,Better Way ？,分散效果及比浊结果受人为因素影响大，重现性低,开放容器易产生气溶胶,耗时、操作繁琐,细菌分散仪的应用,完美替代传统细菌分散方法 使菌悬液制备、定量一步到位！,BACspreaderTM1100,菌悬液制备过程比较,细菌分散仪应用评价,细菌分散效果,手工磨菌染色,分散仪菌悬液外观,分散仪菌悬液染色,细菌分散仪应用评价,细菌分散仪对细菌活力的评价,方法：分散仪制备1.0麦氏浊度的菌悬液， 分别稀释成10-2mg/ml、10-4mg/ml菌液。 然后分别1
3、、2、5分钟继续使用分散仪超声分散，重复以上过程。最后用22-SWG标准接种环分别取1满环菌液用划线法接种在中性罗氏培养基上，37培养，观察生长状况，进行菌落计数。,细菌分散仪应用评价,细菌分散仪对细菌生物学活性（药敏试验）的评价,方法：进行结核分枝杆菌药物敏感性试验（比例法） 分别将手工磨菌和细菌超声分散计数仪超声分散至1.0mg/ml（即1.0麦氏浊度）的菌悬液稀释至10-2mg/ml和10-4mg/ml，参照结核病诊断细菌学检验规程。用22SWG标准接种环分别沾取1满环（即0.01ml）稀释好的菌液，用划线法均匀接种至对照及含药培养基表面，注意使菌液尽可能分布于培养基斜面。最终接种菌量为
4、10-4mg和10-6mg。接种完成后置于37温箱中培养28天，观察结果。,细菌分散仪应用评价,2015年12月至2016年6月期间，本实验室将细菌超声分散计数仪用于136株结核分枝杆菌临床菌株和30株国家质控菌株的药物敏感性试验，取得了很好的试验结果。药敏试验结果参照结核病诊断细菌学检验规程进行判读。与手工磨菌比浊、稀释后接种的药敏试验结果相比，两种菌悬液制备方法的药敏试验结果相同，无显著差异。,试验结果,细菌分散仪的特点,分散、比浊全过程在密闭容器中进行，最大限度保证生物安全性；分散、比浊及稀释在同一支管中完成，减少移液次数，最大限度减少污染源；,仪器自动超声分散，自动比浊，自动折算稀释体
5、积，从取菌到配成标准菌悬液仅需3步，菌悬液制备快捷方便；,与传统方法相比，超声分散更均匀，降低细菌数量导致的误差；5秒自动读取浊度数据，避免时间性误差；全自动完成，避免人为误差，重现性更高；,标准化,高效,安全,细菌分散仪的工作原理,超声波产生,空化作用,细菌分散仪的工作原理,在超声波作用下，试管中的微小气泡核产生振动，当声压达到一定值时，气泡将迅速膨胀，然后突然闭合，在气泡闭合时产生冲击波。利用这种超声空化作用，完成对结团性细菌的分散。,利用90度散射光特性，即不论激光波长和待检测细菌直径大小关系如何，在菌液浓度一定时，90度方向上散射光强度保持恒定。再利用光传感器把光信号转化为电信号，最终
6、结果以菌液浓度呈现。,细菌分散仪的定量标准,仪器配套的浊度标准液来源于中国计量科学研究院，并申明本系列标准溶液严格按照美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）的规定和国际上公认的配制方法制备成麦氏标准溶液，并将量值传递到细菌浊度标准溶液。通过使用满足计量学特性要求的制备方法和计量器具，保证标准溶液量值的溯源性。,准确度：相对误差10%；精密度：相对标准偏差5%,浊度溯源：,仪器精准度：,细菌分散仪的应用前景,分枝杆菌等微生物药敏实验的菌悬液制备,水处理、固液分散、溶液中颗粒的解团聚实验,生物制品研发及细菌培养的菌落分散及浊度检测实验,可用于各省市疾控中心结防所、结核病定点医院、科研机构、生物公
7、司等,超声分散法-痰液前处理？,体必康集团,体必康，为结核病科学创新领航！,TBHealthcare ，LeadingtheWayinScientificInnovationforTB！,体必康集团,体必康简介,广东体必康生物科技有限公司，以”为结核病科学创新领航“为集团发展的源动力，立志为结核病的创新提供系统的解决方案。将科研团队在结核病领域十余年的研究积累成果进行转化。体必康基于研发和平台积累了大量的核心技术，目前共申请专利28项，其中发明专利17项、实用新型专利7项、外观专利4项；授权专利发明授权3项、实用新型专利5项、外观专利授权4项；另有两项国际PCT专利在申请中,团队组成,研发团队
8、以中国科学院生物物理研究所的院士和资深科学家为核心、青年学术带头人为主体、组成了多学科交融的老中青结合的强有力研究团队，员工中博士占28%，硕士占24%，学士占32%。,旗下,旗下,广州博翀生物科技有限公司进行生物芯片产品的开发、生产和市场营销工作，在广州科学城，有800平米的研发生产和办公场地。,公司介绍,广东希格生物科技有限公司1200平米的GMP生产车间，从事医疗器械和诊断试剂开发、生产和市场营销工作。,集团科研转化能力,武汉肺科医院,武汉市肺科医院结核病实验室诊断技术,培养：固体BD960液体,武汉肺科检验科,PZA,Face the problem and find the best solution,谢谢聆听,谢谢聆听,
