1、基于肿瘤免疫原理及现有技术设计临床细胞免疫治疗方案中国人民解放军总医院肿瘤中心实验室王 歈,2013年12月20日，SCIENCE杂志“肿瘤免疫疗法”：全球十大科技突破之首,2,Ipilimumab（-CTLA-4）和Nivolumab （-PD1）: 患者体内抗肿瘤T细胞被非特异性激活,CAR-T：CTL019：赋予患者体内T细胞以特异性肿瘤抗原识别能力,39名罕见并致命的急性淋巴细胞白血病儿童，有36名儿童（92%）在输注该药物后经历了完全缓解。6个月后，70%的响应者仍处于缓解中，75%的儿童仍存活。CTL019在5名滤泡性淋巴瘤患者中达到了100%的缓解率和80%的完全缓解率，使5/1
2、1名弥漫大B细胞淋巴瘤患者肿瘤缩小，到第三个月时，36%的人未显示有疾病迹象。24名慢性淋巴细胞白血病2期，达到42%的缓解率，一半的受试者出现完全缓解。在9个月的随访中，有68%的总生存率。主要副作用：在每一项研究中，一些或全部的患者经历了细胞因子释放综合征(CRS)，这是人体对细胞治疗药物的一种响应，这种响应可导致类似流感的症状，甚至会导致一些病例死亡。诺华报道了三例与CTL019相关的CRS相关死亡，指出每个死亡病例的感染都是独立的，该综合征严重程度往往与疾病负担相对应。,Cancer Antigens vs Cytotoxic T Cells,特异性免疫治疗,肿瘤抗原的类型,TIL治疗
3、恶黑PR和混合型反应50% Science. 2002 ),TCR基因转染T细胞治疗恶黑（Science，2006）,CAR-T19治疗CLL（14例，2015）,疗效持续监测：CAR-T19治疗CLL（14例，2015）,精准免疫细胞治疗治愈一例胆管细胞癌（Science，2014）,A “blueprint” for the treatment of patients with T cells recognizing tumor-specific mutations.,Steven A. Rosenberg, and Nicholas P. Restifo Science 2015;348
4、:62-68,Published by AAAS,体外活化、扩增肿瘤记忆性T淋巴细胞,抗原活化的树突状细胞（AADC）,AADC作用机制,体外肿瘤抗原活化大量抗原提呈细胞（APC）APC体内活化肿瘤抗原特异性记忆性T细胞记忆细胞大量增殖成为效应细胞效应细胞进入外周组织杀伤肿瘤通过不断重复此过程，控制残存肿瘤细胞复发转移,APC体外活化,Sipuleucel-T（Provenge，2010年获FDA批准上市）显著延长晚期去势治疗失败的前列腺癌患者的OS,Kantoff PW et al. N Engl J Med. 2010;363(5):411-22,Sipuleucel-T治疗转移性前列腺癌
5、，疾病进展时间不延长，但OS显著提高4.1个月。,AADC可延长手术后黑色素瘤患者无进展生存期和生存率,AADC可延长晚期黑色素瘤患者的总生存期,LDC, 74岁,女,胃癌术后复发后5年余(颈部、纵膈及腹膜后淋巴结转移、腹水中等量）Her-2 +,手术,2010.6.22,12周期化疗,2010年7-8月,2011年6-8月,多发淋巴结转移,2011年9-10月,612周期S1+Lapatinib,2012年1-2月,SD,2012年3月,2013年6-11月,Lapatinib,35周期化疗Lapatinib,PD,PD,SD,PR,2014年 1月,EAAL,2011年6-8月,2011年
6、9-11月,EAAL,2012年1-2月,EAAL,2013年5、11月,AADC-1、2,2014年1、5、8月,AADC-3、4、5,2015年1月,AADC-6,2015年1月,2015年5、6月,AADC-7、8,cCR,cCR,2015年10月, CTLA4单抗/PD-1单抗 ,WDQ, 41岁, 男, 恶性黑色素瘤(右手中节）,AADC适应症,肿瘤抗原明确、免疫原性明确的肿瘤疾病进展较为缓慢ECOG PS 01,非特异性免疫治疗,肿瘤微环境：反应性肿瘤间质Tumor Microenvironment: Reactive Stroma,Ipilimumab（-CTLA-4）和Nivo
7、lumab （-PD1）: 患者体内抗肿瘤T细胞被非特异性激活,Immune Monitoring of CTLA-4 and PD-1 Antibodies,血液淋巴细胞计数在治疗过程中的变化CD4+ICOS+肿瘤抗原特异性抗体肿瘤特异性T细胞TregMDSCPD-L1/PD-1表达突变抗原错配修复基因,Signatures of mutational processes in human cancer,体外活化、扩增肿瘤记忆性T淋巴细胞,外周血20-100ml,扩增及活化,回输100ml/次，1-8次,培养及扩增14-35天,收集诱导的杀伤细胞,扩增活化的淋巴细胞（EAL）,EAL作用机制
8、,体外活化扩增记忆性T细胞，获得含有大量肿瘤抗原特异性效应细胞的混合T细胞T细胞进入体内杀伤肿瘤细胞,记忆性T细胞体外活化扩增,EAAL细胞培养后肿瘤特异性T细胞比例显著增加,外周血T细胞体外培养前后的肿瘤抗原特异性分析,两项随机对照临床试验,生存曲线分析,EAL临床效果,回顾病理明确及随访资料完整、接受过至少六次EAAL过继性细胞免疫治疗的54例NSCLC、16例SCLC、42例胃癌、38例结直肠癌及24例胰腺癌患者作为治疗组研究对象，按1:1的比例选取与治疗组患者同期入院的上述5种恶性肿瘤患者作为对照组研究对象，随访所有患者，Kaplan-Meier法分析治疗组及对照组OS的差异，COX回
9、归法多因素分析对OS产生影响的因素，并分层分析不同亚组患者接受EAAL细胞治疗后OS获益情况。,不同类型恶性肿瘤总生存期结果,NSCLC,SCLC,PCGC,CRC,40,胰腺癌肝转移病例报告,EAL清除急性髓性淋巴细胞白血病（AML）微小残留的作用,2010年1月至2013年6月北京大学人民医院儿科收治的初治AML（除M3外）患儿65例，均为化疗后白血病基因残存患儿。对照组：24例；EAL治疗组：41例男孩28例（43%），女孩37例（57%）诊断时年龄1-16岁，中位年龄9岁。按照FAB分型，M2型49例（75.4%），M4型12例（18.5%），M5型4例（6.1%）。中位随访时间为25
10、个月（5-50个月）。65例患儿中有5例失访，失访率7.6%。对患儿的遗传学特点的检测分为2方面：白血病融合基因的检测，应用逆转录聚合酶链式反应（reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR）定量检测突变基因方法对诊断时的骨髓标本进行白血病基因检测，主要检测的靶基因有：AML1-ETO、CBF-MYH11、CEBPA、NPM1、WT1、c-kit、FLT3；2）、染色体检测，采用24小时培养G显带描述核型。,谢飞，男，14岁首次住院：2011.5.24入院血象：WBC142.76109/L骨髓形态：AML-M2染色体：46，XY
11、，inv(16)基因：CBF-MYH（+) 83.2% c-kit点突变阳性。治疗经过：ADE双诱导后，予大剂量阿糖胞苷与HA交替治疗，8个月时CBF-MYH（+）0.13%，加用EAAL2疗程， CBF-MYH转为0%，但停用4个月后CBF-MYH（+）0.024%，继续EAAL2疗程CBF-MYH0%，再巩固EAAL1疗程，现CBF-MYH持续0%1年余。,宋宇卉，女，11岁首次住院：2012.7.17发病时WBC 73109/L染色体：46，XX，del(7)(q32),t(8,21）基因：AML-ETO（+），c-kit（-）治疗经过：化疗8个月后AML-ETO（+）为0.05%，加用
12、EAAL治疗，2疗程后融合基因转为0%，现继续治疗中。,王颖，女，5岁发病日期：2013.1发病时WBC53.7109/L骨髓形态：AML-M4EO染色体：47,XX,+8,inv(16)基因： CBF-MYH（+） c-kit点突变（-）治疗经过：院外2疗程后CR，建议予HSCT来我院。入院CBF-MYH（+）0.22%，加用大剂量阿糖胞苷化疗3个月，基因仍（+），遂行化疗加EAAL治疗，2疗程后融合基因为0%，现仍继续治疗中。,EAL细胞联合化疗治疗儿童AML疗效优于单纯化疗，可明显延长MRD阴性持续时间及无事件生存时间,EAL适应症,肿瘤抗原不明确根治性治疗后预防复发与化疗联合产生协同作用与化疗联合有效降低化疗副作用ECOG PS 02,常规治疗基础上的非小细胞癌免疫细胞治疗方案,常规治疗基础上的小细胞癌免疫细胞治疗方案,常规治疗基础上的卵巢癌免疫细胞治疗方案,常规治疗基础上的复发难治卵巢癌免疫细胞治疗方案,常规治疗基础上的宫颈癌免疫细胞治疗方案,常规治疗基础上的子宫内膜癌免疫细胞治疗方案,肿瘤免疫治疗疗效,目前临床疗效:延长患者无瘤生存期延长患者总生存期与常规治疗联合的协同效应肿瘤治愈的病例个案,未来疗效预期：免疫治疗与传统治疗联用的模式治疗将有巨大的发展，从而最终改善患者的临床结局。治愈肿瘤,
