1、第十一章吩噻嗪类抗精神病药物的分析,The analysis of Phenothiazine antipsychotics,药物分析学教研室,本 章 内 容,基本结构与性质,鉴 别,有关物质检查,含量测定,掌握：结构、性质和分析测定方法熟悉：鉴别试验及有关物质检查的方法了解：性状、临床特性及其体内药物分析,教学目的与要求,各种幻觉妄想为主的患者称为精神分裂症I型情感淡漠、思维贫乏为主的患者称为精神分裂症II型,脑内多巴胺神经系统的功能亢进,吩噻嗪类药物,吩噻嗪类药物的作用机制,第一节 结构与性质 Structure and Property,吩噻嗪类药物为苯并噻嗪的衍生物，分子结构中均含有硫
2、氮杂蒽母核。,R: -H、-Cl、-CF3、-COCH3、-SCH2CH3R: 具有23碳链的二甲或二乙胺基，或含氮杂环如哌嗪和哌啶的衍生物,吩噻嗪类药物的基本结构,P292,典型药物分子结构,盐酸异丙嗪Promethazine Hydrochloride,盐酸氯丙嗪Chlorpromazine Hydrochloride,奋乃静Perphenazine,盐酸氟奋乃静Fluphenazine Hydrochloride,癸氟奋乃静Fluphenazine Decanoate,盐酸三氟拉嗪Trifluoperazine Hydrochloride,盐酸硫利达嗪Thioridazine Hydro
3、chloride,盐酸氯丙嗪Chlorpromazine Hydrochloride,结构分析,1. 硫氮杂蒽母核,（1）含S、N的三环共轭的大体系，S、N与苯环形成p-共轭具有紫外吸收光谱特征,（2）硫氮杂蒽环上硫原子为-2价，具有还原性，易氧化呈色 （3）硫氮杂蒽环上硫原子有两对孤对电子，易与金属离子络合呈色,2. 取代基 R：脂烃胺基、哌嗪基，具碱性 R：卤素,1. 弱碱性,主要理化性质,碱性较强,弱碱性极弱,脂肪烃氨基、哌嗪及哌啶等衍生物所含氮原子碱性较强，可用于鉴别和含量测定。,2.易氧化性,光照时易氧化变质，避光保存,易被H2SO4、HNO3、H2O2、FeCl3氧化,3.与金属离
4、子配合呈色,可与钯离子配合生成有色化合物，可用于鉴别和含量测定。氧化产物亚砜和砜无此反应,机理,4.紫外光吸收特性,硫氮杂蒽母核为共轭体系，紫外区三个吸收峰值，约205nm、254nm、300nm，最强多在254nm附近,2位上的取代基(R)不同，会引起吸收峰发生位移 其结构中-2 价的硫，易氧化，氧化产物砜及亚砜有四个吸收峰,5.红外吸收特性,第二节 鉴别试验 Test of Identification,化学鉴别法,光谱法,色谱法,其他方法,第二节 鉴别试验,一般选用24种不同原理的分析方法组成一组鉴别试验,盐酸异丙嗪片 （ ChP2015）,氧化显色反应,氯化物的鉴别反应,薄层色谱法(T
5、LC)或高效液相色谱法(HPLC),提取后红外分光光度法(IR),盐酸氯丙嗪 （ USP32-NF27）,红外分光光度法(IR),薄层色谱法(TLC),氯化物的鉴别反应,奋乃静 （ EP7）,熔点测定,红外分光光度法(IR),盐酸硫利达嗪（ JP15）,氧化显色反应,红外分光光度法(IR),氯化物的鉴别反应,一、化学鉴别法,弱碱性,易氧化性,与金属离子配合呈色,生物碱沉淀剂反应,氧化显色反应,与钯离子配合呈色反应,卤素取代基,吩噻嗪类药物的盐酸盐,含卤素取代基的反应,氯化物的鉴别反应,【示例11-1 】盐酸氯丙嗪鉴别 （JP15 ）,化学鉴别法,1.与生物碱沉淀剂反应,0.1g/20ml,静置
6、5小时生成沉淀,测定熔点175179,盐酸氯丙嗪片鉴别？,三硝基苯酚沉淀再用丙酮重结晶 测定熔点,2. 氧化显色反应,HNO3,FeCl3,H2SO4,H2O2,常用氧化剂,化学鉴别法,常见显色,化学鉴别法,盐酸异丙嗪,（2）取本品约 0.1g，加水3ml 溶解后，加硝酸 1ml，即生成红色沉淀；加热，沉淀即溶解，溶液由红色转变为橙黄色。,（1）取本品约 5mg，加硫酸5ml 溶解后，溶液显樱桃红色；放置后，色渐变深。,化学鉴别法,盐酸氯丙嗪,示例11-3 取本品约 10mg，加水1ml溶解后，加硝酸5滴即显红色，渐变为淡黄色。,化学鉴别法,盐酸氯丙嗪片鉴别？,示例11-4,示例11-5 11
7、-6 JP15 三氯化铁 红色,3.与钯离子配合显色,【示例11-7 】,癸氟奋乃静的鉴别 ChP（2015）,取本品约 50mg，加甲醇2ml 溶解后，加 0.1% 氯化钯溶液 3ml，即有沉淀生成，并显红色，再加过量的氯化钯溶液，颜色变深。,化学鉴别法,4.含卤素取代基的反应,奋乃静,绿色,焰色反应,化学鉴别法,铜网,P297,(红色),(无色),显色反应（如氟奋乃静等含氟有机药物）,4.含卤素取代基的反应,盐酸癸氟奋乃静注射液 （ ChP2015）,加茜素锆,化学鉴别法,氟化物,酸性茜素锆试液,ZrF62-,(黄色),茜素磺酸钠,5.氯化物的鉴别反应,鉴别反应,与AgNO3的沉淀反应,与
8、MnO2等氧化剂的氧化还原反应,化学鉴别法,AgNO3沉淀反应鉴别：由于硫氮杂蒽母核具有还原性，稀HNO3的加入使该类药物发生氧化显色反应。可在供试品溶液中加氨试液使成碱性，吩噻嗪类药物析出，滤除沉淀，取滤液进行试验。,注意,MnO2等氧化剂的氧化还原反应进行鉴别： 注意：硫氮杂蒽母核和氯离子均被氧化鉴别方法：具有挥发性的氧化产物氯气使 用水湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色,鉴别反应,与AgNO3的沉淀反应,与MnO2等氧化剂的氧化还原反应,化学鉴别法,5.氯化物的鉴别反应,化学法小结,（一）与生物碱沉淀剂反应:与生物碱沉淀剂形成衍生物，测定熔点,（二）氧化显色反应：S原子为-2价，具有还原性,（三
9、）与钯离子配合呈色：Pd2+与S配合,（四）含卤素取代基的反应: 焰色反应；显色反应,（五）氯化物的鉴别反应： AgNO3沉淀反应；MnO2氧化还原反应,1. 紫外分光光度法,母核在205 nm、254 nm和300 nm三个波长处附近有最大吸收，最强峰多在 250265nm,2位上的取代基(R)不同，会引起吸收峰发生位移,其结构中-2 价的硫，易氧化，氧化产物砜及亚砜产生四个吸收峰,二、光谱法,ChP2010收载的吩噻嗪类原料药均采用红外分光光度法(IR)鉴别，制剂提取后IR鉴别。,光谱法,2. 红外分光光度法,盐酸氯丙嗪,盐酸异丙嗪,光谱法,三、色谱法,主要用于吩噻嗪类药物及其制剂的鉴别,
10、方法：对照品法 要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同。,TLC法,主要用于吩噻嗪类药物及其制剂的鉴别,HPLC法,方法：对照品法要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。,吩噻嗪类药物还可以通过熔点测定进行鉴别,【示例11-22】 EP7奋乃静鉴别法：照毛细管法测定，本品的熔点为96100。,四、其他方法,第三节 有关物质检查 Test of related substances,Is it pure?,有哪些有关物质？,合成路线,残留的中间产物,有哪些有关物质？,贮藏过程中产生的有关物质,有哪些有关物质？,有关物质:,一、残留的中间产物,二
11、、贮藏过程中产生的有关物质,如何检查这些有关物质？,测定方法 样品液10.1%-1.0% 溶液 样品液20.01%-0.1% 溶液,有关物质检查 高低浓度对照法,薄层色谱（TLC） 高效液相色谱（HPLC）,（一）TLC,薄层色谱很直观，定性定量用途宽。定性根据比移值，半定量法靠斑点。,TLC判断:,控制杂质斑点个数， 控制杂质种类 样1杂质斑点强度不得 超过样2主斑点,硅胶G板,【示例11-25】 ：盐酸氯丙嗪的有关物质检查,供试液：,对照液：,TLC试验：,5mg/ml,25g/ml,判定杂 质斑点,USP32-NF27检查法,特点： （1）简便易行，不需特殊的仪器； （2）只能控制单个杂
12、质的限量。,（二）HPLC法,1. 峰面积归一化法2. 不加校正因子的主成分自身对照法3. 加校正因子的主成分自身对照法（有对照品） 4. 内标法加校正因子测定杂质的含量(有对照品) 5. 外标法(有对照品),（二）HPLC法,（高低浓度对比法）,供试品,对照液,判定方法： 规定杂质峰数目 规定杂质峰面积,特点： （1）需特殊仪器； （2）可以控制杂质总量。,Waters 液相色谱仪2690,岛津液相色谱仪LC-10A,【示例11-23】盐酸氯丙嗪的有关物质检查,供试液： 0.4mg/mL,对照液：0.002mg/mL,ChP2015检查法,【示例11-23】盐酸氯丙嗪的有关物质检查,单个不大
13、于，总和不超过2倍,ChP2015检查法,第四节 含量测定CONTENT ASSAY,吩噻嗪类药物含量测定？,酸碱滴定,A,分光光度法,B,HPLC,C,HPLC-MS,D,一、酸碱滴定法,1. 非水溶液滴定法,进行非水酸碱滴定的原因：许多弱酸、弱碱不能直接在水溶液中滴定(CK HBr H2SO4 HCl HNO3,冰醋酸是强酸的区分溶剂。强酸在冰醋酸中的总强度的顺序为： ? HBr HCl HNO3 HClO4 H2SO4,酸性溶剂是弱碱的均化性溶剂，是强酸的区分性溶剂 碱性溶剂是弱酸的均化性溶剂，是强碱的区分性溶剂,+,HClO4滴定,空白试验校正,终点指示,弱碱的滴定,有机碱及其盐类供试
14、品,冰醋酸,结果,电位指示终点法,HAc体积随温度变化较大，且还具有挥发性，测定样品与标定标准溶液时温度不同，应对浓度进行校正。,如果：t1-t010C或贮存时间超过30天则在临用前必须重新标定标准溶液的浓度。,标准溶液的稳定性,等当点 H+ + Cl- + NaOH NaCl + H2OBH+ +Cl- + NaOH B + H2O + NaCl,突跃体积V1V2,滴定体积 VV2V1,乙醇-水溶液中，采用NaOH滴定；在反应体系加入适量盐酸，采用电位滴定法指示终点,一、酸碱滴定法,2. 乙醇-水溶液中的氢氧化钠滴定法,1.直接分光光度法(原料药),2.提取后分光光度法(制剂),3.提取后双
15、波长分光光度法(去除氧化物干扰),4.二阶导数分光光度法(自学),5.钯离子比色法,二、分光光度法,3.提取后双波长分光光度法,提取后分光光度法能够除去一些干扰物质，但却不能除去吩噻嗪类药物的氧化物。提取时，氧化物随游离碱进入有机相；测定时，因结构相近，氧化物在吩噻嗪类药物的测定波长处产生吸收，干扰测定。,即，吸收度差值（A）仅与待测组分的浓度有关，而与干扰组分无关，干扰组分的干扰被消除。,定量依据：样品在二波长下吸收度差值（A）,【示例11-37】 盐酸氯丙嗪注射液的含量测定（ USP32-NF27）,式中：C(mg/ml)为对照品溶液的浓度； V(ml)为所取供试品的体积； 括号内的公式分
16、别为供试品溶液(U)和对照品溶液(S)在下标所示波长处的吸光度差。,测定波长：,254nm（最大吸收波长）277nm（等吸收波长）,空白对照液：0.1mol/L盐酸溶液,计算公式：,吩噻嗪类药物在pH 20.1的缓冲溶液中，与钯离子(Pd2+)形成红色配合物，在500nm波长附近具有最大吸收,由于钯离子仅与未被氧化的硫元素配合显色，消除了药物中氧化物对测定的干扰。,比色液的浓度：50 250 g/mL,显色稳定性：10分钟后可稳定约2小时,5. 钯离子比色法,【示例11-38】盐酸异丙嗪注射液USP32-NF27,6.25mg,加饱和氯化钾溶液氢氧化钠溶液碱化甲醇,正庚烷提取3次,470nm处
17、测定吸收度,合并提取液,盐酸酸化提取3次,合并提取液并定容至50ml,标准品和对照品溶液各2ml +PdCl2显色,Stationary phase,ODS,三、高效液相色谱法,1. 反相高效液相色谱法,方法特点：,ODS,内标法+校正因子,甲醇-水；乙腈-水,紫外,三乙胺溶液-甲醇-乙腈,色谱柱：流动相：检测器：定量法：,2. 离子对高效液相色谱法,极性强,反相ODS柱保留弱,影响离子对形成的条件反离子的性质与浓度流动相的组成流动相pH离子强度,常用的离子对试剂：烷基磺酸盐阴离子对试剂，如戊烷磺酸钠、庚烷磺酸钠、十二烷磺酸钠等。,影响条件：流动相一般呈酸性，以利于生物碱的离解离子对试剂的非极
18、性部分越大，形成的离子对分配系数越大，保留时间越长（十二烷基磺酸钠庚烷磺酸钠戊烷磺酸钠）,四、液相色谱-质谱联用技术,液相色谱-质谱联用技术集HPLC的高分离效能和MS的高专属性及高灵敏度于一体，已经成为目前测定复杂生物样本中微量药物的首选方法，同时也是进行药物及有关物质定性分析的常用方法。,基本要求,应用：本类药物的鉴别试验 酸碱滴定法含量测定 离子对高效液相色谱法 描述：本类药物的结构与性质,本章小结,1. 有氧化产物存在时，吩噻嗪类药物的鉴别方法为A. 非水溶液滴定法B. 紫外分光光度法C. 荧光分光光度法D. 钯离子比色法E. pH指示剂吸收度比值法,B D,课堂练习,2. 有氧化产物
19、存在时，吩噻嗪类药物的含量测定方法为A. 非水溶液滴定法B. 紫外分光光度法C. 荧光分光光度法D. 钯离子比色法E. pH指示剂吸收度比值法,D,3. 检查盐酸异丙嗪中“有关物质”时，采用的对照溶液为A. 杂质的标准溶液B. 标准“有关物质”溶液C. 供试品溶液D. 供试液的稀释溶液E. 对照溶液,D,4. 吩噻嗪类药物的鉴别试验为 A 紫外分光光度法(规定吸收波长与相应吸收度法) B 与钯离子(Pd2+)生成橙红色不溶性配位化合物. C 硝酸氧化呈色反应 D 硫酸氧化呈色反应 E 与铜离子(Cu2+)生成橙红色不溶性配位化合物.,5.生物碱类药物的一般鉴别试验包括( ) A 熔点测定 B
20、呈色反应 C 沉淀反应 D 紫外光谱 E 红外光谱,6. 冰醋酸是各种无机强酸的区分溶剂，各种无机酸在其中的酸性强弱顺序为 A HCl04HBrH2S04HClHN03 B HBrHClHN03HCl04H2S04 C H2S04HClHN03HBrHCl04 D HCl04H2S04HClHBrHN03 E HCl04HClH2S04HBrHN03,7. 吩噻嗪类药物的含量测定中，与钯离子反应的比色法需在以下哪种酸性条件下进行A. pH4B. pH33.5C. pH20.1D. pH1E. pH5,8盐酸氯丙嗪的含量测定方法有A. 氧化还原法B. 非水滴定法C. 紫外法 D. 旋光法E. HPLC法,9 吩噻嗪类药物的母核( )。 A含有1个氮原子、1个氧原子，氮原子上一般含 有取代基 B仅含有1个氮原子，氮原子上无取代基，而母环 上有取代基 C仅含有1个氮原子，母环上无取代基，而氮原子 上有取代基 D含有1个氮原子和1个硫原子，氮原子上有取代 基 E含有1个氮原子和1个硫原子，氮原子上 无取代基,D,吩噻嗪类药物具有怎样的结构特征？,吩噻嗪类药物为苯并噻嗪的衍生物，其分子结构中均含有硫氮杂蒽母核。,预习 第十二章 与 第十三章,
