1、1,阴道分泌物检测新技术 阴道炎五联检,2,提纲,背景1.阴道微生态环境2.常见的阴道疾病3.白带检测方法4.方法优势,3,背景,女性生殖道感染性疾病是全球重大社会问题和公共卫生问题WHO1995年统计全球每年有3.33亿可治愈的新病例发生，主要在发展中国家。生殖道感染造成不育达20-60%不等，发达国家36%，不发达国家达85%中国 2011年8月6日公布每年有2亿人感染，5%-8%患者一年中有3次以上复发，治疗费达400亿人民币。60%的输卵管性不育为感染造成。 常见病、多发病导致不孕不育、流产，出生人口素质下降，增加感染HIV的机会，危害女性身心健康，对婚姻质量及家庭稳定产生潜在和深远影
2、响。,4,背景,常见疾病发病率 1、念珠菌外阴阴道炎发病率31.3% 2、细菌性阴道病发病率10.44% 3、滴虫性阴道炎7.44% 4、生殖道菌群失调：89.26%中国实用妇产科杂志2009年12月第25卷第12期阴道炎的诊治进展文章，对6982例门诊就诊女性的统计分析。作者：吴文湘、廖秦平,5,2006年3月-2007年10月，对北京大学第一人民医院妇产科门诊的6982例女性就诊者数据分析,背景,6,背景,7,一.阴道微生物群,定植于阴道内的微生物主要由：细菌、真菌、原虫和病毒组成。阴道菌群约有29种，由多种厌氧菌和需氧菌构成。 1.革兰氏阳性需氧菌及兼性厌氧菌：乳酸杆菌、棒状杆菌、非溶血
3、性链球菌、肠球菌及表皮葡萄球菌 2.革兰氏阴性需氧菌及兼性厌氧菌：加德纳菌、大肠埃希菌及摩根菌 3.厌氧菌：消化球菌、消化链球菌、类杆菌、动弯杆菌、梭杆菌及普雷沃菌 4.其它条件致病菌：支原体、衣原体、念珠菌,8,阴道微生态环境中，保持着协调平衡的状态,虽然正常阴道内有很多种细菌存在，但是由于阴道与这些菌群之间形成生态平衡并不致病，在维持阴道生态平衡中，雌激素、乳酸杆菌及阴道PH起重要作用。阴道正常酸性环境（PH4.5，多在3.8-4.4） 但是阴道生态平衡一旦被打破或外源性病原体侵入，即可导致炎症发生。若体内雌激素下降或阴道PH升高，如频繁性交（性交后PH可上升至7.2维持6-8小时）、阴道
4、灌洗等均可使阴道PH升高，不利于乳酸杆菌生长。此外长期应用抗生素抑制乳酸杆菌生长，或机体免疫力低下，均可使其他致病菌成为优势菌，引起炎症。,9,阴道优势菌的特点,乳酸杆菌：革兰氏阳性杆菌、无芽孢、鞭毛、荚膜，细长有弯曲或呈球杆状、杆状、单个、双极链状无动力的厌氧或兼性厌氧菌。生长适宜温度30-40，最适PH3.0-4.8阴道内最常见乳杆菌有： 1、嗜酸、卷曲、格氏、詹氏乳杆菌主要产H2O2 2、唾液乳杆菌 3、发酵乳杆菌 等20多种,10,阴道优势菌的作用,乳酸杆菌的作用：1、分解糖原，维持阴道酸性环境2、产生多种抑菌物质：乙酸、 H2O2、乳酸菌素、硬脂酸等3、竞争粘附：也称占位性保护4、竞
5、争营养：大量定制于阴道中的乳酸杆菌营养处于竞争优势状态，利用阴道上皮细胞中的糖原，减少其它菌群的碳源供应，通过竞争营养物而干扰其它菌的生长。,11,二.阴道最常见感染,常见感染性疾病 1、细菌性阴道病（BV） 细菌性阴道病（Bacteral Vaginosis,简称BV）它是由于阴道内微生态平衡失调，对人体有益的优势菌乳酸杆菌的大量减少或消失，而加特纳氏菌、动弯杆菌属、类杆菌属、普氏杆菌属等厌氧菌大量增生所引起的一种无阴道粘膜炎症性表现的综合症。,12,致病机理,细菌性阴道病为内源性感染，主要是由于正常阴道菌群（乳酸杆菌)被阴道加特纳杆菌、厌氧菌及人型支原体等混合菌群替代所致。促发阴道正常菌群
6、发生转变，发展成BV的启动因素和机制尚不清楚。 乳酸杆菌对维持正常阴道的生态内环境十分关键。患BV时乳酸杆菌减少而其它细菌增多，导致乙酸浓度降低，胺类和氨增加，使阴道分泌物PH值增加，厌氧菌的代谢产物如腐胺、尸胺和三甲胺，使阴道分泌物具有鱼腥样气味。 BV相关的病原体可产生毒力因子包括细胞毒素、唾液酸酶、粘多糖酶和胶原酶，造成上皮细胞损伤，使液体渗出及阴道鳞状上皮细胞脱落，产生典型的细菌性阴道病的分泌物。,13,流行病学,细菌性阴道病的患病率随种族及人群而异。国外资料表明在非选择性人群中BV的患病率为10%-20%.在性病门诊就诊妇女中的患病率36-50%.因该病除分泌物异常外，无其它症状，患
7、者常不就医，因此很难估计人群中的发病情况。,14,2、霉菌性阴道炎(VVC） 主要分为白色念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、克柔氏念珠菌。对 909 例培养阳性的 VVC 进行研究 ,白念珠菌占77.1 %,光滑念珠菌占 14. 6 %,克柔念珠菌占 4.0 %,热带念珠菌占 2.3 %,近平滑念珠菌占 0.6 ，其它占 1.2 %。,15,3、滴虫性阴道炎（TV) 一种常见的妇科感染性疾病，1、滴虫性阴道炎的危害主要主要是会令人难受及疼痛不适； 2、滴虫性阴道炎可并发滴虫性尿道炎、膀胱炎、肾盂炎； 3、由于滴虫能吞噬精子，可引起不孕症，影响生活质量； 4、阴道毛滴虫长期存在于阴道内，消耗或吞噬
8、阴道上皮细胞内的糖原，阻碍乳酸生成，不仅破坏阴道的弱酸性环境，还有可能引起阴道细胞发育异常，诱发癌前期病变,16,三.目前常规检测方法： 阴道分泌物检查 镜检项目： 白细胞（清洁度） 念珠菌（霉菌） 滴虫 线索细胞（显微镜下很难观察） 是判定BV的一个必要条件。,17,1.4 清洁度判断标准,18,优势菌及病原体染色图片,优势菌：乳酸杆菌,念珠菌,白细胞、滴虫,线索细胞,19,目前检测现状,由于分泌物标本成份复杂，湿片高倍镜检下易漏检、误判,20,目前白带常规镜检特点及存在问题：1、镜检观察，检测标准不统一，操作人员需依赖较强的工作经验，人为因素影响大，主观性强，稍有疏忽或经验欠缺者，容易漏检
9、，误判。2、医院标本量大、劳动强度大，易视觉疲劳致漏检，误判。3、一般是不进行染色，因此乳酸杆菌不好辨认；4、观察清洁度容易受到涂片厚薄、均匀与否、细胞破碎的影响，5、观察念珠菌容易受到杂质粒子干扰；6、观察滴虫容易受到温度的影响或送检时间及时性的影响；7、线索细胞在镜下不好观察，因此不好判定BV,21,四、检测方法比较,细菌性阴道病唾液酸酶检测 唾液酸酶活性增加的主要病原菌是高浓度加德纳菌、普雷沃菌、消化链球菌、动弯杆菌等革兰氏阴性菌和厌氧菌增多的产物。 单一检测有可能漏检部分加德纳菌、动弯杆菌，能通过脯氨酸氨基肽酶活性检测才能弥补其不足提高BV检出率。,22,国外研究情况,美国微生物研究协
10、会：1991年5月在临床微生物研究杂志上发表了“5分钟快速实现白色念珠菌菌落的鉴定方法”均对白色念珠菌特异性酶“L-脯氨酸氨基肽酶”、“乙酰氨基葡萄糖苷酶”快速检测的研究作了详细报导。 2005年4月在生物医学与药物疗法上发表的“阴道毛滴虫中的N-乙酰-D-氨基己糖酶底物特异性和抑制剂活性”说明滴虫具有乙酰氨基葡萄糖苷酶活性,23,检验结果评估,84.7%,11.2%,24,镜检与五项联检比较,25,临床实验结果,26,临床检测意义,1、女性阴道微生态状况(清洁度）评估2、女性生殖道感染性疾病的筛查 细胞溶性阴道炎、外阴阴道念珠菌病、细菌性阴道病、滴虫阴道炎3、辅助诊断 宫颈炎、盆腔炎（子宫内
11、膜炎、输卵管炎）、不孕不育等4、术后感染追踪5、疗效评价,27,四、妇科联检试剂,4.1.通过六项测定1、过氧化氢浓度测定2、白细胞酯酶活性测定3、唾液酸苷酶活性测定4、脯氨酸氨基肽酶活性测定5、氨基葡萄糖苷酶活性测定6、PH值 pH值4.8为滴虫 pH值4.6为念珠菌 可检测：1、乳酸杆菌2、白细胞（清洁度）3、细菌性阴道病4、念珠菌5、滴虫,28,4.2 检测原理,. 过氧化氢浓度测定 标本中的过氧化氢经过氧化物酶作用，释放出新生态氧，后者在4-氨基安替比啉存在下，使TOOS氧化呈红色或紫红色，呈色深度与H2O2浓度成正比。2. 白细胞酯酶活性测定 白细胞酯酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙
12、酸盐，释放出溴吲哚基，后者在氧存在的条件下呈蓝色，呈色深度与白细胞酯酶活性成正比。,3. 唾液酸苷酶活性测定 唾液酸苷酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酰神经氨酸，释放出溴吲哚基遇重氮盐起反应呈红色或紫色，呈色深度与唾液酸苷酶活性成正比。4. 脯氨酸氨肽酶活性测定 厌氧生物以及白色念珠菌有很强的脯氨酸氨肽酶活性，水解L-脯氨酸-对硝基苯胺，释放出黄色的对硝基苯胺，呈色深度与脯氨酸氨肽酶活性成正比。,5. 氨基葡萄糖苷酶活性测定 白色念珠菌和滴虫有很强的乙酰氨基葡萄糖苷酶活性，水解对硝基苯-N-乙酰-D-乙酰氨基葡萄糖苷，释放出对硝基苯酚，后者在碱性条件下呈黄色，呈色深度与乙酰氨基葡萄糖苷酶活性成
13、正比。6. pH测定 正常白带pH为3.8-4.5，BV白带pH4.5，滴虫白带pH大于5-6，霉菌白带pH在小于4.7。,29,过氧化氢 用来表示分泌物中有益菌如乳酸杆菌的多少，阴性表明乳酸杆菌多，属正常。白细胞酯酶 用来表示白细胞的多少，阳性表明表明白细胞多于15/HP，可能有阴道炎。唾液酸苷酶 阳性表明可能有细菌性阴道病(BV)。脯氨酸氨基肽酶 单纯的脯氨酸氨基肽酶阳性表明可能有BV，但若同时伴有乙酰氨基葡萄糖苷酶阳性，则根据乙酰氨基葡萄糖苷酶判断结果。乙酰氨基葡萄糖苷酶 阳性，若同时pH4.8，表示可能滴虫感染；若同时pH4.6,则表明念珠菌感染。,4.2 各项指标意义,30,4.4 结果判断简易图,31,报告单,xxx,32,综 述,1、阴道生物酶联合检测试剂完成阴道分泌物常规检测项目和BV检测2、将传统形态学检测方法发展、提高到功能性生化特异性酶标志物检测，实现了阴道分泌物检测技术新的突破，提高结果准确性3、统一了检测标准，避免了常规镜检方法人为主观因素造成的漏检、误判导致的患者疾病迁延不愈、医疗负担加重所带来的医患纠纷4、能够指导临床医师合理使用抗生素，为临床循证医学提供科学依据5、因其操作简便，符合率高，结果准确可靠，可以互补甚至替代显微镜镜检,33,谢谢！,
