1、1HPLC 法测定掺假玉米馒头中的柠檬黄含量摘 要：建立了氨水甲醇溶液直接萃取-高效液相色谱法测定掺假玉米馒头中柠檬黄含量的方法。柠檬黄的线性范围为 0.5-1000mg/kg，线性方程的相关系数大于 0.99，加标回收率在 93%-110%之间，相对标准偏差均小于 9.1%。柠檬黄的检测限为 0.02mg/kg。该方法简单、可靠、提取效果好，测定结果满意，适用于掺假玉米馒头中衡量柠檬黄的定量分析。关键词：直接萃取；掺假玉米馒头；柠檬黄；高效液相色谱法 中图分类号：TB 文献标识码：A 文章编号：16723198（2015）20022702 1 引言 玉米被称为是抗癌、防衰的粗粮佳品。玉米富含
2、 VE 和 VA，玉米中的VB1、VB2、烟酸和铁质等高出大米 4 倍。玉米所含的脂肪为米面的 45倍，而且富含不饱和脂肪酸，其中 50%为亚油酸，还含有谷固醇、卵磷脂等，能降低胆固醇，防止高血压、冠心病、心肌梗塞的发生，并具有延缓脑功能退化的作用。馒头是我国的传统主食，玉米馒头及其他玉米制品的开发对改善广大人民群众的膳食结构、增强人民体质、增加农业附加值具有重要意义。 柠檬黄是一种食品常用的食品添加剂，添加适量柠檬黄的食品颜色2饱满鲜亮，常用于饮料、蜜饯、酱腌菜等食品中。据报道，目前有不法商贩将柠檬黄添加到馒头制品中，制作出颜色鲜亮的掺假“玉米馒头”柠檬黄是一种水溶性的偶氮染料，长期食用将对
3、大众的身体健康产生负面影响。 目前，检测固体食品中的柠檬黄，大都采用酸性水溶液浸泡提取后，以聚酰胺粉吸附提取液中的柠檬黄，再经氨水甲醇洗脱浓缩的方法。但存在酸性水溶液的提取能力差，聚酰胺粉吸附不完全，柠檬黄损失大的缺点。测定玉米馒头中柠檬黄含量的方法国内外均尚未见报道。 本文建立了氨化甲醇直接萃取-高效液相色谱法测定掺假玉米馒头中柠檬黄含量的方法。样品经 5%氨水甲醇溶液直接萃取后，过滤，经冰乙酸调至中性，旋转蒸发浓缩近干，甲醇/水（50/50）溶液溶解并定容。以乙酸铵/甲醇为流动相梯度洗脱，经 C18 色谱柱分离，采用二极管阵列检测器检测。本方法简单、可靠、提取效果好，测定结果满意，适用于掺
4、假玉米馒头中衡量柠檬黄的定量分析。 2 实验部分 2.1 仪器与试剂 Waters 2695 高效液相色谱仪，Waters 996 PAD 二极管阵列检测器（美国 waters 公司） ；涡旋混和仪；（上海沪西分析仪器厂，WH-3）超声清洗器（上海 KUDOS 超声仪器有限公司，SK7200LH） 。 柠檬黄标准品（纯度大于 99%，百灵威公司）用 11 甲醇水配制成10g/mL 的标准储备液，于-4下避光保存，根据需要稀释成适当浓度的工作液。 32.2 实验方法 2.2.1 样品制备及预处理 空白样品制备：玉米粉量为 30%、加水量为 45%、发酵时间为 3h、醒发时间为 30min，蒸熟。
5、 加标样品制备：玉米粉添加量为 30%、加入不同浓度水平的柠檬黄水溶液的量为 45%、发酵时间为 3h、醒发时间为 30min，蒸熟。制得柠檬黄添加水平分别为0.5、5.0、10.0、50.0、100.0、150.0、200.0、300.0、5000、1000.0、1200.0、1500.0mg/kg 的玉米馒头。 样品预处理：取 20.0g 玉米馒头样品置于 2500mL 具塞三角瓶中，然后加入 150.0mL 新鲜配制的 5%氨水甲醇溶液，振荡混匀，静置 12h 后，过滤，将滤液用冰乙酸调至中性，70下旋转蒸发浓缩至近干，用甲醇/水（50/50）溶液溶解残渣并定容至 5.00mL，过 04
6、5m 滤膜，滤液供上机测定。 2.2.2 色谱条件 色谱柱：Acclaim 120 C18（4.6250mm，5m，美国戴安公司） ；流动相：A 相为 20mmol 乙酸铵溶液，B 相为甲醇，等度洗脱（AB=1684） ；流速：1.0mL/min；进样量：5.0L；检测波长：420nm。 3 结果与讨论 3.1 萃取条件的优化 3.1.1 萃取方法及萃取液的选择 4本文分别用 5 种不同提取液进行预处理，在上述色谱条件下进行分离检测，结果如表 1 所示。 由表 1 可见，单独使用甲醇回收率很低；使用乙腈做提取液回收率提高到 43.5%，但仍不能满足分析的要求；11 甲醇与水的混合溶剂进行提取时
7、发生浑浊，需进行 12000r 高速离心才能够分层。单独用 5%氨水溶液提取，由于不能进行浓缩，仍无法满足分析要求。含有 5%氨水的甲醇溶液进行提取，回收率在 97%以上，效果最佳。另外，氨水与无水乙醇无法互溶，故无法使用。因此本研究确定提取液为 5%氨水甲醇溶液。 3.1.2 提取液体积的优化 萃取液体积对回收率有重要影响。为了确保柠檬黄能够全部提取出来，本研究提高了样品中的添加水平（500mg/kg） ，先按照 3.1.1 确定的方法分别加入 5000mL，100.00mL，150.00mL，20000mL，250mL5%氨水甲醇溶液，振荡混和，浸泡提取 12h，进行分离检测。试验结果如图
8、 1 所示，结果表明，提取液体积在大于 150.00mL 后，提取出的柠檬黄的总量不增加反降低。故本文提取液用量定为 150.00mL。 3.1.3 萃取时间的优化 萃取时间可影响柠檬黄的回收率。分别称取 5 份加标样品（添加柠檬黄水平为 100mg/kg） ，按照 3.1.1 和 3.1.2 节所述方法，分别加入150.00mL5%氨水甲醇溶液，涡旋混和后，分别超声提取1h，5h，10h，12h，15h，20h，30h，60h 然后进行分离检测，结果如图2 所示。结果表明，在萃取时间大于 15h 之后，柠檬黄的回收率基本不再增加。故本文萃取时间定为 15h。 53.2 方法的线性范围，检出限
9、，回收率和精密度 采用外标法定量，柠檬黄在样品中的线性范围为 0.51000mg/kg，相关系数均大于 0.99。以加标样品为测试样品，添加不同浓度水平的柠檬黄，每个水平做 6 个平行样，计算回收率、相对标准偏差（RSD） ，结果见表 2。通过低浓度（0.5mg/kg）添加样品，以 3 倍信噪比为检出限（LOD） ，计算得出柠檬黄的检出限为 002mg/kg，同样条件下，以 10 倍信噪比为定量下限（LOQ） ，计算出柠檬黄的定量下限为 0.5mg/kg。 3.3 实际样品中柠檬黄的测定 测定了 5 份样品，均为武汉质检所日常检测所采集的样品。样品按照本文确定的前处理方法进行预处理后，以 10
10、L 直接进样分析，所得结果如表 3 所示。柠檬黄在 5 份样品中的回收率为 94.6%100.2%。 *ND：未检出（not detected） 采用氨水甲醇溶液直接萃取-高效液相色谱法测定掺假玉米馒头中柠檬黄含量的方法，具有检出限低，杂质干扰少，样品前处理步骤简单，回收率稳定等优点，可用于实际玉米馒头制品中柠檬黄的检测。 参考文献 1刘亚年.玉米的营养价值与人体的健康J.粮食与饲料工业，1993， （05）. 2孙桂华，崔天鸣，付雪娇等.特色杂粮营养成分及保健功能J.杂粮作物，2005， （06）. 3齐振文，刘忠雷，陈小冬等.馒头中添加柠檬黄的调查J.中国卫生监督杂志，2002， （02）. 64邱会东.食用合成色素分析方法的研究进展J.食品与机械，2006， （02）. 5杜建中，庞惠丹，巫素琴等.高聚物萃取双波长法测定胭脂红及苋菜红含量的研究J.食品科学，2008， （03）. 6陈晓珍，郭新东，罗海英等.高效液相色谱法测定蛋卷中的苋菜红和日落黄J.现代食品科技，2007， （06）. 7浮吟梅，石晓，王凤霞.玉米馒头工艺研究J.粮油食品科技，2007， （02）.
