1、12012 年云南省微生物专业（第二次）室间质评小结20120201 号标本：恶臭假单胞菌。严格需氧，有鞭毛，无芽胞、无荚膜的革兰阴性杆菌，有些菌株为卵圆形，单端丛毛菌，运动活泼，最适生长温度 2530，42不生长，4生长不定，菌落与铜绿假单胞菌相似。氧化酶阳性，OF 试验为氧化型，借此可与肠杆菌科细菌相鉴别。鉴定中注意与其他假单胞菌相区别，恶臭假单胞菌只产生荧光素（即青脓素） ，而不产生绿脓素，且 42不生长，借此可与铜绿假单胞菌区别；恶臭假单胞菌不液化明胶、不产生卵磷酯酶、陈旧培养物上有腥臭味，借此可与荧光假单胞菌相区别。恶臭假单胞菌为鱼的一种致病菌，常从腐败的鱼中检出，可作为人类咽部的正
2、常菌群，是人类少见的条件致病菌，偶从人类尿道感染、皮肤感染和骨髓炎标本中分离出，分泌物有腥臭味；也可引起化脓性关节炎和菌血症等。20120202 号标本：热带假丝酵母菌。属于假丝酵母菌属。热带假丝酵母菌在玉米粉-吐温80 培养基上培养 3 天后涂片，可见大量菌丝，菌丝上端有芽生孢子，可分枝或呈短链状，在隔膜处和隔膜之前形成芽；在 SDA 培养基上培养 1-2 天后形成乳白色到奶油色无光泽或稍有光泽的菌落；在显色培养基上菌落成蓝色。目前省内大多数实验室采用了显色培养基来初次分离和鉴别假丝酵母菌属。该显色培养基可对临床常见的几种假丝酵母菌进行鉴别，如白假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌、光
3、滑假丝酵母菌（不同产家的颜色判定标准不同） ，但对于白色的假丝酵母菌，如近平滑，则需要与隐球酵母属和其他酵母菌属进行鉴别，通常的方法可以用墨汁染色和脲酶试验将近平滑假丝酵母与隐球菌属区分开，前者都为阴性，与其他酶母菌属的鉴别就要借此很多生化试验和形态学来区分。热带假丝酵母菌应注意与伪热带假丝酵母菌的鉴别，前者不同化乳糖和蜜三糖，同化海藻糖，芽管试验形成类似白假丝酵母菌样的芽管（但萌发出的是带缢痕的芽，不是真正的芽管） 。值得一提的是，微观检测对酵母菌属的鉴别有至关重要的作用，可观察有助于识别的结构：1、生物体的大小和形状；2、生芽位置；3、荚膜的有无；4、胞壁的厚度；5、假菌丝的存在；6、分生
4、节孢子的存在，但由于真菌种类繁多，镜下形态观察需有丰富的临床经验才可做出正确判断，因此借此一些商品化的鉴定手段是可行的，如采用 API 真菌鉴定板条、细菌鉴定仪等。本次标本在显色培养基中（科码嘉）呈现为蓝色菌落，不难鉴别，因此几乎所有实验室回报的结果都正确。20120203 号标本：溶血隐秘杆菌。属于棒杆菌科中的隐秘杆菌属。隐秘杆菌属有 5 个种，其中与医学相关的有溶血隐秘杆菌、化脓隐秘杆菌（最近从放线菌中重新划分出来的）和伯尔德隐秘杆菌。该菌为革兰阳性，呈多形性、棒状，有时呈颗粒状和念珠状，类似小链球菌，无鞭毛，无抗酸性。该菌在 CO2 环境中生长良好，在血琼脂平板上形成直径 0.1-0.4
5、nm 的白色小菌落，有两种菌落形态，即粗糙型（主要从呼吸道分离出来）和光滑型（主要从伤口分离） ，48 小时后形成狭窄的 溶血环（但溶血环不如化脓隐秘杆菌深和宽） 。生化特征为：触酶阴性，硝酸盐阴性，无动力，不分解木糖。值得注意的是该菌属曾经归放在放线菌属和棒状杆菌属，因脂肪酸分析显示更接近前两者。本次标本镜下形态与放线菌属、诺卡菌属形态很相似，因此有些实验室报告为星形诺卡菌和放线菌（均不得分） ，三者可以用触酶、脲酶、弱抗酸染色试验进行鉴别（见表 1） 。还有部分实验室报告为红斑丹毒丝菌而未得分，那么如何区分两者呢？最简便的方法是通过血培养上的溶血情况和 H2S产生与否进行区分，红斑丹毒丝菌
6、在血培养板上呈现为 溶血或不溶血，产 H2S，而溶血隐秘杆菌为 溶血、不产 H2S。溶血稳秘杆菌还需与其他隐秘杆菌相区别，见表 2，也可通2过 API Coryne 系统准确地鉴定隐秘杆菌中与医学相关的三个种。此外，对鉴定溶血隐秘杆菌有主要作用的是所谓的逆向 CAMP 反应，在这个现象中起作用的蛋白质是一种由溶血稳秘杆菌排出的磷脂酶 D。溶血隐秘杆菌可引起大龄儿童咽炎、伤口及软组织感染、骨髓炎、心内膜炎等。本菌治疗一般选用红霉素、青霉素、第一代头孢菌素或万古霉素等抗生素，但所有 内酰胺、利福平和四环素对隐秘杆菌的 C都很低，而大环内酯类对其有很强的作用，因此可将大环内酯类与 内酰胺抗生素交替使
7、用来治疗感染。表 1 隐秘杆菌属、放线菌属和诺卡菌属鉴别的关键性试验菌名 触酶 脲酶 （弱）抗酸染色隐秘杆菌属（与医学相关的种） 放线菌属 诺卡菌属 表 2 隐秘杆菌属鉴别的关键性试验菌名 七叶苷 葡萄糖 麦芽糖 蔗糖 苷露醇 木糖溶血隐秘杆菌 V 化脓隐秘杆菌 V V V V 伯尔德隐秘杆菌 - 注：“+”为 90%以上菌株阳性， “-”为 90%以上菌株阴性， “V”为 11%-89%菌株阳性。20120204 号标本：大肠埃希氏菌 O157。为肠出血性大肠杆菌（EHEC）的主要血清型。肠出血性大肠杆菌也是大肠杆菌的一个亚型，EHEC 又细分为 157、26、111 血清型，主要致病菌株为
8、 O157H7，可引起感染性腹泻，因能引起人类的出血性肠炎而得名。在 1982 年一次出血性结肠炎流行中被分离出。该菌在菌落形态和生长特性上与普通的大肠埃希菌几乎没有区别，主要鉴别试验为大肠埃希氏菌 O157 不分解山梨醇，因此实验室可用自制或商品的山梨醇麦康凯平板进行该菌的筛选：大肠埃希氏菌 O157 在平板上呈现为无色菌落，而普通大肠埃希菌产生红色菌落；也可通过科码嘉 O157 显色平板进行筛选：大肠埃希氏菌 O157 呈紫色菌落；目前还有一种商品化的大肠埃希氏菌 O157 抗原检测试剂盒可用于检测粪便标本。IMViC+- ，不发酵山梨醇或迟发酵为本菌的主要特征。但需注意的是该菌最有力的鉴
9、定依据仍然为血清分型。大肠埃希氏菌 O157 与致泻性大肠埃希氏菌产生的毒素相似，即类志贺氏毒素，也叫做 Vero 细胞毒素，这类大肠埃希氏菌在南美和欧洲是很常见，在发展中国家该血清型也是血性腹腹泻的常见病原菌。当摄入肠出血性大肠埃希菌后，即在大肠中产生这类志贺毒素，它们可直接损伤粘膜，对肠壁上血管内皮细胞具有毒性作用；如果被吸收，则对其他血管内皮细胞(例如肾脏) 产生毒性作用。其主要临床症状为突发性腹痛、血性粪便（初期为水样泻） 、低烧或不发热，严重患者可显现出血性肠炎，甚至溶血性尿毒综合征。该菌的治疗与普通大肠埃希氏菌引起的感染治疗方法一致。因此，结合 2010 年 CLSI 药敏标准和临
10、床用药习惯，本次药敏试验考核了以下几个药物：氨苄西林（10 分） 、庆大霉素（10 分） 、复方新诺明/左氧氟沙星（任一药物正确得 10 分） 、头孢呋辛/阿米卡星（任一药物正确得 10 分） 。本次标本中大肠埃希氏菌 O157 为一个全敏感菌株，这与相关统计数据是相符的（直至最近，大肠埃希氏菌 O157 对抗生素一律都是敏感的） 。绝大多数实验室鉴定和药敏都正确，但有些实验室尽管对考核的这几个药物检测为敏感，而有些未考核药物却报告为耐药，还有极个别实验室报告为产 ESBL 的大肠埃希菌，需要3查找原因并改进。20120205 号标本：迟钝爱德华菌。属于肠杆菌科爱德华菌属，该菌属含 3 个种，
11、其中迟钝爱德华菌是唯一与人类感染相关的种。该菌为革兰阴性杆菌，有周鞭毛，有动力，无芽胞，无荚膜；在血琼脂平板上 35培养 18-24 小时后形成圆形、湿润、光滑、灰白色的菌落。由于该菌不分解乳糖，在麦康凯琼脂平板上形成无色半透明、湿润、光滑的菌落，故需与非发酵菌相鉴别，关键性鉴别试验为 OF 试验：迟钝爱德华菌为发酵型，而非发酵菌为氧化型或产碱型。该菌的很多生化反应和菌落形态都与不分解乳糖的大肠埃希氏菌相似，两者的关键性鉴别试验为 H2S 产生情况：迟钝爱德华菌可产 H2S，而后者多数不产。但由于有极少数的大肠埃希菌也可产少量 H2S，故还需要借助其他试验进行鉴别，如木糖、山梨醇和黏液酸发酵试
12、验：迟钝爱德华菌可发酵这三种物质，而大肠埃希菌则相反。迟钝爱德华菌与沙门菌属、志贺菌属的鉴别主要根据吲哚试验和血清凝集试验：前者吲哚试验阳性、不与沙门菌或志贺菌抗血清发生凝集，而后二者吲哚试验阳性、可与相应菌属的抗血清发生凝集。迟钝爱德华菌与其他爱德华菌的鉴别见表 3。迟钝爱德华菌存在于自然界中，是一种条件致病菌，其最显著的临床特征是类沙门氏菌肠炎，在所有的年龄组中都能发病，但小孩和老人更易感染，且感染多与水和其他环境事故导致的外伤后感染有关。该菌对多黏菌素具有抗性。如果需要对该菌感染进行抗生素治疗，氨苄青霉素、增效联磺片和环丙沙星都是有效的。因此，结合 2010 年 CLSI 中肠杆菌科的药
13、敏标准，本次选择性考核了以下几个药物的敏感性：氨苄西林（10 分） 、庆大霉素（10 分） 、左氧氟沙星/复方新诺明（任一药物正确得 10 分） 、头孢他啶/氨曲南（任一药物正确得 10 分） 、头孢呋辛/ 亚胺培南（任一药物正确得 10 分） 。本标本为一个全敏菌株，以上药物均为敏感。绝大多数实验室鉴定和药敏都正确。表 3 爱德华菌属鉴别的关键性试验（阳性%）菌名 H2S动力（36） 吲哚 甲基红 丙二酸盐 甘露醇 水杨苷 阿拉伯糖 海藻糖迟钝爱德华菌 100 98 99 100 0 0 0 9 0生物型I 群 0 100 100 100 0 100 0 100 0保科爱德华菌 0 100 50 100 100 100 50 13 100鲶鱼爱德华菌 0 0 0 0 0 0 0 0 0附注：1、本次质评大部分实验室的成绩都很好，只有少数实验室在 20120203 号标本的鉴定中出现了错误。2、本次质评的药敏成绩较上一次有了很大的提高。但有些实验室在回报结果时将 KB 法的结果填写在 MIC 法一栏中，虽然不影响成绩，但请以后注意填写的规范。
