1、猪蓝耳病发病机理及提高非特异性免疫重要性图一 蓝耳病病毒（PRRSV）1 猪蓝耳病（PRRS）的发病机理蓝耳病病毒（PRRSV ）进入猪机体后，侵入肺泡巨噬 细胞，造成严重的间质性肺炎，入侵的第二天即可造成肺的损害，7 天后损伤整个肺尖叶，呈多中心病状，病毒侵入细胞后在细胞内增殖，使巨噬细胞破裂，溶解崩溃，造成巨噬细胞数量减少，肺泡壁增厚，淋巴组织呈衰竭状态，同时降低了肺泡巨噬细胞对其他细菌和病毒免疫力。另外，因为毒株的变异，导致免疫细胞识别能力降低，从而逃避抗体的作用，极易继发或并发其它疾病，使病情非常复杂。图二 正常巨噬细胞（Healthy macrophage ）图三 巨噬细胞被 PRR
2、SV 攻击破裂（Unhealthy macrophage ）2 非特异性免疫与巨噬细胞2.1 非特异性免疫猪在进化过程中形成的、天生即有、相对稳定、无特殊针对性的对病原微生物的天然抵抗力，称为非特异性免疫或先天免疫。非特异性免疫主要由猪体的屏障结构（血脑屏障、胎盘屏障）、吞噬细胞的吞噬功能、正常组织和体液中的抗菌物质以及炎症反应等所组成。其中吞噬细胞包括大吞噬细胞（即单核巨噬细胞）和小吞噬细胞（即中性粒细胞）。2.2 巨噬细胞及其特点2.2.1 巨噬细胞巨噬细胞（Macrophage，M ）由单核细胞发育而成，成熟后的体积较大。游离于血液中与固定在不同组织中的巨噬细胞其形态与名称不同。在光学显
3、微镜下，可见有圆形或其他形状的核，染色质较浓缩，经特殊染色还可见到线粒体、高尔基体和中心体等。在电子显微镜下，还可进一步看到内质网、溶酶体、微丝、微管和吞噬体等。巨噬细胞在机体免疫中有着极其重要的作用。最初只知道它有吞噬外来异物的作用，因此只认为是一种非特异性的免疫作用。随着研究的深入，发现其在协同 T、B 淋巴细胞参与特异性免疫反应及在抗感染方面都有着重要的作用。2.2.2 巨噬细胞特点巨噬细胞具有多种免疫功能，它可吞噬消灭入侵的病原体、有害异物，清除损伤、衰老、死亡和突变细胞及代谢废物，能加工、提呈抗原给淋巴细胞。所以特异性免疫功能是建立在非特异性免疫功能基础之上，使机体免疫功能进一步完善
4、。巨噬细胞之所以能完成这些功能是由于它具有三个特点：（1）巨噬细胞是机体最早识别外来异物的细胞。人们惊异地发现，巨噬细胞可以识别和吞噬各种各样的外来的或“ 自身” 的物质，没有这种广泛而有效的识别，也就谈不上免疫系统对抗原物质的免疫应答和有效保护。研究表明这种识别的基础是在巨噬细胞膜上存在很多的受体（表 1），这种能力是在物种系统发生中逐渐形成的。表 1 单核巨噬细胞膜上的受体性能受体名称 结合对象 对胰酶敏感性 主要功能Fc 受体（FcR ） IgG2a 敏感 ADCC、调 理、吞噬Fc 受体（FcR ） 聚合IgG、IgG1、IgG2b不敏感 ADCC、调 理、吞噬Fc 受体（FcR ）
5、IgG3 ADCC、调 理、吞噬IgM 受体（Fc R） 单体或完整IgMADCC、调 理、吞噬补体 C3b 受体（C3bR） C3b、C3cADCC、粘连、吞噬补体 C3d 受体（C3bR） C3b、C4ADCC、粘连、吞噬各种淋巴因子受体 MIF、CSF、LDCF（1）见注（1）淋巴细胞受体 T、B 细胞 细胞间相互激活聚合蛋白受体 聚合的蛋白 转 接异物，加速吞毁连接蛋白受体（FNR） 连 接蛋白（FN）促 进内吞，消除病原高密度脂蛋白受体 高密度脂蛋白乳铁传递蛋白受体 乳铁蛋白唾液糖蛋白受体 唾液糖蛋白胰岛素受体 胰岛素纤维蛋白原受体 纤维蛋白质其他各种受体 见注（2） 见注（2）注：
6、（1）MIF 可阻止巨噬细胞游动。CSF 可促进单核巨噬细胞生长，LDCF（淋巴 细胞衍生的 趋化因子）招引单 核巨噬细胞趋向异物；（2）包括对各种激素、神经肽、多糖质、糖蛋白、脂蛋白及脂多糖的受体，可调控单核巨噬细胞功能。（2）巨噬细胞具有多种胞内酶和胞外酶(表 2)，使之有效地消化、杀灭被吞噬进入细胞内的病原体及异物。表 2 单核巨噬细胞的酶类及其功用酶系名称 主要功能溶酶体水解酶组织蛋白酶 B（cathepsin B）透明质 酸酶（hyaluronidase）糖苷酶（gucosidase）脱氧-/ 核糖核酸 酶（DNase/RNase）细胞内水解消除吞噬的异物及病原体 细胞外破坏炎症组织
7、溶酶体中性蛋白酶胶原蛋白酶（collagenase） 促进创伤愈合弹性蛋白 酶（elastase） 降解弹性蛋白血纤维 蛋白溶 酶原激活剂（PA ） 促进溶解血块血管紧张素转化酶（angiotensin C se） 促进降低血压溶酶体脂酶脂蛋白脂酶（lipoprotein lipase ）磷脂酶（phospholipase）降解脂质及磷脂、消除内毒素脂多糖 氧化及催化 Cl-水解杀菌溶菌酶（lysozyme）髓过氧化物酶（myeloperoxidase）胞外酶核苷酸 酶（nucleotidase）亮氨酸氨肽酶（leucine aminopepto dase）碱性磷酸酯酶（alk.phophoe
8、sterase）精氨酸酶（arginase ）脱氨 酶（deaminase）在细胞外进行物质代谢，供给养分及能量其他酶类（3）巨噬细胞还可以分泌很多活性物质，其分泌产物之多，可与肝细胞相比拟。这些分泌产物对组织、细胞起着重要调节作用（表 3）。表 3 巨噬细胞的分泌产物1 . 单核因子（mo nokines ） 5 . 细胞外基质及连接蛋白IL-1LAF 纤维连接素（Fibronectin ）IL-3CSF 95000 明胶结合蛋白IL-6BCDF 凝血 扬 升素（thrombospodin）干扰 素（IFN-/y）MAF 6 . 反应性中间物肿瘤坏死因子（TNF ） 超氧化物（ superx
9、ide）2 . 激素（normones ）样物 过氧化氢（H 2O2）前列腺素（ PGE2，PGF2a） 羟基（hydroxylradical）凝血 噁烷（thromboxane） 亚硝酸盐、硝酸盐白三烯（leukotriene ） 7. 生长因子及活化因子花生四烯 酸（eicosatetraenoicacid） 粒细胞集落刺激因子（ G-CSF）促肾上腺皮质激素（ACTH ） 中性粒 细胞活化因子（NAF）胰岛素样物（insuline-like） 单核细胞/巨噬细胞集落刺激因子 （G/M-CSF）胸腺素 B4（thymosine B4） 促红细胞生成素-内啡 肽（-endorphin） 细胞
10、集落增强因子二羟基维生素 D 成纤维细胞生成因子、活化因子及 转化因子3 . 补体（comlement, C）成分 浆细胞瘤生长因子C1、C2、C3、C4 及 C5 血小板衍生的生长因子备解素（P）、B 因子、D 因子 谷胱甘肽（glutathione）抑制物：C3b 抑制物、 1H 8 . 酶及细胞抑制物补体裂解成分（由 M 蛋白酶裂 蛋白酶抑制物解）：C3a、C3b、C5a、Bb a1 抗胰蛋白酶4 . 凝血因子 a2 巨球蛋白（a 2M）凝血因子 V、V11、1X 及 X 胶原蛋白酶抑制物凝血酶原、凝血酶原酶 磷脂酶抑制物组织因子、血纤维蛋白溶酶 脂调节素（lipomodulin）抑制物
11、、血纤维蛋白溶酶 1L-1 抑制物原激活剂及抑制物9 . 嘌呤及嘧啶产物 转铁蛋白（transferrin）胸腺嘧啶脱氧核苷（dT ） 同族 铁蛋白（isoferrin）脱氧胸苷（deoxycytidine） 转钴 胺素（rtanscobalamine ）尿 嘧啶（uracil）尿酸 脱辅基脂蛋白 E（apolipopreotein E）新蝶呤（ neopterin） 脂 质转移蛋白（lipid transfer preotein）10 . 其他结合蛋白 亲和素（avidin）3 特异性免疫与蓝耳病疫苗3.1 特异性免疫特异性免疫又称获得性免疫或适应性免疫，是经后天感染(病愈或无症状的感染)
12、或人工预防接种( 菌苗、疫苗、类 毒素、免疫球蛋白等) 而使机体获得抵抗感染能力。一般是在微生物等抗原物质刺激后才形成的(免疫球蛋白、免疫淋巴细胞)，并能与 该抗原起特异性反应。主要参与细胞是 T、B 细胞和抗原提呈细胞。在抗原刺激下，机体的特异性免疫应答（体液免疫或细胞免疫），一般可分为感应阶段、反应阶段和效应阶段。感应阶段是对抗原的识别及处理阶段。绝大多数抗原物质第一次进入机体后，须经巨噬细胞处理后将抗原信息传递给免疫活性细胞（T 细胞、B细胞）。反应阶段是免疫活性细胞接受抗原刺激后，进行分化、增殖，产生大量致敏 T 细胞和 B 细胞，由 B 细胞产生抗体的阶段。此阶段尚有少量细胞停止分化
13、、增殖，成为保留抗原信息的记忆细胞。效应阶段是致敏 T 细胞及抗体发挥免疫功能的阶段。当再次遇到相同抗原时，致敏 T 细胞直接作用于抗原，同时释放出多种淋巴因子，消灭抗原，发挥细胞免疫的作用。而抗体可直接作用于抗原，或与巨噬细胞、补体等协同作用，杀灭或破坏抗原异物，发挥体液免疫的功能。图四 巨噬细胞加工、处理和递呈抗原3.2 猪蓝耳病疫苗随着 PRRS 的发现，PRRS 的疫苗研究也就随之开展，对于蓝耳病的免疫现在养猪界的说法很多，到底应不应该注射疫苗，在疫苗的选择上是应用弱毒苗还是灭活苗，每个人都有自己的看法。目前，世界上商品化的 PRRS 疫苗有弱毒苗和灭活苗两类。弱毒苗的缺点是：把它注射
14、入体内的效果与感染野毒没有多大差别。对完全蓝耳病阴性的场或已经是蓝耳病阳性的猪，当注入另外一种毒株的的 PRRS 疫苗后，它会同野毒一样照样穿过胎盘侵害胎儿。有时，如果我们所使用的疫苗的基因序列与某一群体存在的 PRRS 病毒基因序列相似性达到 70%80%时，疫苗会比 较有效。如果我 们所使用的疫苗的基因序列与我们本场存在的 PRRS 病毒基因序列不同时，则意味着可能会有一场新的蓝耳病到来。Botner 等报道，在丹麦，对 1000 多头 PRRS 血清学阴性猪使用了弱毒疫苗，可是不久后猪群发生了 PRRS，而且从流产胎儿和死胎中分离到了疫苗病毒，发现疫苗病毒可经胎盘感染胎儿，并向未接种的母
15、猪传播，有些猪群则表现出急性 PRRS 样综合症状。Opriessnig 报道从一个多次接种 Ingelvac PRRS MLV 的猪场发生 PRRS 后分离到一株 PRRSV 98-38803，并证实该毒株来自于 Ingelvac PRRS MLV。所以 PRRS 弱毒疫苗的毒力返强的可能性是存在的。从以上结果来看，PRRS 弱毒疫苗免疫产生期快，在控制 PRRS 临床症状上明显好于 PRRS 灭活疫苗。但 PRRS 强毒和弱毒在猪体内的反应过程是一致的，所以长期使用 PRRS 弱毒疫苗所带来的安全问题仍是目前 PRRS 免疫中最大的争议。灭活苗的缺点是：免疫剂量大、免疫次数多、免疫力产生期
16、较长，诱导有效免疫力的能力比较差。但毫无疑问，灭活苗在使用上是比较安全的，可以诱导一定的抗体产生，如果抗体与野毒的基因序列比较相似，同样还会产生保护；如果基因序列不相似，则保护力比较差。这就是这两种疫苗的不同之处，了解到他们的缺点后我们在生产实践中就要避免它。所以要根据每个养殖场不同的情况来选择疫苗。灭活苗的安全性大大高于弱毒苗，而且不存在散毒的危险，然而再好的灭活苗的效果也不能和弱毒苗的效果相比较的。所以对于种猪和阴性场应该选用灭活苗，而阳性场为了净化蓝耳病最好选用免疫效果好的弱毒疫苗。专家之音南方农村报：当前，不少地方养殖场出现接种蓝耳病疫苗(尤其是弱毒苗) 后大量死猪的现象， 这是否意味
17、着弱毒苗有很大的危险性？樊福好：我个人觉得，接种疫苗只是防控高致病性猪蓝耳病的权宜之计，市 场上个别厂家的产品也存在着灭活疫苗灭活不完全、弱毒疫苗混有强毒的情况，建议养殖户在选用疫苗产品时，一定要慎重。从理论上说，弱毒苗虽然在实际效果上会好于灭活疫苗，但是在目前的情况下，蓝耳病的免疫还存在着许许多多的问题尚未解决，匆匆忙忙推荐某些疫苗( 弱毒或灭 活疫苗) 的做法值得商榷。目前针对所谓新变异毒株的疫苗主要是灭活疫苗，其免疫效果，我个人不太了解。减少养猪生产中抗生素的使用，减少过多种类的疫苗接种，反而是当前提高猪群免疫水平的有效途径之一。袁世山：这种打苗(尤其是应急免疫) 后发病的情况可能会出现
18、。主要原因包括：第一，免疫程序( 亦即打苗时机及疫苗剂量)不当：严格来说，应急免疫对蓝耳病效果不好，但如果进行，建议越早越好；注苗前已感染的猪肯定是要发病乃至死亡的；另外，因为蓝耳病疫苗保护性免疫应答迟缓，一般需要 3-4 周才能起作用，在此期间内感染猪也会发病或死亡。第二，慎选疫苗，正规疫苗质量较好，一般无毒力过高或返强问题。杨汉春：关于蓝耳病活疫苗的使用在生产上应慎重，从国家相关单位的试验结果来看，现有的活疫苗对流行的变异毒株的免疫保护率不好；至于变异毒株的灭活苗，已有的数据表明，对变异毒株具有较高的免疫保护率，但在实际生产中的免疫效果如何还需要进一步验证，对其他蓝耳病病毒毒株的免疫效果如何还缺乏实验室数据，因蓝耳病病毒本身就容易变异，不同毒株之间的交叉的免疫保护效果就不是很好，这也是防治蓝耳病的难题所在。至于自家组织苗，我认为规模化猪场可以采用这一措施，用采自猪场本身发病死亡猪的组织制成灭活苗(但要灭活彻底)用于本场猪的免疫，也不失为一种有效的方法，但最好不要用于其他猪场。（樊福好：现任广东省养猪行业协会技术部部长、农业部种猪质量监督检验测试中心基因分析室负责人。）（袁世山：中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病学研究室教授，主持蓝耳病基因工程疫苗研制。）（杨汉春：中国农业大学动物医学院教授，对猪猪蓝耳病和猪圆环病毒病研究方面有很高的造诣。）（摘自：南方农村报）
