1、第八章 感染性疾病的实验诊断,海南医学院附属医院检验科林尤仕,第六节 肝炎病毒感染标志物的检测,目前已经发现的病毒性肝炎主要有5 型，即甲型（HA）、乙型（HB）、丙型（HC）、丁型（HD）和戊型（HE），它们分别由甲型、乙型、丙型、丁型和戊型肝炎病毒引起。一般实验室可通过检查相关病毒的血清标志物来获取肝炎病毒的感染和转归情况。由于肝炎标志物的种类较多，选择时应结合流行病学特点和临床特点。,各种类型的肝炎病毒的传播途径,甲型肝炎病毒与戊型肝炎病毒由消化道传播，引起急性肝炎，不转为慢性肝炎或慢性携带者。乙型与丙型肝炎病毒主要由输血、血制品或注射器污染而传播，除引起急性肝炎外，可致慢性肝炎，并与肝
2、硬化及肝癌相关。丁型肝炎病毒为一种缺陷病毒，必须在乙型肝炎病毒的存在下才能复制。,一、甲型肝炎病毒,Hepatitis A virus, HAV,小RNA病毒科 肝RNA病毒属,1、标本采集血清：采集到急性期和恢复期的血清。粪便：发病前2周内或出现症状后几天采集。2、参考范围抗HAV-IgM、抗HAV-IgA：阴性。HAV抗原：阴性。HAV-RNA：阴性。3、检测方法：抗原和抗体的检测用ELISA。 HAV-RNA的检测用PCR。,4、临床意义（1）抗 HAV-IgM阳性率在发病后2周最高，约6个月后转为阴性，抗 HAV-IgM阳性说明机体正在感染HAV，它是早期诊断甲肝的特异性指标。（2）抗
3、HAV-IgG阳性提示既往感染，可作为流行病学调查的指标。（3）HAV-RNA阳性对诊断HAV感染具有特异性。,二、乙型肝炎病毒,HBV属 嗜肝DNA病毒科(Hepadnaviridae),土拨鼠肝炎病毒（WHV）地松鼠肝炎病毒 (GSHV)鸭乙型肝炎病毒（DHBV）苍鹭乙型肝炎病毒（HHBV）,HBV的发现源于表面抗原的研究。 1963年Blumberg首先在澳大利亚土著人血清中发现一种新抗原，称为澳大利亚抗原（Australia antigen）；直至1968年确定这种抗原与血清型肝炎密切相关，称为肝炎相关抗原（hepatitis associated antigen，HAA）；1970年
4、D.S. Dane在肝炎患者血清中发现具有传染性的颗粒，即Dane颗粒（Danes particle）。从而HBV被确认。 HBV是乙型肝炎病原体，主要经输血、注射、性行为和母婴传播。起病徐缓，部分患者可转为慢性，少数还可导致肝硬化和肝癌。,HBV形态结构,（三种形态的病毒颗粒）,大球形颗粒（Dane颗粒）,小球形颗粒,管形颗粒,电镜下的HBV,1、标本采集：血清2、检测方法：抗原抗体定性用ELISA。抗原抗体的定量检测用化学发光免疫分析。核酸分析（HBV-DNA）用PCR。3、参考范围HBsAg和HBeAg和抗HBe、HBV-DNA以及抗HBcIgM和抗HBcIgG均为阴性，抗HBs阴性或者
5、10IUL，注射乙肝疫苗后阳性为接种成功。,乙肝抗原抗体检测,HBsAg/抗HBsHBeAg/抗HBe 抗HBc 俗称“二对半” 或“乙肝五项”。 检测“二对半”的目的是判断有无HBV感染及其感染状态如何。,4、临床意义（1）乙型肝炎病毒表面抗原（HbsAg） HbsAg为HBV中Dane颗粒外层的脂蛋白囊膜，其编码基因位于HBV双链DNA的S区。HbsAg在感染后1- 2个月出现于血清中，可持续数周数月甚至数年。慢性乙型肝炎及携带者HBsAg 可呈阳性。 患急性乙肝后HBsAg阳性持续6个月以上、肝功能异常、HBV-DNA阳性者可能发展为慢性乙肝或者肝硬化，应积极治疗。HBsAg无症状持续阳
6、性6个月以上或者持续多年，肝功能正常、HBV-DNA阴性者，可进行医学观察，不必治疗。,（2）乙肝病毒表面抗体（ HBsAb） HBsAb是目前公认的针对HBsAg的保护性抗体， 它对HBsAg有一定的中和作用，是机体具有免疫力的标志。 【临床意义】 阳性见于既往感染过HBV，现已恢复，阳性可持续 多年。注射过乙肝疫苗或者HBsAb免疫球蛋白者。,（3）乙肝病毒e抗原（HBeAg) HBeAg是HBV核心颗粒中的一种可溶性蛋白质，具有抗原性。【临床意义】 HBeAg阳性表明乙肝病毒处于复制期，具有较强的传染性。如患者HBeAg持续阳性，表明肝细胞损害较重，可发展为慢性乙型肝炎或者肝硬化，孕妇则
7、可以引起垂直传播给新生儿。,（4）乙肝病毒e抗体（HBeAb) HBeAb是乙肝患者或者携带者经HBeAg刺激后产生的一种特异性抗体，继HBsAb后出现于血液中，未具有保护性。HBeAb阳性表示大部分乙肝病毒被消除，病毒复制减少，传染性减低。一些慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌患者可阳性。,（5）乙肝病毒核心抗体（HBcAb) HBcAb有IgM、IgG、IgA三种，一般实验室通常检测抗HBc总抗体和IgM类抗体。抗HBc总抗体对机体无保护作用，阳性可持续数年甚至终生，见于急、慢性乙肝，肝癌病人及部分HBsAg阴性者。抗HBc-IgM抗体阳性是HBV近期感染的敏感指标，也是HBV在体内持续复制的指标
8、，提示病人有传染性，抗HBc-IgM抗体阴转，提示乙肝逐渐恢复。,（6）HBV血清学标志物检测常见结果的解释,三、丙型肝炎病毒,丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus，HCV）引起丙型肝炎。 HCV主要经血或血制品传播，目前占输血后肝炎的80%90%。在我国丙型肝炎流行率为2.1%。其临床和流行病学特点类似乙型肝炎，但症状较轻，演变为慢性者多见，部分患者可发展为肝硬化或肝癌。,目前对HCV尚不能通过血清分型，而根据基因序列同源性及亲缘关系分析可将世界各地分离到的毒株分为型6个基因型，每个型又可分为亚型 (a、b、c表示)。欧美流行株多为型，而亚洲和我国流行的多为型。,1、标本采集：血
9、清2、检测方法抗体检测用ELISA或者化学发光免疫分析。HCV-RNA检测用PCR。3、参考范围：HCV抗体为阴性， HCV-RNA阴性。,HCV的形态结构,4、临床意义1、抗 HCV-IgM阳性见于急性HCV感染，具传染性，约6个月后转为阴性，否则容易转为慢性丙型肝炎；2、抗HCV-IgG阳性提示既往感染；3、在疾病早期如果HCV抗体阴性，可做HCV-RNA检测，以排除HCV感染。,四、丁肝病毒,HDV是一种缺陷病毒，必须依赖嗜肝DNA病毒才能复制。由HBsAg构成其外壳HDV定位于肝细胞核内，在血液中由HBsAg包被，形成35-37nm颗粒单负链环状RNA,HDV的结构,丁肝特点只能感染H
10、BsAg阳性的病人Coinfection - concurrent infection at the same time; Superinfection - HDV infection occurs on carriers of HBV. 我国丁肝感染率在1.6%-5%，西南地区HDV感染使慢性乙肝病情加重和恶化,五、戊型肝炎病毒,1989年在美国夏威夷召开的国际肝癌会上，将肠道传播的非甲非乙型肝炎病毒正式命名为戊型肝炎病毒（hepatitis E virus, HEV），是戊型肝炎（hepatitis E，HE）的病原体。 戊型肝炎主要经粪口途径传播常引起大流行，其临床和流行病学特点类似甲型
11、肝炎。,五 种 肝 炎 病 毒 比 较,第七节 性传播疾病（STD）的实验诊断,性传播疾病(STD),传统性病-通过性交传染-主要病变发生在外生殖器-梅毒-淋病-软下疳-性病性淋巴肉芽肿-腹股沟肉芽肿,现代性病-各种性接触-主要病变发生在外生殖器及非生殖器部位-20余种-AIDS -非淋菌尿道炎-尖锐湿疣-生殖器疱疹-念珠菌病-滴虫-巨细胞病毒感染-疥疮-阴虱 -乙肝 ,概 况,每年新发3.4亿 位居传染病第3位梅毒增长艾滋病扩大严峻考验 社会问题,一 梅毒,是由梅毒螺旋体感染引起的一种慢性全身性性传播疾病主要通过性交或从母体通过胎盘传入侵犯多系统多脏器重点防治STD之一,二期梅毒,梅毒分期,
12、根据传播途径-获得性-胎传,根据病期(2年或2岁为界)-早期(一期,二期)-晚期(三期),一期梅毒,1、标本采集（1）病灶渗出物：用以电镜观察及荧光抗体染色。（2）血清、脑脊液：用于抗体检测。2、检测方法：显微镜检查、血清学实验、PCR。,三期梅毒,3、临床意义（1）显微镜检查：暗视野显微镜检查 是诊断早期梅毒唯一可靠的实验室方法，特别是血清学反应阴性者，镜检阳性有确诊意义。 直接免疫荧光检查 弥补了暗视野显微镜法的缺点，可用于口腔病灶的检查。镀银染色法 梅毒螺旋体染成棕黑色，背景染成淡棕色。,早期先天梅毒,（2）血清学实验 是诊断梅毒的主要方法分为两大类 ：非梅毒螺旋体抗原血清试验 （筛选实
13、验）性病研究实验室试验（VDRL） ：主要用于脑脊液的检测，因抗原制备复杂，已少用。不加热血清反应素试验（USR）：为VDRL的改良方法快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）：胶体炭作为指示剂（常用）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）：甲苯胺红作为指示剂（常用）,梅毒螺旋体抗原血清试验 以梅毒螺旋体膜蛋白为抗原，检测梅毒IgG和IgM抗体。（确诊实验）荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）：是一种间接免疫荧光法，被认为是检测梅毒的金标准。梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）和梅毒螺旋体明胶凝聚实验（TPPA）。 PCR：是最为理想的梅毒初筛方法。它可以最大限度的检出各期梅毒。同时保证了敏感性和
14、特异性。,常见的实验室检查为初筛实验+确诊实验同时检测。如TRUST+TPHA检测。结果意义如下：1、TRUST-,TPPA- 可基本排除梅毒。极早期梅毒（无任何抗梅毒抗体产生）。极晚期梅毒。艾滋病病人合并梅毒感染。 2、TRUST+,TPPA+ 现正梅毒，应考虑治疗。3、TRUST-,TPPA+ 极早期梅毒、|晚期梅毒、治愈的早期梅毒（应询问病人是否有既往的梅毒感染和治疗史;若病人否认有既往史）。解释漏检4、TRUST+,TPPA- TRUST 假阳性,梅毒螺旋体TPHA试验,二、获得性免疫缺陷综合征,（艾滋病、AIDS）,什么是艾滋病？,艾滋病艾滋病病毒,简称：AIDS,简称：HIV,AI
15、DS是一种由HIV侵入人体后破坏人体免疫功能，使人体发生多种不可治愈的感染和肿瘤，最后导致感染者死亡的一种严重传染病。,概 念,主要侵犯CD4+T淋巴细胞-机体细胞免疫功能部分或全部丧失-发生条件致病菌感染及恶性肿瘤,艾滋病离我们并不遥远,存活感染者 自己知道 自己不知道全球： 3800万 800万 3000万中国： 84万 6万 78万,哇！有这么多人不知道自己感染。我是否.你呢?,我国有94%的感染者处于无关怀、无指导的状态，成为活跃的传染源。,艾滋病的发现,AIDS全球流行情况,近20年AIDS全球流行2003年底艾滋病感染者及AIDS存活者 4000万，其中新感染500万(儿童70万)
16、20073200万大多数在发展中国家-AIDS全球流行形式严峻-医学问题-社会问题,艾滋病流行已成为全球第四位死亡原因,AIDS中国流行情况,我国85年第一例2001，9，HIV/AIDS28133例，死641例2003年底艾滋病感染者及AIDS 已达到85万2007-AIDS中国流行形式严峻快速增长期及艾滋病期,MSM 同性恋,Drug Users 吸毒者,Sex workers性工作者,General Population 一般人群,Family家庭,Children儿童,Source Population 源头人群,Bridge Population 桥梁人群,传播模式由高危人群开始，传
17、播到一般人群全球共同模式,口腔毛状粘膜白斑,脂溢性皮炎,卡波西肉瘤（KS）,肺部卡氏肺曩虫肺炎,诊断,流行病学临床表现,病原体实验室检查-HIV病毒分离培养-抗体检测-抗原-病毒核酸（PCR）免疫缺陷实验室检查-外周血淋巴细胞或CD4+细胞计数(小于0.2109/L),诊断,HIV感染-初筛及确证试验阳性,AIDS-HIV抗体（+）加下述一项确诊-减重10%+发热一月 或减重10%+腹泻 或明显霉菌及其它致病菌感染 或卡氏肺曩虫肺炎 或KS 青年呆痴,我国艾滋病病例诊断标准 1、HIV感染者：受检血清初筛试验阳性，确证试验如蛋白印迹法阳性。2、确诊病例：（1）艾滋病病毒抗体阳性，又具有下述任何
18、一项者，可为确诊艾滋病病人。,近期内（36个月）体重减轻10%以上，且持续发热达38度C1个月以上。近期内（36个月）体重减轻10%以上，且持续腹泻（每日达35次）1个月以上。卡氏肺囊虫性肺炎（PCP）。卡波济肉瘤（Kaposi）。明显的霉菌或其它条件致病菌感染。,（2）若HIV抗体阳性者体重减轻、发热、腹泻症状接近上述第1项标准且具有以下任何一项时，可为确诊艾滋病病人。CD4 /CD8淋巴细胞计数比值1，CD4细胞计数下降。全身淋巴结肿大。明显的中枢神经系统占位性病变的症状和体征、出现痴呆，辨别能力丧失、或运动神经功能障碍。,三、生殖器疱疹,生殖器疱疹是由单纯疱疹病毒（HSV）引起的生殖器部
19、位感染的一种性病，好发于中青年人，主要通过性接传播，也可通过母婴传播，其它途径传播较为少见。临床上以肛门及外生殖器部位反复发生成群的小水疱为特征。孕妇患病，可通过胎盘或产道将疾病传染给胎儿或新生儿，引起死胎、死产或新生儿疱疹病毒感染等。,生殖器疱疹主要根据有婚外性接触史或配偶感染史结合临床表现而做出初步诊断。要进一步确诊则需做如下检查 ： 1、细胞学检查(Tzank涂片) 2、病毒抗原检测 3、病毒培养,1细胞学检查(Tzank涂片) 取一消毒的载玻片做疱底印片，以Wright染色或Giemsa染色后镜检，在显微镜下见到具有特征性的多核巨细胞或核内包涵体者可确诊。2病毒抗原检测 从皮损处采集标
20、本，以单克隆抗体直接免疫荧光法或酶联免疫吸附法（ELISA）检测单纯疱疹病毒抗原，阳性者可确诊。3病毒培养 从皮损处采集标本作病毒培养，发现有单纯疱疹病毒和细胞病变者可确诊。,四、尖锐湿疣,由人乳头瘤病毒(HPV)感染引起的鳞状上皮增生性疣状病变传播途径：主要为性接触直接传播临床症状：不明显，部分可有外阴骚痒、灼热痛或性 交后痛 典型体征：初为小而尖、孤立或成簇、粉或白色丘疹 逐渐融合呈鸡冠状或菜花状，顶可有溃疡,尖锐湿疣实验室检查与诊断细胞学检查：挖空细胞、角化不良细胞 醋酸试验 ：（+）阴道镜检查：提高醋酸试验阳性率病理检查 ：鳞状上皮增生，呈乳头状生长核酸检测 ：PCR诊断：典型病例肉眼可作出诊断； 不典型者，需进行实验室检查,第八节 部分新发传染病的实验诊断,一、严急性呼吸综合征（SARS）,传染性非典型肺炎是由一种新的冠状病毒（SARS相关冠状病毒）引起的急性呼吸系统传染病。又称为严重急性呼吸综合征（SARS）。临床上以发热、头痛、肌肉酸痛、乏力、干咳少痰为特征。,实验室特征性病原学检测的诊断意义1.通过细胞培养方法从患者临床标本中分离到SARS病毒，是感染的可靠证据。2.KT-PCR法检测患者SARS病毒核酸。3.用IFA和ELISA法检测SARS病人血清特异性抗体。,谢 谢,
