1、HPLC 法测定奥拉西坦注射液中奥拉西坦的含量【关键词】 奥拉西坦 摘要:目的 建立奥拉西坦注射液中奥拉西坦的含量测定方法。方法 高效液相色谱法，用氨基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈水（体积比 8020） ，检测波长 210 nm。结果 奥拉西坦质量浓度在 0.0250.20 mg/mL 范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=10000） ；精密度、重复性试验结果 RSD 分别为 0.10 %和 0.30 %；平均回收率为 100.85 %，RSD0.79 。结论 本法简便，灵敏，准确，重现性好，建立的定量方法可用于控制该注射液的质量。 关键词:奥拉西坦；注射液； 含量测定； 高效液相色谱法
2、 Abstract: Objective To establish a quick and efficient highperformance liquid chromatographic assay for the determination of oxiracetam in oxiracetam injection. Method Chromatography was performed on a column (250/4.6 NUCLEOSIL 1005 NH2) using acetonitrilewater (8020) as the mobile phase under the
3、detection wavelength of 210 nm. Result The linear range was 0.0250.20 mg /ml（r=1.0000）. The average recovery was 100.85 % and RSD 0.79 %. Conclusion The method is convenient,sensitive and accurate for the quality control of oxiracetam injection. Key words:oxiracetam; oxiracetam injection; content de
4、termination; HPLC 奥拉西坦注射液主要成分为奥拉西坦。奥拉西坦（化学名：4 羟基2 氧代 1 吡咯烷酰胺）是一种智能促进药，能改善思维记忆功能和学习成绩，对防治老年性痴呆疗效显著1 。测定奥拉西坦含量的方法，目前国外文献报道有柱切换法2和柱前衍生化法3 ；国内有凯氏定氮法。本文采用 HPLC 法测定奥拉西坦的含量，为控制该产品的质量提供依据。 1 仪器与试药 Agilent1100sereil 高效液相色谱仪；METTLER AE 240 电子分析天平（1/10 万） ；奥拉西坦工作对照品由岳阳市制药三厂提供（质量分数99.7 %） ，奥拉西坦注射液（广东世信药业有限公司提供，
5、批号：030901、030902、030903，规格：5 mL1 g） ，实验用水为超纯水；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 采用色谱柱 250/4.6 NUCLEOSIL 100-5 NH2，流动相为乙腈水(体积比 8020)，流速 1.0 mL/min，检测波长 210 nm，进样 20 L，柱温为室温。 2.2 溶液的制备 2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取奥拉西坦对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每 1 mL 中含约 012 mg 的溶液，摇匀，作为对照品溶液。 2.2.2 供试品溶液的制备 精密量取样品 2 mL 置 100 mL 的量瓶中，用
6、流动相稀释至刻度，摇匀。再精密量取 3 mL 置 100 mL 的量瓶中，加流动相稀释制成每 1 mL 中含 0.12 mg 的溶液，摇匀，作为供试品溶液。 2.3 阴性样品干扰试验 按样品处方量除不加奥拉西坦外，按其工艺制备阴性制剂。再按“供试品溶液的制备”项下方法制得阴性对照液。按上述色谱条件测定，结果显示阴性制剂对奥拉西坦测定无干扰，HPLC 图谱见图 1。 2.4 线性关系 精密称取奥拉西坦对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每 1 mL 中含 1 mg 的溶液，作为对照品储备液。精密量取 0.50 ，1.0，2.0，3.0，4.0 mL 置于 20 mL 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇
7、匀。按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积(A)对质量浓度()进行回归，得回归方程：A10375+22.11，r1.0000。结果表明奥拉西坦在0.0250.2 mg/mL 范围内峰面积与质量浓度呈良好线性关系。 2.5 精密度试验 取浓度为 0.1 mg/mL 的对照品溶液，连续进样 5 次，记录峰面积，RSD 为 0.10% ，表明精密度良好。 2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液在 0、1、2、3、4、5、6、7、8 h 分别进样，记录峰面积。结果平均峰面积为 1316.2，RSD031，表明供试品溶液在室温下 8 h 内稳定。 2.7 重复性试验 取样品（批号为 030903） ，按供试品
8、溶液制备方法配制 6 份供试品溶液,按供试品含量测定方法测定，测得平均值为101.02，RSD0.30，结果表明该方法重复性好。 2.8 回收率试验 取已知含量的同批样品 3 份，分别精密加入奥拉西坦对照品 160 mg(80%)、200 mg(100%)、240 mg(120%),加流动相溶解并稀释制成每 1 mL 含 0.12 mg 的奥拉西坦溶液。照上述色谱条件测定，各进样 3 次，记录色谱图，计算加样回收率。结果见表 2。 表 2 加样回收率试验结果（略） 2.9 供试品的测定 取样品 3 批，按上述色谱条件进行测定，按外标法计算含量并与凯氏定氮法作比较。凯氏定氮方法：精密量取本品 1
9、 mL，置凯氏烧瓶中，加水 250 mL，摇匀，加 40%氢氧化钠溶液 20 mL，连接蒸馏装置，另取 2%硼酸溶液 40 mL 作为吸收液，加入甲基红-溴甲酚绿混合指示液 10 滴，进行蒸馏，至吸收液的总体积约为 200 mL 时，停止蒸馏，吸收液用硫酸滴定液（0.05 mol/L）滴定，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每 mL的硫酸滴定液（0.05 mol/L）相当于 15.82 mg 的 C2H10N2O3。结果见表3。表 3 含量测定结果（略） 3 讨论 本法操作简单，结果准确，方法可靠，重现性好。与凯氏定氮法相比，操作更为简便快速，可用于奥拉西坦注射液的含量测定，为该制剂的测定提供
10、了一种新方法。 将按“2.9”项下方法配制的每 1 mL 中约含 1.0 mg 的样品溶液做降解试验（强光、强热、强酸） ，结果降解产物均能与主峰达到基线分离，对主成分测定不产生影响，说明本色谱系统的专属性良好。HPLC 图谱见图 2。 参考文献: 1江一帆.世界最新药物手册M.中国医药科技出版社,1994:381. 2LECAILLON J B. Determination of oxiracetam in plasma and urine by column-switching high performance liquid chromatographyJ. J Chromatogr,1989,497:223. 3PERUCCA E. Pharmacokinetics of oxiracetam following intravenous and oral administration in healthy volunteersJ. Eur J Drug Metab Pharmacokinet,1984(3):327.
