1、HPLC 法测定异烟肼注射液含量【摘要】 目的 建立用 HPLC法测定异烟肼注射液含量的方法。方法 HPLC法，采用 Hypersil BDS C18柱，以乙腈0.075 molL-1磷酸二氢钠溶液（体积比 595）为流动相，流速为 1.0 mLmin-1，检测波长262 nm。结果 异烟肼在 9.9099.00 gmL-1 浓度范围内与峰面积线性关系良好（r=0.999 9） ，平均回收率 100.3%（RSD=1.0%） 。结论 本法操作简便，快速准确，重复性好，可作为本品质量控制方法。 【关键词】 HPLC 法；异烟肼注射液；异烟肼 Abstract:Objective To estab
2、lish an HPLC method for determining the content of isoniazid in isoniazid injection.Method Samples were analyzed on an Hypersil BDS C18 column using acetonitrile0.075 molL-1 sodium dihydrogen phosphate (595) as mobile phase. The flow rate was 1.0 mLmin-1 and the detection wavelength 262 nm.Results T
3、here was a good linearity for isoniazid in the range of 9.90-99.00 gmL-1 (r=0.9999). The average recovery was 100.3% with RSD 1.0%.Conclusion The method is simple, rapid and accurate, which is suitable for the quality control of isoniazid injection. Key words: HPLC; isoniazid injection; isoniazid 异烟
4、肼注射液为抗结核药，卫生部药品标准采用溴酸钾滴定法测定异烟肼含量1 。本文参照文献2建立了 HPLC法测定异烟肼注射液的含量，试验结果表明，本法操作简便，快速准确，重复性好，可用于异烟肼注射液含量测定。 1 仪器与试药 1.1 仪器 Agilent 1100液相色谱仪（安捷伦公司） ，Hypersil BDS C18柱（菲罗门公司） ，TU1901 型紫外分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司） ，AG285 电子天平（梅特勒-托利多公司） 。 1.2 试药异烟肼对照品（质量分数 99.4%，批号 T2006236，广州白云山明兴制药有限公司提供） 。异烟肼注射液（批号061101，0611
5、02，061103；规格 2 mL100 mg，广州白云山明兴制药有限公司生产） 。乙腈（色谱纯，德国默克公司） ，磷酸二氢钠（分析纯） ，水（注射用水，广州白云山明兴制药有限公司自制） 。 2 方法与结果 2.1 对照品溶液的制备取异烟肼对照品约 100 mg，精密称定，置 100 mL量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液（0.990 0 mgmL-1） ；精密量取 2 mL，置 50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得质量浓度为 0.039 60 mgmL-1的对照品溶液。 2.2 供试品溶液的制备精密量取异烟肼注射液 2 mL（约相当于异烟肼 100 mg） ，置 1
6、00 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取 2 mL，置 50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。 2.3 空白对照溶液的制备除异烟肼外，按处方采用“2.2”项下的方法制备空白对照溶液。 2.4 色谱条件与系统适用性试验色谱柱为 Hypersil BDS C18柱（200 mm4.6 mm，5 m） ，流动相为乙腈0.075 molL-1磷酸二氢钠溶液（体积比 595） ，流速为 1.0 mLmin-1，检测波长为 262 nm，柱温为30 ，进样量为 20 L。分别将对照品溶液、供试品溶液与空白对照溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。理论板数以异烟肼峰计算应不低于 6 000。空白对
7、照溶液在异烟肼峰处无干扰。结果见图 1。 图 1对照品（A） 、样品（B）及空白对照（C）高效液相色谱图（1.异烟肼） 略 2.5 线性关系考察分别精密量取 0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL对照品贮备液，置 50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，依法测定，记录色谱图，以峰面积（A）为纵坐标、质量浓度()为横坐标计算得回归方程：A=32.697-14.975，r=0.999 9。结果表明，异烟肼在9.9099.00 gmL-1 范围内线性关系良好。 2.6 精密度试验取对照品溶液，连续重复进样 5次，结果峰面积的RSD为 0.04%，表明方法精密度良好。 2.7 重复性试验
8、取同一批号异烟肼注射液（061101）5 份，依法测定，计算，结果异烟肼含量的 RSD为 0.4%，表明方法重复性较好。 2.8 稳定性试验取供试品溶液于 0、3、6、12、24、48 h分别依法测定，记录色谱图，结果峰面积的 RSD为 0.6，表明供试品溶液在 48 h内稳定。 2.9 回收率试验精密量取已知含量为 1.023 mgmL-1的异烟肼注射液（批号 061101）1.0 mL，置 50 mL量瓶中，分别精密加入对照品贮备液（0.9900 mgmL-1）0.8、1.0、1.2 mL，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，依法测定。结果见表 1。 表 1异烟肼回收率试验结果 略 2.
9、10 样品测定 取本品，按“2.2”项下的方法制备供试品溶液，依法测定，记录色谱图，按外标法计算异烟肼含量。同时采用溴酸钾法测定含量。结果见表 2。 表 2样品测定结果 略 3 讨 论 3.1 测定波长的选择照紫外 可见分光光度法，取对照品溶液在200400 nm的波长范围内扫描，绘制吸收光谱图，测得异烟肼的最大吸收波长为 262 nm；另取空白对照溶液在此范围内扫描，发现在异烟肼最大吸收峰处无干扰，故选择 262 nm为检测波长。 3.2 流动相的选择曾选用不同比例的甲醇0.075 molL-1磷酸二氢钠溶液、乙腈0.025 molL-1磷酸二氢钠溶液、乙腈0.075 molL-1磷酸二氢钠溶液为流动相进行试验，发现以乙腈0.075molL-1 磷酸二氢钠溶液（体积比 595）为流动相的测定结果比较理想，故确定以此为流动相。 3.3 本法与现有药品标准方法的比较经试验，本文方法与溴酸钾法1测定异烟肼注射液的含量结果无显著差异，且本法灵敏度高，专属性强，快速准确，重复性好，可用于异烟肼注射液含量测定。 【参考文献】 1 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准：化学药品及制剂第一册D.1989：41. 2 杜兴.高效液相色谱法测定复方异烟肼片中各组分的含量J.中国药事，15（2）：116.
