1、不同中药配伍对关木通毒性成分马兜铃酸A 含量的影响【摘要】 观察比较关木通及龙胆泻肝汤各拆方组中马兜铃酸 A 的变化趋势，探讨中药配伍对马兜铃酸 A 含量的影响。 【方法】按龙胆泻肝汤原方比例将供试样品分 7 组：关木通组、全方组、关木通+清热组、关木通+滋阴组、关木通+利水组、关木通+甘草组、阴性对照组（全方去关木通） ；采用反相高效液相色谱（RPHPLC ）法，以 DiamonsilTM(钻石)C18（250 mm 4.6mm，5m）为色谱柱，以甲醇-水-冰乙酸(体积比74：24：1)为流动相，检测波长 315nm，测定各组中马兜铃酸 A 的含量。【结果】与关木通组相比，龙胆泻肝汤全方中马
2、兜铃酸 A 含量最低；关木通+滋阴组马兜铃酸 A 含量也有明显降低。 【结论】在方剂配伍理论指导下，通过合理配伍降低关木通的毒性是可行的。 【关键词】 关木通 化学 龙胆泻肝汤 马兜铃酸 A 分析 中药配伍 色谱法 高压液相 关木通（Caulis Aristolochiae Manshuriensis，CAM）为马兜铃植物东北马兜铃 Aristolochia manshruiensis Kom.的干燥藤茎，其主要化学成分为马兜铃酸 A、B、D，马兜铃 D 甲醚，木兰花碱，齐墩果酸 1 。关木通苦寒有毒，有清心火、利小便、通经下乳之功效，用于口舌生疮、心烦尿赤、水肿、热淋涩痛、白带、经闭乳少、湿
3、热通痹等。现代研究表明其药理作用有利尿、抗突变、抗肿瘤及降血压的作用2 。 关木通含有损害人体肾脏的马兜铃酸，2003 年 6 月国家食品药品监督管理局发出通知取消其药用标准，这意味着关木通从此不能作为一种合法中药使用。本文以历代应用最多的名方龙胆泻肝汤（Longdan Xiegan Decoction，LXD）为例，观察中药配伍是否能降低关木通毒性，从而验证方剂配伍理论的合理性。 龙胆泻肝汤出自医方集解 ，是泻肝胆实火、清下焦湿热的名方。主治肝胆实火上炎，肝胆湿热下注证。近几年来，国内外不断有报道服用龙胆泻肝丸导致肾损害，多与长期超量服用等不合理使用有关3-5 。但龙胆泻肝汤应用数百年来却未
4、见有不良反应，本实验采用反相高效液相色谱(RPHPLC) 法，观察龙胆泻肝汤及其拆方组对关木通中马兜铃酸A（adritolochic acid，AA)含量的影响，探索中药配伍降低关木通毒性的规律。 1 仪器与试药 1.1 仪器 戴安 Summit P680 高效液相色谱仪（美国 DIONEX 公司） ；Chromeleon 色谱工作站（美国 DIONEX 公司） ；UVD170U 紫外检测器（美国 DIONEX 公司） 。 1.2 药品 对照品马兜铃酸 A 由国家药品生物制品检验所提供（批号为：110746200406 ） ；龙胆草、黄芩、栀子、泽泻、当归、生地黄、车前子、柴胡、生甘草、玄参、
5、麦冬均购自广州中医药大学第一附属医院中药房，关木通购于河北安国药材市场，经广州中医药大学中药鉴定教研室李薇教授鉴定为 Aristolochia manshruiensis Kom.。 1.3 试剂 甲醇为色谱纯；冰醋酸、无水甲醇、盐酸、乙醚为分析纯，水为怡宝纯净水。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：DiamonsilTM(钻石)C18（250mm4.6mm，5m） ；检测器：UVD170U 紫外检测器；检测波长：315nm；柱温：室温（25） ；流动相：甲醇-水-冰醋酸（体积比为 75：24：1） ；流速 1mL/min，进样量 5L。 2.2 样品的制备 根据医方集解注：“龙胆泻厥
6、阴之热，柴胡平少阳之热，黄芩、栀子清肺与三焦之热以佐之，泽泻泻肾经之湿，木通、车前子泻膀胱之湿以佐之，然皆苦寒下泻之药，故用归、地以养血而补肝，用甘草以缓中而不伤肠胃，为臣使也“，将方中龙胆草、柴胡、黄芩、栀子归为清热药，将泽泻、车前子归为利水药，将当归、生地归为滋阴药。剂量按原方比例，分以下 7 组：关木通组：关木通 3g；全方组：关木通 3g，龙胆草 2g，黄芩 3g，栀子 3g，泽泻 4g，当归 1g，生地黄 3g，车前子 3g，柴胡 2g，生甘草 2g；关木通+清热组：关木通 3g，龙胆草 2g，黄芩 3g，栀子 3g，柴胡 2g；关木通+滋阴组：关木通 3g，当归 1g，生地黄 3g
7、；关木通+利水组：关木通 3g，泽泻 4g，车前子 3g；关木通+甘草组：关木通3g，生甘草 2g；阴性对照组：龙胆草 2g，黄芩 3g，栀子 3g，泽泻 4g，当归 1g，生地黄 3g，车前子 3g，柴胡 2g，生甘草 2g。 取供试样品，加水 400mL，浸泡 30min，煎煮 60min，用纱布过滤。药渣再加水 100mL，煎煮 30min，纱布过滤。合并 2 次滤液浓缩至 50mL，吸取 10mL，用 6mol/L 盐酸调至 pH=2，转移至分液漏斗中，用乙醚萃取4 次6 （10mL，5mL3） ；合并萃取液，水浴蒸干，用甲醇溶解，定容于 10mL 容量瓶中。通过 0.45m 的微孔滤
8、膜滤过，即得。 2.3 对照品溶液的制备 精密称取马兜铃酸 A 对照品适量，置于 10mL 容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取 1mL，置 10mL 容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成 0.034mg/mL 的溶液即得。 2.4 线性关系考察 按照上述色谱条件测定，精密称取马兜铃酸 A 对照品溶液2.5、5、10、15、20L，以峰面积为横坐标 X，以进样量为纵坐标 Y，绘制标准曲线，结果马兜铃酸的线性范围 0.0840.680g，方程为Y=0.044 6X0.017 3，R=0.999 8（图 1） 。 2.5 精密度试验 取马兜铃酸 A 标准品溶液连续进样 5
9、次，测得马兜铃酸 A 峰面积 sR为 1.8%。 2.6 稳定性试验 取关木通样品在同样条件下，分别于 0、2、4、6h 进样 4 次，测定峰面积。马兜铃酸 A 含量 sR 为 2.6%。结果表明马兜铃酸 A 在 6h 内稳定性良好。 2.7 重复性试验 对同 1 份关木通样品，按样品测定项下同法操作，平行测定 3 次，计算马兜铃酸 A 含量，其 sR 为 1.7%。 2.8 加样回收率实验 精密称取已知样品含量的样品 5 份，分别加入一定量的马兜铃酸 A，按 2.2 项下操作与测定，并根据样品含量及马兜铃酸 A 对照品加入量，计算回收率。结果平均回收率为 99.3%。 2.9 样品测定 取各
10、组样品溶液，在 2.1 色谱条件下进行测定。结果见表 1、图 2。 表 1 结果显示，龙胆泻肝汤不同配伍后，关木通中马兜铃酸 A 含量比较如下： 全方组关木通+滋阴组关木通+利水组关木通+清热组关木通组关木通+甘草组。表明全方组中马兜铃酸 A 含量降低最多。表 1 龙胆泻肝汤及各拆方组中马兜铃酸 A 含量比较 3 讨论 龙胆泻肝汤至今已有数百年的应用历史。历代医家在长期的实践中，掌握了关木通配伍的规律。临床运用时在中医药理论的指导下，严格按照龙胆泻肝汤的适应证、用量及注意事项，合理使用，就可以减少或避免其毒副作用的发生7 。关木通的肾毒性从中医理论来讲属于利水伤阴，龙胆泻肝汤配伍滋阴药物(生地
11、、当归）以养血而补肝，目的是为了防止渗利的药物伤阴。本实验结果中关木通与滋阴药物配伍可以显著减少马兜铃酸 A 的含量，与中医配伍理论相符，说明在中医理论指导下，方剂的配伍有合理性。有文献报道8 ，关木通中毒病例的治疗结果，有 1 例停用透析后连服中药六味地黄丸加减使病情稳定，肾功能一度恢复正常。张岩等9研究发现，六味地黄丸能显著降低关木通溶液中的马兜铃酸 A 的含量。六味地黄丸是滋阴补肾的良方，其滋阴养血之功效，可能在一定程度上缓解了关木通的利水伤阴。杨蕾等10初步证明，在导赤散中具有滋阴功用的生地黄对关木通的肾毒性具有一定的抑制作用。从本实验结果可以看出，从中医理论出发，运用方剂配伍规律探求
12、关木通配伍减毒的途径具有一定可行性。 关木通与清热药和利水药此类苦寒泻下药相配后，马兜铃酸 A 的含量没有增加，而是轻度降低，说明它们对机体的影响并不大，可能是针对病症而起作用。 中药甘草有“解百毒“作用，但配伍甘草后，马兜铃酸 A 的含量反而增加，可能与这两味药性存在七情相反有关。甘草缓解关木通毒性可能在体内作用机制上，而不是在降低马兜铃酸 A 成分上。甘草酸是甘草最主要的活性成分，研究表明甘草酸对马兜铃酸 A 致肾小管损害有积极的保护作用11 。要明确甘草对关木通毒性的影响，还有待进一步研究。 关木通的毒性可以通过配伍而降低，充分体现了方剂的配伍特色。但其与甘草配伍后毒性反而增强，提示在注
13、意方剂配伍减毒的时侯，也要留意配伍增毒的可能，而且不能仅局限于十八反、十九畏的理论。在中医理论指导下，探索方剂配伍降低有毒中药的毒性，对于研究中药安全性，扩大此类中药的临床运用，促进中医药走向现代化有着重要意义。【参考文献】 1高学敏中药学（上册） M 北京：人民卫生出版社，2000：769 2王瑛，潘竞先，高建军，等.中药关木通中的抗肿瘤成分研究J.北京医科大学学报，2000，32（1）：18. 3陶靖环.龙胆泻肝汤致严重肾功能损害J 药物流行病学杂志，2004，l3（6）：351. 4李庆，杨素珍.龙胆泻肝丸致慢性肾衰竭病例报告J.中国中西医结合急救杂志，2003，10（6）：383. 5
14、王会玲，张金元，杜兰屏，等马兜铃酸肾病 44 例临床分析J.上海中医药杂志，2006，40（）：13. 6刘燕，王宝琴.马兜铃中马兜铃酸 A 的 HPLC 测定J.中草药，1990，21(6):15. 7焦一鸣，王放.谈龙胆泻肝丸的合理应用J.实用中西医结合临床，2005，5（3）：86. 8马红梅，张伯礼.关木通肾毒害及其防治J.中草药，2001，32（4）：369. 9张岩，刘养清 ，赵慧辉.中药配伍对关木通中马兜铃酸 A 含量的影响J.天津药学，2005，17（4）：3. 10杨蕾，李冀，肖洪彬.导赤散中不同配伍对关木通致小鼠肾毒性影响的实验研究J.中医药信息，2005，22(6)：50. 11王会玲，张金元，杜兰屏，等.甘草酸及肾十方治疗慢性马兜铃酸肾病 26 例疗效观察J 临床肾脏病杂志，2006，6（3）：118.
