1、实验 五,-疟原虫 Malaria Parasite -弓形虫 Toxoplasma-人芽囊原虫 Blastocystis hominis,. 掌握间日疟原虫(P.v)红细胞内期的形态特点。. 掌握恶性疟原虫(P.f)早期滋养体和配子体的形态特点。. 认识疟原虫在肝细胞内(即红外期)及在蚊体内发育阶段的形态特点。. 练习血片的制作及染色。. 熟悉弓形虫滋养体及包囊的形态特征。. 熟悉隐孢子虫卵囊形态特征，了解改良抗酸染色法。. 熟悉肉孢子虫卵囊、孢子囊形态特征。. 了解人芽囊原虫形态特征。 . 拷贝“标本复习”文件夹，做好考前复习。. 班长在下次实验课前2-3天，到106馆一楼准备室领取玻片和
2、透明胶。,the Purpose and Requirements,间日疟原虫(Plasmodium vivax,P.v),疟原虫生活史发育包括：,红细胞外期 Exoerythrocytic stage,-在肝细胞内进行裂体增殖；-间日疟原虫和卵形疟原虫速发型子孢子红外期发育的时间分别是6-8天和9天，而迟发型子孢子为数月至年余；恶性疟原虫6天，三日疟原虫11-12天。,红内期 Erythrocytic cycle,早期滋养体/环状体 Early trophozoit/ Ring form,晚期滋养体/大滋养体 Large trophozoite,裂殖体 Schizont,裂体增殖周期,配子体
3、 Gametocyte,P.v 红细胞内期发育,薛氏小点（红色）,疟色素（棕褐色）,-经姬氏或瑞氏染色，基本结构如下：,疟原虫,红细胞（红色）,红细胞变化,-被寄生红细胞变化：体积、颜色、薛氏小点-疟原虫：核数目、胞质形状、疟色素,( Early trophozoit/Ring form, R ),P.v 早期滋养体/环状体,. 核1个,. 胞质环形,胞质与核之间有空泡,呈戒指状,. 大小约为红细胞直径的1/3.,. 被寄生红细胞无明显改变.,( Large trophozoite, T ),P.v 晚期滋养体/大滋养体,. 核1个,. 胞质增多变形,形状不规则，有空泡，. 胞质内出现棕褐色烟
4、丝状的疟色素.,. 被寄生红细胞体积稍增大,色淡,出现鲜红薛氏小点.,( Young schizont, YS ),P.v 未成熟裂殖体,. 核分裂, 数目12个,.胞质分裂,围绕核,形成裂殖子,数目12-24个,.疟色素集中成1-2团，位于虫体中央或一侧.,. 被寄生红细胞体积增大,色淡,出现鲜红薛氏小点.,疟色素,雄配子体,雌配子体,.核1个,疏松,近中央,.核1个,致密,偏向一侧,.细胞质几乎充满胀大的红细胞，疟色素均匀分布于其中.,. 被寄生红细胞体积增大,色淡, 鲜红薛氏小点明显.,P.v 配子体(Gametocyte,G),恶性疟原虫Plasmodium falciparum,P.
5、 f,P.f 红细胞内期发育,36-48 h,外周血中不易见到！,P.f 早期滋养体/环状体,( Early trophozoit; Ring form, R ),. 核1个,. 胞质环形,胞质与核之间有空泡,呈戒指状,. 大小约为红细胞直径的1/5.,多虫型,双核型,边缘型,P.f 配子体(Gametocyte,G),疟色素集中于核的周围。,疟色素散于核的周围 。,-被寄生的红细胞因破裂而不见或仅见一部分。,一个红细胞被P.f and P.v 同时感染,一个红细胞有多个疟原虫寄生, 注意与裂殖体鉴别。,In female anopheline :在雌性按蚊体内发育,雄配子体出丝Exflage
6、llation of macrogametocyte,蚊胃上囊合子（卵囊）,卵囊,子孢子,-子孢子Sporozoite：,-子孢子为感染阶段；-间日疟原虫和卵形疟原虫子孢子具有两种类型：速发型和迟发型。,-Thin blood film / thick blood film stained with Giemsa or Wrights stain.,-Thick blood film,-Thin blood film,Laboratory diagnosis,-具体操作见后面实验操作。,刚地弓形虫Toxoplasma gondii,弓形虫滋养体-速殖子Tachyzoite,(吉氏染色),弓形虫
7、包囊Tissue cyst of Toxplasma gondii,弓形虫卵囊 Oocyst of Toxplasma gondii,改良抗酸染色法,.卵囊 Oocyst,隐孢子虫Cryptosporidium,猪人肉孢子虫Sarcocystis suihominis,肉孢子囊Sarcocyst,人芽囊原虫Blastocystis hominis,-碘染色,患者女性，47岁，因外伤于1997年4月5日入院手术。术前血常规，血红蛋白10.3g/L，红细胞3.351012/L，白细胞21.6109/L。术中输血400ml，术后第9天起不规则发热，实验室检查血红蛋白8.6g/L，红细胞2.71012
8、/L，白细胞15.2109/L，晚幼红细胞30/100个白细胞。成熟红细胞易见破碎红细胞，红细胞内查见疟原虫小滋养体，确诊为恶性疟。经三联抗疟治疗后痊愈。,Case discussion 1,思考题：1.该患者有可能经什么方式感染恶性疟原虫？ 2.本病的诊断依据是什么？ 3.恶性疟与间日疟的治疗一样吗？,患者男性，30岁，因头痛高热3天入院治疗，刚援非回国。血常规检查：血红蛋白15g/L，红细胞4.541012/L。入院后第2天出现昏迷，持继高热，反复多次镜检，于入院后第4天在红细胞内查见疟原虫小滋养体，同时在骨髓涂片中查见疟原虫小滋养体，确认为恶性疟原虫，会诊后确诊为恶性脑型疟。,Case
9、discussion 2,思考题：1.从疟疾流行区（如非洲）工作、旅游、学习归国的人员，如发现原因不明的高热，应考虑其可能患了什么病？应该做什么检查？ 2.试述脑型疟的临床表现及致病机制？,女，48岁，因右眼突然失明20余天入院。病人无诱因突然出现右眼失明，无眼部红、痛、闪光症状。入院后查：右眼视力：光感、外眼无异常，玻璃体出血。静脉点滴血栓通，口服活血化疲、软坚散结中药，右眼视力无提高。局麻下行“右眼玻璃体切割术”，手术顺利。术后第1天，右眼视力0.2，结膜充血，角膜透明；瞳孔药物性散大，玻璃体清亮，眼底见视盘界清，色正常，C/D = 0.2，视网膜动脉稍红，A: V=1:2，颞下方视网膜可
10、见陈旧性出血灶，考虑玻璃体出血即为此处出血灶渗入，局部伴色素沉着，脉络膜萎缩；术后第3天视力0.5；术后两次抽血查弓形体阳性（PCR法）。追问病史，病人儿童时期视力正常，近来病人有养猫史4年，最后诊断：右眼玻璃体出血；弓形体性视网膜脉络膜炎。,Case discussion 3,思考题：结合病例分析感染弓形虫的可能途径有哪些？,1. 临床疟疾发作与疟原虫的繁殖有何关系？2. 试讨论引起疟疾暴发性流行的原因。3. 简述如何诊断疟疾？4. 刚地弓形虫感染为何分布很广？试述弓形虫致病的特点？5.什么叫机会致病性原虫？有哪些常见的机会性致病原虫？6. 引起贫血的寄生虫有哪些？致病机理？,Questio
11、ns:,实验内容,（一）示教内容： 1.间日疟原虫红细胞内期各期，恶性疟原虫早期滋养体和配子体、疟原虫囊合子、子孢子以及红外期标本：油镜下观 2.弓形虫速殖子（吉氏染色）：油镜下观 3.隐孢子虫卵囊（改良抗酸染色）：图片示教 4.猪人肉孢子虫肉孢子囊：高倍镜下观,实验内容,（二）实验操作：薄血涂片制作与染色 1.鼠疟原虫（Plasmodium bergheri 伯氏疟原虫）接种小白鼠：取液氮保种的伯氏疟原虫，解冻后用生理盐水稀释。在无菌操作的条件下，给健康小白鼠作腹腔内注射，每只1ml，感染后3-5天，外周血即可查到原虫（由老师完成）。 2.薄血片制作：用剪刀剪去鼠尾未端少许，取洁净玻片一张，
12、从鼠尾取血一小滴置玻片中部，另取一张玻片作推片，将推片的短边接触血滴，待血液向两侧扩散后，以两玻片呈30-40角，将推片自右向左匀速快捷向前推进，即成薄血膜。理想的薄血膜应是血量和宽度适中，平滑不起波浪，未端成舌形。,Preparation of blood film and stain,-血涂片制作和染色,-血 涂片 制 作,Preparation of blood film and stain,1-3为薄血片制作；4-6为厚血片制作,实验内容,（二）实验操作：薄血涂片制作与染色,3.固定：待血片阴干后，用甲醇固定薄血膜，自然晾干。4.染色：按1毫升水加4滴吉氏原液的比例配制染液。将涂有血膜
13、的玻片血膜面朝下，一端架在铁丝上，用吸管滴注染液于玻板与血片之间，使染液与血膜完全接触，染色20min。5.自来水轻轻冲洗血膜，晾干镜检。,-镜下观察血片的操作步骤及注意事项,1. 10倍镜下经过观察后选择一较好的视野作为油镜下观察野，避免红细胞严重重叠或太稀少的视野.,-镜下观察血涂片的操作步骤及注意事项,2.油镜下观察时按固定方向，如从左到右或从右到左，将整张片观察完(约30min)，以避免在同一部位重复看。,1. 10倍镜下经过观察后选择一较好的视野作为油镜下观察野，避免红细胞严重重叠或太稀少的视野.,-镜下观察血片的操作步骤及注意事项,2.油镜下观察时按固定方向，如从左到右或从右到左，
14、将整张片观察完(约30min)，以避免在同一部位重复看。,1. 10倍镜下经过观察后选择一较好的视野作为油镜下观察野，避免红细胞严重重叠或太稀少的视野.,3.发现目标时，判断是否为疟原虫，注意与血小板、白细胞、淋巴细胞、细胞碎片、染液颗粒等鉴别。,-镜下观察血片的操作步骤及注意事项,2.油镜下观察时按固定方向，如从左到右或从右到左，将整张片观察完(约30min)，以避免在同一部位重复看。,1. 10倍镜下经过观察后选择一较好的视野作为油镜下观察野，避免红细胞严重重叠或太稀少的视野.,3.发现目标时，判断是否为疟原虫，注意与血小板、白细胞、淋巴细胞、细胞碎片、染液颗粒等鉴别。,4.肯定为疟原虫后
15、，再依据形态特征分析是R、T、YS、MS or G。,4.形态典型的拍片，存图。,实验内容,附：伯氏疟原虫(Plasmodium berghei)分布于非洲扎伊尔的加丹山区森林中，自然宿主为丛林鼠，蚊媒为杜氏按蚊。 红内期裂体增殖周期约24h，早期滋养体为典型的环状体，偶见双核型，晚期滋养体近似圆形，阿米巴样外形不典型，成熟裂殖体含裂殖子数在小鼠为6-10个，配子体形状类似人间日疟原虫。疟色素细小，黑色或金黄色。 多虫寄生在同一红细胞极为普遍(注意与裂殖体鉴别)。被寄生的红细胞胀大。 实验室里长期用红内期原虫转种，不易见到配子体。,实验内容,下课前特别要求： 一定要用擦镜纸蘸二甲苯擦拭油镜头和
16、高倍镜头！ 将标本归回到标本架上！要注意左右槽对齐插入！ 将自已制做的鼠疟原虫玻片放入铝锅内！,实验报告要求:-拍摄图片包括: P.v 的滋养体T、未成熟裂殖体YS、成熟裂殖体MS、配子体G中任选2个(如果找不到，可在自己做的鼠疟血片上观察拍片代替); P.f的R和G; 弓形虫滋养体.-标注虫期名称（不需标注结构名称），如下图。,特别强调：一定要用擦镜纸沾二甲苯擦拭干净油镜头和高倍镜头后，再离开教室。,附:本次课使用的缩写符号,-间日疟原虫 Plasmodium vivax, P.v-恶性疟原虫 Plasmodium falciparum, P. f -早期滋养体/环状体 Early trophozoit/ Ring form, R -晚期滋养体/大滋养体 Large trophozoite, T -未成熟列殖体 Young schizont, YS -成熟列殖体 Mature schizont, MS -配子体 Gametocyte, G-雄配子体 Microgametcyte， G-雌配子体 Macrogametocyte， G-雄性 -雌性 -红细胞 RBC,
