1、动态观察柴胡皂苷 a 对实验性癫痫小鼠痫性发作的影响【关键词】 柴胡皂苷 摘要:目的 研究柴胡皂苷 a(saikosaponin a,SSa)对戊四氮（PTZ）诱导的小鼠痫性发作的影响，了解其药效特点。 方法 采用 PTZ 诱导小鼠急性痫性发作来制作癫痫模型，通过记录不同时间点小鼠痫性发作潜伏期和强直性惊厥率的变化，研究 SSa 抗小鼠 PTZ 致痫作用的动态特征。结果 SSa 腹腔注射 30、60、90 min 组能显著延长阵发性痉挛潜伏期（P0.05） ，其中 SSa 90 min 组作用最为显著（P001） 。在60、90、120 min 组中，SSa 腹腔注射也能明显延长强直性惊厥潜伏
2、期（P0.05） ，其中尤以 90 min 组作用显著(P001); SSa 90 min 组对过渡时间延长作用显著（P0.05） ；SSa 30 min、60 min 组能减少PTZ 致痫小鼠强直性惊厥发作例数（P005） ，且以 SSa 60 min 组作用最为显著。结论 SSa 具有对抗小鼠 PTZ 致痫作用；腹腔注射 SSa 对 PTZ诱导小鼠的痫性发作在 120 min 内以 60 min、90 min 药效作用较强。 关键词:实验性癫痫;柴胡皂苷 a; PTZ;小鼠 Abstract: Objective To study the dynamic variations of the
3、 effect of saikosaponin a (SSa) on epileptic mice induced by pentylenetetrazol（PTZ）,and to understand the effect characteristics of SSa. Method With the epileptic mice induced by PTZ as animal model. In the different time point,the tentative seizure incubation period and the case of tetanic convulsi
4、on were recorded to study the characteristics of the antiepileptic effect of SSa on mouse induced by PTZ. Results In the group of 30min,60 min and 90 min,the incubation period of clonic cramp was significantly prolonged by SSa (P0.05),and in the group of 90 min,the effect was remarkable (P0.01). Als
5、o,intraperitoneal injection of SSa could prolong the incubation period of tetanic convulsion in the group of 60 min,90 min and 120 min (P0.05).The effect was especially evident in the group of 90 min (P0.01). In the group of 90 min,the transition time was remarkably prolonged by SSa (P0.05). In the
6、group of SSa 30 min and SSa 60 min,SSa could reduce the tetanic convulsion of epileptic mice introduced by PTZ (P0.05),and the effect is more significant in the group of 60min than that in the group of 30min. In the group of 30 min and 60 min,SSa could protect the epileptic mice introduced by PTZ fr
7、om tetanic convulsion more significantly than those in the group of 90 min and 120 min.Conclusions SSa can inhibit the epileptic mice induced by PTZ,SSa can protect the mouse from tetanic convulsion,and in 2 hours,the effect was more remarkable at 60th min,90th min than others. Key words: epilepsy;
8、Saikosaponin a; PTZ; mice 柴胡皂苷（saikosaponin）为中药柴胡的主要成分之一，其单体成分之一的柴胡皂苷 a(SSa)有降血脂、抗渗出、抗肉芽肿和保护肝细胞等作用1 ，对于慢性肾病的治疗也有较好疗效2，3 ，但目前尚没有SSa 抗癫痫作用的报道。不过已有不少证据表明柴胡及柴胡总皂苷具有镇静和抗实验性癫痫的作用4，5 。在柴胡皂苷单体各成分中，为明确何种皂苷单体具有抗癫痫作用，笔者研究了 SSa 对 PTZ 致痫小鼠痫性发作的影响，并探讨 SSa 对痫性发作影响的不同时间的动态变化，以期了解SSa 抗癫痫药效作用的时间特点。 1 材 料 1.1 动物 健康昆明种
9、小鼠 180 只，雌雄各半，体质量（202）g,由南方医科大学动物实验中心提供，合格证号为 2004A063。 1.2 主要试剂 柴胡皂苷 a 购自上海医药工业研究所，批号 050106；丙戊酸钠（VPA）注射剂（德巴金）由杭州赛诺菲圣德拉保民生制药有限公司生产，批号 0402049。 戊四氮由美国 Sigma 公司生产，批号 064k0686。 2 实验方法 2.1 实验动物分组 将 180 只昆明小鼠随机分为 9 组，每组 20 只，雌雄各半。A 组:生理盐水组（生理盐水+ PTZ 致痫） ，作为以下各组的对照组；B、C、D、E组分别为经 SSa 预处理 30、60、90、120 min
10、组（SSa 30 min、SSa 60 min、SSa 90 min、SSa 120 min + PTZ 致痫） ；F、G、H、I 组分别为经VPA 预处理 30、60、90、120 min 组(VPA 30 min、VPA60 min、VPA90 min、VPA120 min + PTZ 致痫)。 2.2 模型制备及给药方法 A 组小鼠在腹腔内注射生理盐水（10 mL/kg）后 30 min 时腹腔注射PTZ（85 mg/kg）致痫；B、C、D、E 组小鼠分别在腹腔注射 SSa（7.24 mg/kg）后 30、60、90、120 min 时腹腔注射上述剂量的 PTZ 致痫；F、G、H、I 组
11、小鼠分别在腹腔注射 VPA (200 mg/kg)后 30、60、90、120 min 时腹腔注射上述剂量的 PTZ 致痫。 2.3 观察指标 小鼠痫性发作分级采用 Racine 标准4 。0 级：无发作反应；1 级：节律性口角、耳或面部肌肉抽动阵挛；2 级：点头并伴随更严重的面部肌肉抽动阵挛；3 级: 出现前肢阵挛但不伴随直立；4 级：前肢阵挛伴随直立；5 级：全身强直阵挛发作而跌倒。腹腔注射 PTZ 后立即观察小鼠的行为动作，连续 10 min，记录小鼠痫性发作潜伏期，包括阵发性痉挛潜伏期（即从注射 PTZ 开始至相当于 13 级发作的时间） 、强直性惊厥潜伏期（即从注射 PTZ 开始至相
12、当于 5 级发作的时间） ，计算由阵发性痉挛向强直性惊厥发作的过渡时间；并记录发生强直性惊厥的例数，计算其发作率。 2.4 统计学处理 应用 SPSS10.0 软件，多样本均数的比较采用方差分析，计数资料及率的比较用卡方检验，以 P005 为差异有显著性。 3 结 果 3.1 SSa 对 PTZ 致痫小鼠痫性发作潜伏期的动态影响 将对应时间点 SSa 预处理、VPA 预处理组与生理盐水组比较，B、C、D、F、G、H 各组阵发性痉挛潜伏期明显延长，与 A 组比较差异有显著性（P0.05） ，其中尤以 D、F、G 组差异显著（P0.01） ；C、D、E、F、H 组强直性惊厥潜伏期同样延长，与 A
13、组比较差异有显著性（P0.05） ，其中尤以 D、F 组差异显著(P001)；在过渡时间的比较中，D、F 组与 A 组比较差异均有显著性（P0.05） ，其中尤以 F 组差异显著(P0.01)。将对应时间点的 SSa 组与 VPA 组比较，30 min 时 SSa 组对各潜伏期的延长作用不如 VPA 组(P001)，其余各时间点比较差异无显著性。见表 1。以上结果提示，SSa 不仅能明显延长阵发性痉挛潜伏期，而且能够显著延长强直性惊厥潜伏期及其过渡时间，其作用在60 min、90 min 时强于 30 min、120 min 时，而 VPA 的作用以 30 min和 60 min 强于 90
14、min 与 120 min，可见 SSa 达到最佳作用的时间比 VPA延后。表 1 SSa 对 PTZ 致痫小鼠痫性发作潜伏期的动态影响（略） 3.2 SSa 对 PTZ 致痫小鼠强直性惊厥发作例数的动态影响 根据小鼠 10 min 内在 PTZ 诱导下出现强直性惊厥的例数，将对应时间点 SSa 预处理组、VPA 预处理组与生理盐水组比较，SSa 与 VPA 预处理30 min、60 min 组出现强直性惊厥例数与生理盐水组比较差异有显著性，其作用优于 90 min、120 min 组。见表 2。表 2 SSa 对 PTZ 致痫小鼠强直性惊厥发作例数的动态影响（略） 4 讨 论 PTZ 为很强
15、的致痫剂，其致痫模型被认为是理想的全身强直性惊厥发作模型之一,PTZ 本身无特殊的神经毒性作用6,所以被广泛应用于癫痫发病机理的研究、抗癫痫药物的筛选。当 PTZ 诱发小鼠癫痫发生时，其痫性发作的特点是初期以阵挛性发作为主，很快以全身强直性惊厥发作为主要特点，根据其发作特点，在本研究中以这 2 种发作形式为指标并结合目前公认的 Racine 标准来分析其痫性行为。 VPA 是临床常用抗癫痫的主要药物之一，有广谱抗癫痫作用，对单纯失神发作及全身强直阵挛(惊厥)发作疗效最好，对单纯及复杂部分性发作、肌阵挛性发作等也有良效。有文献研究 VPA 在大鼠血清和脑脊液浓度变化时发现，脑脊液内最高药物浓度低
16、于血清浓度，且其达到最高药物浓度时间迟于血清药物最高浓度，其半衰期约为 60 min7 。本研究也证实 VPA 既能延长阵发性痉挛、强直性惊厥的潜伏期，也能抑制强直性惊厥发作率，明显减少惊厥发生例数，其作用以 30 min 和 60 min 时尤为明显，与文献报道一致。本研究结果显示，SSa 不仅能明显延长小鼠阵发性痉挛的潜伏期，而且能够显著延长强直性惊厥的潜伏期及其过渡时间，能明显减少小鼠发生强直性惊厥的例数，抑制惊厥发作率，其作用在 60 min、90 min 时较强。提示 SSa 具有较好的抗实验性癫痫作用，可能对肌阵挛性发作、全身强直阵挛发作有效。就本研究给出的剂量而言，30 min
17、时 SSa 对小鼠各潜伏期的延长作用不如 VPA，但随着时间的延长，SSa 在 60 min、90 min 时对潜伏期的延长明显，可能与 SSa 的起效作用较慢有关。至于 SSa 的代谢特点，有研究显示其口服代谢时与消化道的菌群有密切关系8 ，其代谢呈现时间依赖性，早期有学者将其在体外胃液及肠道细菌共同培养发现 SSa 在 3 h 内完全被代谢，而转化为其他类型的皂苷或苷元9 。 但 SSa 在血清及脑脊液中的变化情况如何，其代谢与药效作用是否相关，以及 SSa 能否在更长的时间内维持其作用，还有待进一步研究。 参考文献: 1欧明，林励，李衍文.简明中药成分手册M.北京：中国医药科技出版社,2
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19、痫大鼠的治疗作用J.中药药理与临床,2000,16：28. 5黄运生，谢炜，陈宝田.柴胡皂苷对癫痫大鼠脑电图影响J.第一军医大学学报,2004,24(12)：1 379. 6HOLMES G L. Seizureinduced neuronal injury animal data J.Neurology，2002,59(suppl 5):S3. 7龙小艳，章蓓，肖波.丙戊酸在癫痫大鼠海马的神经药代动力学特征J.脑神经杂志，2002，10(6):330. 8严梅桢.人肠道菌对柴胡皂苷的代谢J.国外医学：中医中药分册，2001,23 (3) :156 9SHIMIZU K,AMAGAYA S,OGIHARA Y. Structural transformation of saikosaponins by gastric juice and intestinal floraJ. J Pharmacobiodyn,1985,8(9):718.
