1、儿童急性感染人类偏肺病毒的诊断及临床分析摘 要：目的：总结人类偏肺病毒急性感染患儿的诊断经验和临床特点。方法：采用直接免疫荧光法对 79 例急性感染人类偏肺病毒的婴幼儿进行快速诊断，及时给予抗病毒治疗及对症治疗。结果：79 例患儿，临床诊断为肺炎 22 例，支气管肺炎 18 例，毛细支气管炎 17 例，急性支气管炎 11 例，喘息性疾病如哮喘、喘息性支气管炎等 11 例，全部患儿痊愈，未出现并发症，病程 521 d，平均住院天数 8 d。结论：采用直接免疫荧光技术检测人类偏肺病毒抗原，操作和实验方法简便，诊断快速准确，有利于早期病因治疗，缩短病程，具有重要的社会经济效益。关键词：婴幼儿；人类偏
2、肺病毒；直接免疫荧光；诊断 呼吸道病毒是婴幼儿冬春季感染性疾病的主要病原，研究表明以呼吸道合胞病毒（RSV）和流感病毒（Inf） 较常见，但是有部分患者仍无法确定其病原。人类偏肺病毒（Human metapneumovirus，hMPV） 归属于副黏病毒科偏肺病毒属，是偏肺病毒属里的第一个被发现能够引起人类致病的病原体。它可以部分解释以前不能诊断的病例，无疑减少了呼吸道感染中病原未明者的比例，同时也提示了要重新对各种呼吸道病毒在呼吸道感染中的作用进行评估，对完整认识儿童呼吸道感染的病毒病原谱是很好的补充。分析浙江大学医学院附属儿童医院收治的 79 例 hMPV感染的患儿资料，总结相应的诊断经验
3、和临床特点，以期早诊断，早治疗，缓解症状，减少交叉感染机会。1 资料与方法1.1 一般资料：选取 2010 年 10 月2011 年 1 月间因急性呼吸道感染入院治疗的患儿，共计 864 例，年龄 1 个月14 岁，中位年龄 2 岁。诊断参照实用儿科学的相关标准1：急性起病；临床表现为咳嗽、咯痰或发热等呼吸道症状；X 线及实验室检查符合呼吸道感染征象。1.2 诊断方法：入院 24 h 内即采用无菌负压抽取痰液法，将塑料导管经患儿鼻腔插入 78 cm 达到咽部以下，吸取鼻咽部分泌物 12 ml 至无菌的 0.9% NaCI 溶液吸瓶中送检，样本置离心管中用漩涡混合器震荡成悬液，1 500 r/m
4、in 离心 10 min，弃上清液和黏液层，沉淀物加适量PBS 调整至适当细胞浓度，微管吸取上述纤毛柱状上皮细胞悬液制作细胞片，在样片上点样，每点加 25 l 细胞悬液，自然干燥，冷丙酮固定 10 min，风干。在样片和对照片的每个细胞点加 l 滴 hMPV 荧光抗体，37温盒孵育 30 min，用洗涤液洗涤后加 1 滴封闭液，封片后在荧光显微镜下观察结果。D3-DFA hMPV 抗原免疫荧光检测试剂盒购自美国 DHI 公司，以上步骤均按说明书进行操作，采用试剂盒内阳性和阴性对照标准，并按阳性标准（200 倍显微镜下每视野找到2 个绿荧光细胞即为阳性）判断结果。荧光显微镜为日本 Olympus
5、 BX60。2 结果对 864 例患者的痰液标本进行 hMPV 抗原检测，有 79 例呈阳性，占9.14%，被 hMPV 病毒感染的上皮细胞均显示典型的绿色颗粒状荧光。79例患儿中，男 52 例，女 27 例，男女比例约为 2:1，年龄 2 个月4 岁 3个月，中位年龄 10 个月，其中2 岁的患者占 90%。入院后体温高热（39以上）2 例，中等热（3839）29 例，低热（38以下）40例，体温正常 8 例，平均退热时间 2.5 d。实验室检查，白细胞计数大部分在正常范围或偏低，咽部痰液培养阴性，衣原体、支原体和 7 种常见呼吸道病毒检测（RSV，甲、乙型流感，、型副流感，腺病毒）均阴性。
6、临床诊断为肺炎 22 例，支气管肺炎 18 例，毛细支气管炎 17 例，急性支气管炎 11 例，喘息性疾病如哮喘、喘息性支气管炎等 11 例。确诊 hMPV 病毒感染后及时给予利巴韦林或干扰素抗病毒治疗，辅以对症治疗，对发热、呕吐、腹泻等给予相应处理，对痰液黏稠不易咳出或憋喘的患者行雾化吸入治疗，以症状消失、体温正常、复查胸片明显好转作为痊愈标准。所有患者均痊愈，未出现并发症，病程 521 d，平均 8 d。3 讨论hMPV 是 2001 年由荷兰学者 Van den Hoogen 等从呼吸道感染的儿童中首先发现并报道，近年来世界各地均有 hMPV 感染流行病学报道，提示该病毒的全球流行2。目
7、前研究表明 hMPV 感染的流行病学特征和临床表现与 RSV 感染相似，主要在冬春季流行，是社区儿童感染的重要病原，可以在任何年龄组引起感染，5 岁以下儿童是易感人群。据统计北京地区冬春季 6 岁以下呼吸道感染儿童鼻咽洗液常见病毒阴性者中 hMPV 阳性率达 30%3。在临床工作中，hMPV 感染患者症状各异，轻者表现为咳嗽、发热和流涕等上感症状，重者表现为下呼吸道感染，可诱发毛细支气管炎、肺炎和哮喘等喘息性疾病，Garcia-Garcia 等提出 hMPV 是引起哮喘的诱因之一。本研究检测到的 hMPV 感染患者年龄多在 2 岁以下，提示婴幼儿感染更为普遍，临床诊断以肺炎、支气管肺炎和毛细支
8、气管炎多见，另外在喘息性疾病如哮喘、喘息性支气管炎患者中也检出阳性病例，与国外文献报道相似，提示 hMPV 感染可能是引起儿童喘息性疾病的诱因之一4。近年来国内外学者报道多种检测 hMPV 的方法，传统病毒分离方法可用于检测活病毒，RT-PCR 可检测病毒 RNA，但 hMPV 在细胞培养中生长缓慢，且条件要求高，PCR 方法虽然快捷方便，但不同病毒诊断实验室间质量控制水平参差不齐，都很难在临床广泛推广5。本研究采用直接免疫荧光法，其原理是用 FIFC 标记的 hMPV 病毒特异性单大隆抗体与细胞中相应的病毒抗原结合下，形成抗原抗体复合物，荧光显微镜下细胞内显示苹果绿荧光，研究认为该法的敏感性
9、可达 94.1%，特异性为 96.8%6。荧光显微镜直接观察病毒病原体，特异性高，诊断直观快速，实验条件简便，对于急性呼吸道感染者可以早发现、早治疗，减少住院时间及不必要的抗生素治疗，值得在临床推广应用。hMPV 作为新发现的感染人类的肺病毒，目前临床缺乏明显有效的治疗药物和预防 hMPV 感染的特异疫苗，主要采用常规的抗病毒和对症支持治疗，防治并发症，因此加强早期快速、规范化的诊断和隔离显得尤为重要，其病原学、流行病学和临床特征都有待进一步深入的研究。4 参考文献1 胡亚美,江载芳,诸福棠.实用儿科学M.第 7 版.北京:人民卫生出版社,2008:1169.2 Van den Hoogen
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11、etapneumovirus infections in hospitalized in-fants in SpainJ.Pediatr Pulmonol,2006,41(9):863.5 Pilger DA,Cantarelli VV,Amantea SL,et al.Detection of human bocavirus and human metapneumovirus by real-time PCR from patients with respiratory symptoms in Southern BrazilJ.Mem Inst Oswaldo Cruz,2011,106(1):56.6 Aslanzadeh J,Zheng X T,Li H J,et al.Prospective evaluation of rapid antigen ests for diagnosis of respiratory syncytial virus and human metapneumovirus infectionsJ.J Clin Microbiol,2008,46(5):1682.
