1、检测肺炎链球菌分布病原分离鉴定和耐药肺炎链球菌是一种可以引起人类患病的条件致病菌,该菌属于链球菌科的链球菌属,又称肺炎链球菌。肺炎链球菌主要寄生于人类上呼吸道的口腔鼻咽部,作为正常菌群存在爿:不引起疾病,当机体免疫力下降时,可引起大叶肺炎化脓性脑膜炎中耳炎+心内膜炎等甚至败血症。肺炎链球菌引起的脑膜炎在细菌性脑膜炎中死:率最高,为 19%，是常见的机会致病芮。长期以来,由于肺炎链球菌生存条伺:较高，属兼性厌氧菌,又可产生自溶酶,菌落形态与甲型链球菌相似，因此检测时有误检和漏检现象。近年来,随着分离和鉴定技术的不断完善,对肺炎链球菌的检出卒逐年提高,而且耐药率也逐年上升,这与肺炎链球菌的分离鉴定
2、刀:平及滥用抗生素有关，现将我院检出的肺炎链球苗 185 株的分布病原分离鉴定及耐药性分析如下： 1 临床资料 1.1 发病情况 标本来源于吉林大学白求恩医学院附属医院，门诊及住患者 185 株肺炎链球菌阳性标本，年龄最小 2 岁，最大 71 岁，平均年龄 37 岁，以儿童及老年人居多。其中痰培养 108 株(58%)，脑脊液培养 23 抹(1:%)，其他部位脓性分泌物 49 株(30%)，全部病两均川 12 种厂谱抗生素治疗，同时配合辅助使用过糖皮质激素。 1.2 临床表现及实验室检测 患者均有化脓性感染病灶,高热.体温 2840T;白细胞数，12-23109/L，分类:中性粒细胞 60%9
3、0%，有呼吸道症状感染者,咳铁锈包痰或黄色脓性痰，化脓性脑膜炎患者脑脊液呈黄色,潘氏反应(+)，细胞数，1000106/L:分类:中性粒细胞 80%90%，葡萄粮降底,1.5mmom/L。 1.3 仪器和试剂 微生物分析仪为生物梅里埃生产的 Vitek-2，乏敏培养基及药敏纸片坫由北京药物技术开发部提供 CO2 培养箱由上海一恒科技有限公司生产血液分析仪为日本生产的 Sysmex-XT-2000 全自动血液分析仪生化分析仪为日本生产的 AU640 2 实验室检查 2.1 镜检 取纯培养物涂片革兰氏染色及荚膜染色镜检发现:该菌为革兰氏阳性球菌成双排列,呈矛头状,钝端相对,尖端相背,有较宽的荚膜可
4、初步报告找到革兰氏阳性双球菌,疑似肺炎链球菌2.2 荚膜肿胀试验 先将痰液置于盐水中洗涤,以除去唾液,脓液或脑脊液可直接进行试验,直接涂片发现有疑似肺炎链球菌时,可将标本少许置于玻片上,加少量未稀释的肺炎链球菌抗血清混匀,再滴加少量美蓝混合,口盖玻片,以油镜检查，若荚膜显著肿大,菌体周围有一无色宽的环状带,菌体无变化,且染成蓝色,此即荚膜肿胀试验阳性,可初步确定为肺炎链球菌 2.3 分离鉴定 取铁锈色或脓性痰或化脓性脑膜炎的脑脊液及其他部位化脓性分泌物接种于血平板中,于 35二氧化碳培养箱中培养1824h,可形成细小,圆形,表面光华,灰白色,半透明,直径约为 0.51.5mm 的菌落,在菌落周
5、围有草绿色溶血环,菌落开始为扁平,培养较久后,由于细菌自溶现象,中心塌陷,边缘隆起,呈脐窝状,可再一步确定为肺炎链球菌。 2.4 生化反应 将纯培养物接种于微量生化管中, 37C 培养lg24 l 该菌可发酵葡萄糖,乳糖麦芽糖,和蔗糖产酸不严气,大多新分离的菌株能分解葡萄糖(亦有少量不分解者),不液化明胶,不产生吲哚,对于乳发酵不定,不能在 6.5%NaG 肉汤中生长,可产生自溶酶胆汁胆盐或表面活性物如皂角苷等,可加速其自溶作用,促使其在短期内自溶，几乎所有该菌对 Optoehin 敏感，可进一步确定为肺炎链球菌。 2.5 动物致病试验 取分离株 18h 肉汤培养物 0.10.5 汕注入182
6、0 9 健康的小白鼠腹腔或皮下,有毒力的肺炎链球菌可使小白鼠在接种 4Sh 出现症状,1824h 因败血症而死亡,作心血培养可获纯种细菌,用心血或腹腔液作涂片,革兰氏染色,可见典型有荚膜 C 阳性双球菌。2.6 药物敏感试验 采用 WHO 推荐(NCCL)制定标准(2001 年版)进行药敏试验。 3 结果 3.1 肺炎链球菌的来源分布 两年来我院从患者呼吸道脑脊液及其他部位感染性分泌物中检出 185 株,呼吸道 108(58%),脑脊液 23 株(12%),其他部位感染 49 株(30%),表明肺炎链球菌是引起人类感染性疾病的重要病原菌。 3.2 肺炎链球菌的药敏结果 对所分离的 185 株肺
7、炎链球菌进行 11 种抗菌药物的药敏试验测定,其耐药阳性率见表 1。 表 1 （185 株）不同来源肺炎链球菌的耐药率（%） 注：青霉素（PNE）氨苄青霉素/舒巴坦（SAM）万古霉素（VAN）头孢曲松 环丙沙星 阿卡星 左氧沸沙星 (LVX)红霉素（ERY）四环素（TET）利福平（RIF）氯霉素（CHL） 。 4 讨论 本研究显示，肺炎链球菌是人体感染性疾病重要的病原菌，分布比较广泛,本资料显示,上呼吸道检出占 58%，脑脊液检出占 12%，其他部位 30%肺炎链球菌是人体感染性疾病不可忽视的病原菌，在疾病的诊治中应注意其分离鉴定，由于肺炎链球菌有比较厚的荚膜,因此具有较强的耐药性，药敏结果显示,多种抗菌药物的耐药牢明显上升，特别是对青霉崇 G 的耐药宰由报道的 4.8%9.7%上升到 25.4%。有些菌株除对青 C 耐药外，对四环素,红霉素.氯霉素,环丙沙星,利福平,头孢曲松,头孢塞肟等产生多重耐药j肺炎链球菌的主要耐药机制是 PBP 发生改变,使青霉素 C 结合力下降,肺炎链球菌的高耐株常对广谱头孢菌素,头孢塞肟,头孢曲松亦同时耐药,并且有逐年上升趋势因此加强对肺炎链球菌分用鉴定及耐药谱的检测有重要意义。
